MANEJO DE MICROPIPETAS AUTOMATICAS Y PRECISION DE SUS MEDIDAS

Ayala Ibarra, José; Durango Naranjo, María; Pérez Arrieta, Gustavo, Rodríguez Álvarez,
Angélica. Facultad de ciencias básicas, Programa de Biología, Laboratorio de Biología
molecular; Universidad de Córdoba-Colombia.

RESUMEN.
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para succionar y transferir
pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas analíticas
por ellos se determinó las recomendaciones básicas y técnicas para el uso y manejo de
micropipetas automáticas y la determinación de la precisión de sus medidas, para
realizar esta práctica se seleccionó el modelo adecuado para medir el volumen, de
manera que esté dentro del rango especificado para la pipeta, se obtuvieron valores del
w del agua mediante el micropipeteo que fueron analizadas por medio de una gráfica. La
gráfica obtenida mostro una relación directamente proporcional entre el volumen
agregado al tubo y su peso, teniendo así, que por cada 100µL de agua agregados al tubo,
su peso aumentaba; siendo un valor constante para cada volumen. El manejo de
micropipetas se hizo de manera cuidadosa, evitando inclinaciones y formaciones de
burbujas. Por otro lado es de destacar la exactitud que posee este instrumento, el cual
es capaz de medir volúmenes considerablemente pequeño.
Palabras Claves: exactitud, microlitros, micropipetas, volúmenes.

ABSTRAC.
The micropipette is a laboratory instrument used to suck and transfer small volumes of
liquids and allow their handling in different analytical techniques. To determine the basic
and technical recommendations for the use and handling of automatic micropipettes and
the determination of the precision of their measurements. To perform this practice, the
appropriate model was selected to measure the volume, so that it is within the specified
range for the pipette. water w values were obtained by micropipetting, which were
analyzed by means of a graph. The graph obtained showed a directly proportional relation
between the volume added to the tube and its weight, having thus, that for each 100μL of
water added to the tube, its weight increased; being a constant value for each volume.
The handling of micropipettes was done carefully, avoiding inclinations and bubble
formations. On the other hand, it is worth highlighting the accuracy of this instrument,
which is capable of measuring volumes that are considerably small.
Keywords: accuracy, microliters, micropipettes, volumes.
INTRODUCCIÓN.
En los laboratorios como en ciertas áreas especializadas como la Biotecnología, Química,
Biología entre otras, la habilidad para medir de manera exacta y reproducible y
transferir volúmenes pequeños de líquidos son críticos para obtener resultados útiles. El
método más común para medir líquidos requiere el uso de un dispositivo llamado
micropipeta. La micropipeta es un instrumento utilizado para manejo de líquidos y su
función principal consiste en absorber y transferir volúmenes pequeños. El grado de
precisión de este instrumento puede variar considerablemente, por eso debemos
cerciorarnos de escoger la más adecuada.
Existen diferentes tipos de micropipetas y pueden clasificarse según su funcionamiento,
regulación de volumen, canales de dispersión o su modo de funcionamiento. Para utilizar
una micropipeta es de suma importancia siempre mantenerla de forma vertical, ya que
de lo contrario podríamos dañar el equipo o descalabrarla ocasionando que los resultados
sean erróneos (Dharan, 2002).La manera más adecuada de elegir una micropipeta es
de acuerdo al volumen que se desea medir teniendo siempre en cuenta que el volumen
a pipetear debe ser lo más cercano a la capacidad máxima de la pipeta. Por lo que:
Volumen a límite mayor de micropipeta= menor error
Volumen a límite inferior de micropipeta= mayor error
Debemos tomar en cuenta que el error que se obtenga no solo es por la mala calibración
del equipo o el mal uso de éste, sino que el error humano es un factor determinante. Una
forma de ver que tan significativos son estos errores es conociendo que tanto variarían
los datos obtenidos de una experimentación utilizando la estadística descriptiva como la
desviación estándar, media y coeficiente de variación.

OBJETIVO.
 Describir las recomendaciones básicas y técnicas para el uso y manejo de
micropipetas automáticas y la determinación de la precisión de sus medidas.

METODOLOGÍA.
La práctica de manejo de micropipetas automáticas y precisión de sus medidas se llevó
a cabo en el laboratorio de Biología molecular, el protocolo que se siguió para medir
correctamente un volumen con una micropipeta fue el siguiente, primero se seleccionó la
pipeta adecuada para medir el volumen, de manera que este dentro del rango
especificado para la pipeta, luego se fijó el volumen deseado en la pipeta mediante el giro
del embolo por ejemplo 100 ul. Se colocó una punta desechable en el vástago de la
pipeta, se aseguró que está bien sujeta ejerciendo un ligero movimiento de torsión, se
presionó suavemente el embolo con el pulgar hasta el primer tope, posterior a esto se
introdujo la punta de la micropipeta en la muestra no más de 3 mm de la superficie de
líquido, manteniendo la pipeta en posición vertical. Luego se succiono el líquido,
relajando suavemente la presión del dedo pulgar sobre el embolo, sin permitir que subiera
por sí solo, se esperó un par de segundos con la punta introducida en el líquido. Se retiró
la punta de la muestra y posterior a esto se introdujo la punta de la pipeta en el tubo
adecuado, colocando la punta contra la pared del tubo sin sumergirla en solución. Con el
embolo totalmente presionado se retiró cuidadosamente la pipeta deslizando la punta a
lo largo de la pared del tubo, luego se relajó la presión del pulgar para que el embolo
volviera a su posición normal, se eliminó la punta por presión del expulsor de puntas para
así evitar contaminación.
Finalmente se determinó la precisión de las medidas tomadas con micropipetas
automáticas siguiendo las instrucciones que aparecerán a continuación. Se llenó un
beacker con 400 ml de agua destilada a temperatura ambiente, luego se determinó la,
masa de un tubo eppendorf en una balanza analítica, este se anotó como el peso inicial,
posteriormente se trasfirió con la micropipeta al tubo eppendorf 100 ul de agua destilada,
se tapó el tubo, se pesó y se anotó su masa, por último se retiró la tapa del tubo y se
añadió 100 ul más de agua destilada, se tapó, se volvió a pesar y se anotó ese valor.
nota: se repitió el procedimiento hasta completar 1000 ul de agua en el tubo.

