Práctica 4

Análisis de flavonoides.

Objetivo

-Analizar la presencia de flavonoides en diversas muestras de material vegetal

mediante reacciones de coloración
-Identificar la presencia de flavonoides en extractos vegetales, con el empleo de
métodos cromatográficos.

Aspectos teóricos

Los flavonoides presentan todos los matices de solubilidad , desde totalmente

solubles en agua hasta insolubles en ella pero solubles en éter etílico (las
agliconas muy esterificadas) pasando por los solubles en etanol (agliconas). Por
regla general los flavonoides son insolubles en éter de petróleo, lo que permite
desengrasar un material antes de la extracción

Procedimiento

A) Reacciones de coloración
1-Reacción con amoníaco. Se toman aproximadamente 0,5 g de pétalos blancos
macerados y se les adiciona unas gotas de amoníaco al 30% v/v. La presencia de
flavonas y flavanoles producen una coloración amarilla, las chalconas y las auronas
viran de amarillo a rojo.

2) Reacción con hidróxido de sodio al 10%. A un extracto acuoso de pigmentos

(flores maceradas) se adiciona 2 a 5 gotas de NaOH al 10%. Los flavanos y los
flavanoles se ponen amarillos; las flavonas e isoflavanonas viran a diversos tonos
de rojo, las chalconas a púrpura rojizo, los flavonoles a café anaranjado y las
antocianinas a azul.

3) Reacción con Magnesio y ácido Clorhídrico. A un extracto etanólico se adicionan

0,5 g de Mg en polvo y unas gotas de HCl concentrado. Se observa de inmediato
una coloración anaranjada, roja, roja azulosa o violeta si están presentes flavonas,
flavononas, flavonoles y flavononoles. Algunas veces los flavanoles, las flavanonas
y los flavononoles dan coloraciones verdes o azules.

4) Reacción con Zinc y ácido clorhídrico. Al extracto etanólico adicionar 0,5 g. de

Zn y unas gotas de HCl. Los flavanonoles dan colores intensos.

E) Reacción con el ácido sulfúrico. Al extracto acuoso adicionar unas gotas de

ácido sulfúrico concentrado. Las flavonas y los flavonoles producen soluciones
fuertemente amarillas. Las flavanonas dan colores anaranjados. Las chalconas y
auronas forman coloraciones rojas a rojo azuloso.

1
2
3
5) Reacción con el ácido clorhídrico. Se hierve el material vegetal (flores
maceradas) con ácido clorhídrico 2N. las leucoantocianidinas dan un color rojo y
las catequinas café amarillento.

6) Reacción con ácido bórico. (reativo de Dimtroth). Se prepara una solución de

ácido bórico en anhidrido acético y se adiciona unas gotas al extracto etanólico.
Las 5-hidroxiflavonas dan soluciones naranja o rojas. Si se usa ácido bórico y ácido
cítrico disuelto en acetona se obtiene soluciones amarillas con una fuerte
fluorescencia verdosa.

7) Reacción con nitrato de plata. Se mezcla 1 a 2 ml de extracto etanólico con 3

gotas de nitrato de plata al 12% en agua. Si después de agitar 15 minutos no se
forma espejo de plata, se puede calentar un minuto y observar. Esta prueba es
positiva para los flavonoides con dos grupos hidroxilo orto o para entre sí.

B) Aplicación de la cromatografía de capa fina, TLC, determinación de los

flavonoides presentes en los extractos seleccionados

Adsorbente: Silical gel ( placas sobre vidrio)

Solventes: Se definirán por grupos de acuerdo a la categoría de flavonoides

Revelador: vapores de amoniaco y FeCl3 en solución metanólica

Como muestras se utiliza a) el extracto etanólico de 10 g de material vegetal, que

se obtiene de acuerdo a la preparación de la fracción II (análisis preliminares). Y b)
el extracto en acetato de etilo de muestras hidrolizadas con el fín de obtener los
agliconas de los flavonoides

Obtención de los extractos en acetato de etilo.

Se coloca entre 1 y 5 mg de material vegetal,seco, en un tubo de ensayo al que se
le agrega 1 ml de una mezcla H2O:MeOH: HCl [:].1:1:2. Se pone el tubo de
ensayo en un baño de María durante 10 min. a temperatura de ebullición. Se deja
enfriar el tubo y se agrega 2ml de agua, luego 1 ml de acetato de etilo. Se agita y
se deja separar las fases. La fase en acetato de etilo se utiliza para sembrar en las
placas.

Cromatografía preparativa​: de acuerdo a los resultados obtenidos por el contenido

en flavonoides se procede a separar los componentes del extracto en una placa
cubierta con Silica Gel y utilizando la mezcla de solventes que presente mejor
resultado.

Si la separación da bandas independientes, se extraen para obtener el

correspondiente espectro UV-VIS del flavonoide separado.

4
Flavonoide NaOH (acuoso) H2SO4 [ ] Mg/HCl

Chalconas Naranja--Rojo Naranja—rojo, Ninguna

magenta
Dihidrochalconas Incoloro --Amarillo Incoloro, amarillo Ninguna

Auronas Rojo o púrpura Rojo o magenta Ninguna

Flavanonas Amarillo----naranja (F) Naranja Rojo, magenta,

Rojo oscuro o púrpura violeta, azul
(C)
Flavones Amarillo Sln. Amarillo intensa Amarillo----Rojo
y naranja, algunas
veces con
fluorescencia
Flavonoles Amarillo----naranja (F) “” Rojo a magenta
café por ox.

Flavanonoles Amarillo pálido-cambia Amarillo rojiza “”

rápidamente a café
Leucoantocianidina Amarillo Amarillo Rosado con HCl,
s oscuro con Mg
Antocianinas y Azul a violeta Azul a violeta Rojo o rosado pálido
antocianidnas
Análisis preliminar de flavonoides