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PRODUCCION DE PENICILINA
Definición y Procedencia. Un antibiótico es una sustancia química producida por un organismo
vivo que muestra actividad inhibidora o germicida frente a microorganismos. La actividad
antibiótica se califica en ocasiones de: antibacteriana, antifúngica o antimicrobiana.
Producción de antibióticos. Los antibióticos son producidos por ciertos hongos, bacterias,
actinomicetos, algas y líquenes.
En la producción de antibióticos muchos de los detalles específicos siguen siendo, con algunas
excepciones secretos industriales.
1) Aislamiento de mohos.
b) Las cajas petri con sembrado de bacterias se incuban a 2º ó 37ºC durante uno a dos días,
después se deja caer sobre la superficie pequeñas partículas de suelo (fresco o enriquecido),
se deja incubar por espacio de 5 a 10 días.
c) Después de los días indicados se observan las cajas petri, los organismos antagonistas
producirán zonas claras alrededor de sus colonias como resultado de la inhibición del
crecimiento de las bacterias adyacentes o de su destrucción.
d) Estos microorganismos (mohos) se aislan en colonias o cultivos puros y se analiza las
características deseadas de las razas productoras de penicilina, que son principalmente del
grupo Penicillium notatun – chrysogenun.
e) Pruebas de selección del moho aislado: Esta prueba se realiza en medio de cultivo de
bacterias (Staphylococcus aureus). Para ésto el cultivo de moho aislado se somete a
crecimiento en un medio que se prepara de la siguiente forma: se añade 1% en volumen de
líquido de remojo de maíz (55% de sólidos) a la solución ezapek ajustando el pH a 7,
adicionando 2% de agar y distribuyendo 20 ml. en cada tubo de ensayo, luego se vierte en
cajas petri y se siembra el moho aislado y se incuba; al mismo tiempo se preparan placas
testigo con dos cultivos diferentes de P. Notatun o P. Chrysogenun conocidos como buenos
productores de penicilina, cada placa se debe incubar por espacio de 6 días a 24ºC. Al final
del periodo de incubación se cortan 4 o 5 muestras con un sacabocados y se coloca en la
superficie del medio de agar sembrado con Staphylococcus aureus, las plazas se incuban
durante una noche a 37ºC y las zonas de inhibición se mide empleando una lupa con una
precisión no inferior a 0,25mm. y los resultados se comparan con los testigos.
P. Notatun y P.Crysogenun.
Se tiene varios métodos de esporulación de los cuales se expondrá uno de ellos. Para el medio
de esporulación se cortan en cubos de un centímetro de lado pan integral fresco (libre de
inhibidos de mohos) y se esteriliza con vapor en capas finas en matraces Erlenmeyer. El pan
enfriado se inocula masivamente con esporas de mohos y se incuba a 25º - 27ºC durante 4 - 5
días, después de sacar los cultivos de pan se puede guardar durante al menos dos semanas a 40º
El plan cubierto de esporas se puede pulverizar perfectamente a los 6 – 7 días y se usa para la
inoculación.
En métodos de cultivo sumergido al medio de inolución se puede hacer con esporas secas, con
esporas sin germinar, en suspensión o con gránulos inoculantes.
En un procedimiento de producción de penicilina, las esporas del moho se usan para sembrar un
medio de germinación de matraces, después de un periodo de incubación en el sacudidor se
transfiere los contenidos de los matraces a recipientes especiales de metal, este tanque especial se
conecta acépticamente al tanque de siembra y se impulsa al interior del fermentador la suspensión
del moho utilizando aire estéril.
Fuentes de nitrógeno. Las sustancias usadas como fuente de nitrógeno son: nitrato sódico,
sulfato, acetato, y lactato amónico, líquido de remojo de maíz y otros materiales.
Elementos minerales. Ciertos elementos (P, K, Mg, S, Mn, Cu) parecen esenciales o al menos
beneficiosos para la producción de penicilina, aunque algunos de ellos se encuentran en el líquido
de remojo de maíz. Los diferentes minerales se suministran en forma de Kh 2PO4, MgSD4, 7H20.
Las concentraciones de estas sales en el medio son: KH 2PO4, 0,019 M, MgSO47H20 0,002 M y
NaN03 0,019 M.
