PRÁCTICA DE PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO

1. OBJETIVOS

 Realizar las buenas prácticas en el laboratorio de Microbiología

 Aprender las técnicas de preparación de los diferentes medios de
cultivo.
 Familiarizarse con las técnicas empleadas en Microbiología para el
cultivo y la manipulación de microorganismos en condiciones de
esterilidad.
 Reconocer la formulación y clasificar los medios de cultivo.

2. PRINCIPIOS TEÓRICOS

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y

otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de
los microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica de los
microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es también muy
grande. La mayoría de los medios de cultivo se comercializan en forma de
liofilizados que es preciso rehidratar. La preparación de un medio de cultivo se
reduce en general a pesar la cantidad de medio y re disolverla en agua
destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las instrucciones del
fabricante. Las sustancias termolábiles se esterilizan por filtración y se añaden
al resto de los componentes previamente esterilizados en el autoclave.
El agar se utiliza como agente solidificante. Es un polisacárido que se obtiene
de ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo.

3. MATERIALES

PLACA PETRI

MECHERO CON TRIPODE

Velasquez Paucar, Vladimir Williams

 AGAR NUTRITIVO

AGAR SABOURAUD

AGAR MACCONKEY

AGAR TSI

AGUA DESTILADA ESTERIL

TUBOS DE ENSAYO Y MATRAZ

AUTOCLAVE U OLLA A PRESION

INCUBADORA

Velasquez Paucar, Vladimir Williams

 4. PROCEDIMIENTO

 Los tipos de medio de cultivo usado en esta práctica son:

 Por su consistencia: El medio de cultivo SOLIDO ya que contiene agar; y
se prepara en placa Petri y tubos de ensayo con la superficie del medio
inclinada (pico de flauta).
 Por su composición: Medio General, ya que nos permite el desarrollo de
una gran variedad de microorganismos.
 También hay algunas condiciones que necesitamos para una correcta
realización de la siembra:
 Que se lleve a cabo con instrumentos estériles sobre medios de cultivo
estériles.
 Que el inóculo no se contamine, modifique o destruya.
 Que las condiciones ambientales durante el proceso sean lo más
próximas a la esterilidad para evitar contaminaciones durante el manejo
del instrumental y de los medios de cultivo.

Medios de Cultivo

A.N Agar Nutritivo Genéricos - Mesofilos

A.S Agar Sabouraud Hongos- Micosis
A.Mc Agar Macconkey Enterobacterias
A.TSI Agar Triple Sugar Iron Enterobacterias

Preparación de medios

1. Pesar la cantidad de medio de cultivo que se va a usar (10gr para 200

ml de agua) ojo: la cantidad de agar varia

Velasquez Paucar, Vladimir Williams

 2. Rehidratar el medio de cultivo con agua destilada estéril / Usar una
varilla de vidrio para disolver todo el cultivo (Disolver primero con 100 ml
de agua destilada)

3. Llevar al mechero de bunsen y esperar unos minutos y agregar los otros

100 ml de agua destilada.

4. Después esperar hasta que empiece a rebalsar un poco y revisar hasta

que quede traslucido.

Velasquez Paucar, Vladimir Williams

 5. Inmediatamente proceder a tapar con una torunda de algodón y papel
craft

6. Después llevar a esterilizar en la olla a presión / 121 ºC x 15”

7. Una vez terminado la esterilización, se debe retirar y empezar a rellenar

las placas Petri (3 ml) y los tubos de ensayo (3 ml).

OJO: Dejar que el medio solidifique para empezar con la siembra.

Velasquez Paucar, Vladimir Williams

 5. RESULTADO
Con esta tercera práctica hemos podido aprender y conocer:
Un método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio
líquido en la superficie de un medio sólido de agar.
Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares
simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de
carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra
formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo
sólido donde las células que se multiplican no cambian de localización;
tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión
binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de
células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en
un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

6. CONCLUSIONES
Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de
microbiología pues sirven para identificar las bacterias causantes de las
enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son sensibles esas
bacterias.
La mayoría de las bacterias se desarrolla en un medio de cultivo básico que
contiene agua extracto de carne y pepsina.
Un método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio
líquido o en la superficie de un medio sólido de agar.

Velasquez Paucar, Vladimir Williams