Estudio bioquímico de los niveles de HDL,

colesterol y triglicéridos en suero sanguíneo

Materiales:
Se midieron los niveles de colesterol, HDL y triglicéridos en el suero de dos pacientes, S1 y S2.
Para ello se usaron tres kits comerciales suministrados por Cromatest, perteneciente a Linear
Chemicals S.L.:
- Kit CHOLESTEROL MR (REF 1118005): basado en un método enzimático
colorimétrico a punto final, en el que se emplearon las enzimas colesterol esterasa (CE),
colesterol oxidasa (CO) y peroxidasa (POD). El esquema de las reacciones es el siguiente:

Se pipetearon en distintos tubos los volúmenes mostrados en la siguiente tabla:

Tubos Blanco Muestra Patron

Monoreactivo 1 mL 1 mL 1 mL
Muestra 10 µL
Patrón 10 µL
Agua destilada 10 µL

Tras esto se incubaron los tubos durante 10 minutos. La quinoaimina, producto final de
la última reacción catalizada por POD, presente un máximo de absorbancia a 500 nm que
puede ser cuantificado mediante un espectrofotómetro. A mayor absorbancia mayor será
la cantidad de colesterol presente en la muestra. La fórmula usada para la obtención de
los valores de colesterol en mg/dL es la siguiente:

La concentración del patrón era de 200mg/dL.

- Kit HDL-CHOLESTEROL (REF 1133010): al igual que el anterior se basa en un
método enzimático colorimétrico a punto final. Primero se llevo a cabo una precipitación
selectiva de las proteínas poseedoras de apoproteínas-B, como HDL, mediante la acción
del ácido fosfotungstico/Cl2Mg (reactivo precipitante). Para ello se pipetearon 0,2 mL de
muestra o patrón junto con 0,4 mL del reactivo precipitante. Ambos tubos se incubaron
durante 10 minutos y posteriormente se centrifugaron a 12000 r.p.m durante 2 minutos.
El sobrenadante obtenido se usó para la medición enzimática de HDL, empleando los
siguientes volúmenes:

Antonio Cantarero Cuenca y Alberto Velasco Palomo

 Tubos Blanco Muestra Patron
Monoreactivo 1 mL 1 mL 1 mL
Muestra 50 µL
Patrón 50 µL
Agua destilada 50 µL

La mezcla de reacción se incubo durante 10 minutos. Pasado el tiempo se midió la

absorbancia de la mezcla a 500 nm en un espectrofotómetro. Tanto el esquema de
reacciones como la fórmula para la obtención de la concentración de HDL-Cholesterol,
en este caso, son las mismas que en el kit para la medición de colesterol. La concentración
del patrón era de 50 mg/dL.
- Kit TRIGLYCERIDES MR (REF 1155005): se basa nuevamente en un método
enzimatico colorimétrico a punto final, mediante la acción de cuatro enzimas: lipoprotein
lipasa (LPL), glicerolquinasa (GK), glicerolfosfato oxidasa (GPO) y peroxidasa (POD).
El método se basa en la lisis de los triglicéridos en ácidos grasos libres y glicerol. Este
ultimo mediante un proceso de fosforilación oxidativa produce peróxido de hidrogeno, el
cual, mediante la acción de POD, provoca la formación de un cromógeno rojo detectable
mediante espectrofotometría.

Para elaborar la mezcla de reacción se pipetearon los siguientes volúmenes:

Tubos Blanco Muestra Patron
Monoreactivo 1 mL 1 mL 1 mL
Muestra 10 µL
Patrón 10 µL
Agua destilada 10 µL

La mezcla se incubo durante 15 minutos a temperatura ambiente y posteriormente se leyó

la absorbancia a 500 nm en un espectrofotómetro. La fórmula aplicada para la obtención
de la concentración de triglicéridos en mg/dL es igual que en los dos casos anteriores.

Antonio Cantarero Cuenca y Alberto Velasco Palomo

Resultados y discusión:
Tabla 1. Valores de concentración referentes a las absorbancias obtenidas a 500nm. En esta
tabla se representan los valores de absorbancias obtenidos de las diferentes muestras patrón (P)
así como las dos muestras de suero a analizar (S1 y S2) para cuantificar los valores de
concentración de HDL, colesterol total y triglicéridos en las mismas. Además, calculamos los
valores de concentración de VLDL (triglicéridos/5) y de LDL con la ayuda de la fórmula de
Friedelwald.

Muestras Absorbancia 500nm Concentración (mg/dL)

P 1,460 50
HDL S1 1,785 61,13
S2 1,8690 64,00
P 0,426 200
Colesterol S1 0,353 165,73
S2 0,571 268,08
P 0,310 200
Triglicéridos S1 0,090 58,06
S2 0,274 176,77
VLDL S1 - 11,61
S2 - 35,35
LDL S1 - 92,99
S2 - 168,73

El paciente S1 presenta unos niveles de colesterol deseables ya que se encuentran por debajo de
los 200 mg/dL. Los niveles de LDL se encuentran en los 92,99 mg/dL por lo que se encuentra en
los niveles óptimos al tener menos de 100 mg/dL. Respecto a los niveles de HDL, si bien tiene
unos niveles óptimos, se encuentra muy próximo al límite inferior de 60 mg/dL. Para asegurarnos
poder mantener estos niveles óptimos sería aconsejable la realización de ejercicio, evitar las
grasas trans así como, en caso de ser fumador, dejar de fumar, ya que esto provocaría una
reducción de los niveles de HDL. Respecto a los triglicéridos también se encuentra en el rango
normal.

El paciente S2 presenta unos niveles excesivamente altos de colesterol total, ya que presenta un
total de 268,08 mg/dL, el cual supera los 240 mg/dL a partir del cual se considera un nivel de
riesgo alto. Respecto a los niveles de HDL presenta unos niveles óptimos con un margen algo
mayor respecto al límite inferior que el paciente anterior. En cuanto a los niveles de triglicéridos
también presenta unos niveles altos encontrándose en el rango de 150 - 500 el cual supone un
riesgo moderado. Por último, nos encontramos con unos valores de LDL bastante elevados
suponiendo un riesgo alto al encontrarse por encima de los 160 mg/dL. En caso de que el paciente
presente bien cardiopatía coronaria o 2 o más factores de riesgo sin cardiopatía coronaria
deberíamos emplear una terapia farmacológica, ya que los niveles de LDL se encontrarían por
encima de lo asumible. Esta terapia se basaría en el empleo de estatinas las cuales inhiben la
HMG-CoA reductasa, enzima implicada en las primeras reacciones de la síntesis de colesterol.
En caso de no tener una cardiopatía y presentar 1 o ningún factor de riesgo recomendaremos una
terapia dietética acompañada de ejercicio para mejorar los niveles de LDL y de colesterol total.

Antonio Cantarero Cuenca y Alberto Velasco Palomo

En otros casos y aunque se presenten niveles normales de todos los parámetros analizados, se
recomienda siempre la realización de ejercicio, así como un adieta sana y equilibrada evitando así
futuros posibles problemas relacionados con el colesterol.

Antonio Cantarero Cuenca y Alberto Velasco Palomo