Líquido de remojo de maíz. El uso de líquido de remojo de maíz en el medio de fermentación,
aumenta grandemente los rendimientos de penicilina, el líquido de remojo de maíz debe tener la
siguiente composición:
Sólidos 40 – 60%
Acido láctico 12 – 27% x
Nitrógeno total 7,4 – 7,8% x
Nitrógeno amínico 2,6 – 3,3% x
Azúcar reductor en glucosa 1,5 – 14% x
Cenizas 18 – 20% x
x = referido a producto seco.
Harina de semillas de algodón. Puede usarse como sustituyente del líquido de remojo de maíz.
Condiciones de fermentación.
Temperatura. La temperatura óptima para la producción de penicilina parece ser de 24ºC.
Regulación de pH. Es esencial la regulación de pH durante la fermentación, ya que un pH alto o
bajo origina considerables pérdidas de penicilina.
El pH de fermentación debe mantenerse de 5 a 7.5.
El pH del medio resulta afectado por el tipo y cantidad de azúcar presente, cantidad de líquido de
remojo de maíz, existencia de amortiguadores, etc.
Aireación. La adecuada aireación es esencial para mantener rendimientos óptimos de penicilina
ya que los mohos son microorganismos aerobios.
Taylor describe en un método usado por él, que es conveniente una insuflación de aire 11.500
litros por hora para un fermentador de 20.000 litros de capacidad.
Presión. El uso de presión en los tanques para incrementar la efectividad de la aireación es una
práctica común en los procesos de producción.
Agitación. El uso de un tipo apropiado de agitación y a una velocidad adecuada suele mejorar los
rendimientos de penicilina, pues comunica una velocidad de aireación constante durante la
fermentación.
Entre las sustancias antiespumantes que se usan están las siguientes: Citrato de tributilo,
octadecanol, en solución al 3% en aceite de manteca de cerdo, octadecanol al 3% en aceite de
soya.
Prevención de la contaminación. Es muy importante prevenir la contaminación del medio de
fermentación, la contaminación produce la rápida destrucción de la penicilina, para evitar se debe
esterilizar todos los tanques de fermentación, tuberías o instalaciones en las que puede tener
contacto la penicilina. Es necesario utilizar aire esterilizado para la aireación, los agentes
antiespumantes también se deben esterilizar antes de introducir al tanque de fermentación.
La primera fase es el proceso de recuperación es la separación del micelio o células por filtración
o centrifugación. Se pueden usar filtros contínuos de vacío, filtros de Bird-Young, centrífugas de
cesto u otra instalación, dependiendo de la naturaleza de las células. La segunda fase importante
consiste en extraer el antibiótico del medio de producción agotado, con disolventes, por
adsorción, por precipitación o por una combinación de estos métodos.
La extracción en disolventes puede efectuarse en extractores a cortacorriente como los del tipo
Podhielniak, en tornos, en frascos, en el sistema de distribución de Graig o de otras formas
dependiendo del volumen del material y del objetivo perseguido. Para la extracción se puede
usar acetato de amilo, éter, cloroformo, acetona y otros disolventes según la solubilidad del
antibiótico, posibilidad práctica, y otros factores. La temperatura, la regulación del pH son
factores muy importantes para la consecusión de elevados rendimientos de extracción de
antibióticos.
La adsorción se puede realizar sobre carbón activo, resinas de intercambio iónico u otros
materiales.
Puede ser considerada como atóxica, ya que es posible administrar dósis muy grandes durante un
periodo de tiempo sin efectos perjudiciales. En un pequeño porcentaje se pueden presentar
alergias individuales a la penicilina. Urticaria, ardor y picazón son algunas de las respuestas que
se observan en personas sensibles.
Es inestable frente a un gran número de agentes por Ej. la descomponen los ácidos y alcalis
fuertes. Se inactiva por los agentes oxidantes, debe evitarse el contacto con ciertos metales
pesados como cobre, plata, plomo y mercurio ya que tienden a destruir la penicilina. Destruye
también la penicilinasa, enzima producida por algunos mohos, levaduras y bacterias. Las
soluciones acuosas de la penicilina son inestables y se debe conservar refrigeradas, también el pH
influye en la estabilidad de la solución acuosa.
Tipos de penicilina. Los tipos más comunes de penicilina son: Penicilina F, G, X, K., cuyas
estructuras se indicarán después.
La mayor parte de las penicilinas son mezclas generalmente de los tipos F, G, K, aunque la
penicilina G es la que se produce en mayor cantidad y la que se considera más práctica. La
penicilina G sódica cristalina debe contener al menos 90% de penicilina G.