RESULTADOS.
Los resultados obtenidos en el manejo de micropipetas automáticas y precisión de sus
medidas, se encuentran descritos en la tabla 1.
Tabla 1. Se muestran los resultados obtenidos en el manejo de micropipetas automáticas
Volumen (µl) W tubo(g) W tubo + W agua W agua
0 0,7732 0,7732 0
100 0,7732 0,8834 0,1102
100 0,7732 0,9715 0,1983
300 0,7732 1,0429 0,2697
400 0,7732 1,1611 0,3879
500 0,7732 1,2864 0,5132
600 0,7732 1,3730 0,5998
700 0,7732 1,4818 0,7086
800 0,7732 1,5682 0,7952
900 0,7732 1,6753 0,9021
1000 0,7732 1,7607 0,9875

Las gráficas obtenidas de los resultados se muestran a continuación:

 Volumen (µl) vs W tubo + W agua
1000
900
800
700
Volumen (µl)

600
500
400
300
200
100
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Volumen (µl) 0 100 100 300 400 500 600 700 800 900 1000
W tubo + W agua 0.7732 0.8834 0.9715 1.042 1.1611 1.2864 1.3730 1.4818 1.5682 1.6753 1.7607

Gráfica 1. Se muestra la relación entre volumen en microlitros y la suma del el peso del
tubo más el volumen del agua.

W tubo + W agua vs W agua

1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
W tubo + W agua 0.7732 0.8834 0.9715 1.0429 1.1611 1.2864 1.3730 1.4818 1.5682 1.6753 1.7607
W agua 0 0.1102 0.1983 0.2697 0.3879 0.5132 0.5998 0.7086 0.7952 0.9021 0.9875

Gráfica 2. Se muestra la relación del peso del tubo más el volumen del agua.
 Volumen (µl) vs W agua
1000

900

800
700
600

500

400

300

200

100

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Volumen (µl) 0 100 100 300 400 500 600 700 800 900 1000
W agua 0 0.1102 0.1983 0.2697 0.3879 0.5132 0.5998 0.7086 0.7952 0.9021 0.9875

Gráfica 3. Se muestra la relación entre el volumen en microlitros y el volumen del agua.

ANÁLISIS.
CONCLUSIÓN.
En base a los conocimientos adquiridos en la práctica es preciso denotar que el manejo
de las micropipetas es muy importante ya que nos permite absorber y transportar
volúmenes de líquidos muy pequeños siendo de gran utilidad en las distintas técnicas
científicas y gracias a que son herramientas de medidas volumétricas muy precisas
permiten mejor en gran medida la calidad y exactitud de los datos.

BIBLIOGRAFÍA
 Dharan, J. (2002). Micropipetas: Aspectos Básicos para su Manejo y Parámetros
de Calibración. Recuperado de www.quimicaactual.com/micropipetas/343/23.pdf
 Porto, J. (2013). Diferencia entre exactitud y precisión. Recuperado de
www.definiciones.com.
PREGUNTAS COMPLEMENTARÍAS
 Consulte los conceptos de exactitud y precisión.
EXACTITUD: se denomina exactitud a la capacidad de un instrumento de acercarse
al valor de la magnitud real. La exactitud es diferente de la precisión. La exactitud
depende de los errores sistemáticos que intervienen en la medición, denotando la
proximidad de una medida al verdadero valor y, en consecuencia, la validez de la
medida. Suponiendo varias mediciones, no estamos midiendo el error de cada una,
sino la distancia a la que se encuentra la medida real de la media de las mediciones
(cuán calibrado está el aparato de medición). Esta cualidad también se encuentra en
instrumentos generadores de magnitudes físicas, siendo en este caso la capacidad
del instrumento de acercarse a la magnitud física real (Porto, 2013).
PRECISIÓN: la precisión se refiere al grado de cercanía que presentan los resultados
obtenidos a partir del control de las mismas condiciones. En este sentido, la precisión
se asocia a la sensibilidad del instrumento. Mientras mayor sea la precisión del
instrumento, mayor será la cercanía de los resultados con relación a las diferentes
mediciones hechas con los mismos parámetros. Un instrumento con precisión debe
ser correctamente calibrado según las variables que presenta el entorno en que se
usa. El campo que estudia los procedimientos de calibración, métodos de medida y
sus distintos instrumentos es llamado de metrología (Porto, 2013).
 Calcule la media, varianza y desviación estándar para los datos obtenidos en
la práctica.

MEDIA DE W (tubo) + W (agua): 1.2706

MEDIA DE W (agua): 0.4975

VARIANZA DE W (tubo) + W (agua): 0.3314

VARIANZA DE W (agua): 0.3313

DESVIACIÓN ESTANDAR DE W (tubo) + W (agua): 0.1098

DESVIACIÓN ESTANDAR DE W (agua): 0.1098