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Artículo de investigación

Potencial de bacterias de mercurio tolerantes para bio-absorción de mercurio lixiviado de lámparas

fluorescentes desechadas

Mohammed H. Abu-Dieyeh, Haya M. Alduroobi, Mohammad A. Al-Ghouti *

Departamento de Ciencias Biológicas y Ambientales de la Facultad de Artes y Ciencias, Universidad de Qatar, PO Box: 2713, Doha

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

palabras clave: En este estudio, se encontraron diez cepas bacterianas que son resistentes después de su aislamiento de los sedimentos costeros qataríes mercurio.
biorremediación Se encontró Tolerancia a ser de hasta 100-150 ppm durante cinco cepas. Esas cepas tenían condiciones de crecimiento óptimo a nivel de salinidad de
biosorción 10 ppm de NaCl y pH 7-8. A partir de una concentración de 7,9 ppm de mercurio extraído de las lámparas fluorescentes y después de 6 días de
Descartado Mercurio lámparas
incubación a 37 ° C, dos cepas aisladas HA6 ( Bacilo spp.) y HA9 ( Acinetobacter sp.) mostró 96,7% y 98,9% de mercurio eficiencia bio-absorción,
fluorescentes
respectivamente. Otras cepas eran capaces de eliminar más del 60% del mercurio extraído.

1. Introducción
En la actualidad, muchos países están imponiendo regulaciones que depende únicamente de la
lámpara fluorescente compacta (CFL) para la iluminación ( César, 2015 ). A CFL se compone de un
tubo lleno con una mezcla de gases que consiste en vapor de baja presión de mercurio y, o bien
argón, neón, xenón o criptón. Entre todos estos elementos, el elemento más peligroso es el mercurio
(Hg). El mercurio ha sido identificado como un metal pesado bioacumulativas y persistente con 0,5-2
años tiempo de residencia ( Schroeder y Munthe, 1998 ). Los efectos más tóxicos de mercurio se han
encontrado para estar en su forma methy- lated (orgánica). Esta forma de mercurio tiende a
acumularse en el tejido graso de los organismos acuáticos y por lo tanto se biomagnificados a lo
largo de la cadena alimentaria a niveles tróficos superiores ( Woshner et al., 2001 ; Woshner et al.,
2002 ; Sonne et al., 2007 ; Zhao et al., 2018 ).
cantidad de mercurio durante cuatro días solamente ( Johnson et al., 2008 ). El vapor de mercurio se
libera a la atmósfera una vez que las lámparas gastadas se rompen; cómo- nunca, mercurio que
permaneció unido a las piezas de la lámpara o en el polvo de fósforo se lixivia al suelo y cerca de
vertederos ya que es la forma mayormente practicado de disposición de CFL. Por ejemplo, el vertido
ha sido el medio tradicional y principal de la eliminación de residuos sólidos urbanos incluidos CFLs
gastados en China ( Hu y Cheng, 2012 ). El tratamiento de los residuos de lámparas fluorescentes
contienen mercurio esta ahí proa necesaria antes de su disposición final en vertederos o
incineradoras prácticas ción aún. Diversos procesos pueden llevar a cabo la recuperación de
mercurio tales como desorción térmica, lixiviación química y la estabilización / dification ridad. La
desorción térmica se considera que es el método más comúnmente utilizado para tratar la tierra o
lodo contaminado con mercurio ( Coskun y Civelekoglu, 2015 ). Sin embargo, este proceso consume
grandes cantidades de energía y se describió para generar diversos productos peligrosos durante los
procesos de tratamiento, tales como polvo phorous fosfatasa contaminado con mercurio,

La mayoría de las lámparas fluorescentes compactas contienen 3-5 mg de mercurio por

bombilla y cuando los bulbos se rompen todos los presentes mercurio volátil que es ya sea líquido o
in- corporado con el polvo de fósforo, se libera en el aire. El mercurio de una lámpara rota será
oxidado horas extraordinarias y formar compuestos inorgánicos de mercurio ( Risher y De Rosa, 2007 ).
Inicialmente, una alta cantidad de vapor de mercurio será lanzado al aire y entonces y posterior-
mente una liberación más lenta de mercurio en sus otras formas (mercurio elemental, el mercurio
inorgánico y el mercurio absorbido en la lámpara de componentes) se producirá ( STAHLER et al.,
2008 ). El Hg + 1 y Hg + 2 especies pueden formar compuestos más solubles que Hg 0 y por lo tanto
tener un mayor impacto sobre el medio ambiente, ya que pueden ser transportados a través de la
fase acuosa más fácilmente, oxidados y metilados ( Raposo et al., 2003 ). Un estudio estima que la
tasa de mercurio liberada desde una única 13W CFL que contiene 4,5 mg de Hg a ser 1.34mg o 30%
del total
filtros, vidrio y piezas metálicas ( coskun y
Civelekoglu, 2015 ). lixiviación química se basa en la disolución del contenido de metal en soluciones
de lixiviación, tales como ácido o alcalino. Acidic- lixiviación se aplicó por lo general para obtener
rendimientos altos de mercurio en algunos estudios ( Rey-Raap y Gallardo, 2013 y Tunsu et al., 2014 ;
Balderas- Hernández et al., 2016 ). Sin embargo, los posibles riesgos para la salud y los impactos
medioambientales de la utilización de reactivos ácidos se pueden encontrar. En adi- ción, reactivos
ácidos usados ​en el proceso causados ​a la extracción de otros metales (por ejemplo, Al, Mn, Cu, Zn
y Cd) en soluciones y se pueden llevar a reducir la eficiencia de la lixiviación de mercurio ( Coskun y
Civelekoglu, 2015 ). En otras palabras, la lixiviación química es considerada como insuficiente
proceso de tratamiento y se extrae el mercurio en su forma tóxica en el que Hg

* Autor correspondiente.

Dirección de correo electrónico: mohammad.alghouti@qu.edu.qa (MA Al-Ghouti).

https://doi.org/10.1016/j.jenvman.2019.02.066
Recibido el 21 de octubre de de 2018; Recibido en 23 de forma de enero de 2019 revisado; Aceptaban 12 de febrero de 2019

0301-4797 / © 2019 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

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compuestos (II) están presentes. Estabilización y solidificación son métodos físicos con conocida
in-situ aplicaciones ex-situ y ( Xu et al., 2015 ). La estabilización es el proceso de convertir el mercurio
en formas químicas que son estables y altamente insoluble sobre amplias gamas de condiciones de
pH y redox en el suelo. La solidificación implica la inserción de las formas de Hg estabilizadas en una
matriz firme y robusto como un monolito sólido ( Zhang y Bishop, 2002 ). Esta tecnología tiene varios
inconvenientes, ya que es difícil de verificar la eficiencia del proceso y está influenciada por condicio-
nes específicas del sitio. La preocupación por la integridad a largo plazo del sitio y limitaciones en la
futura reutilización del sitio también se acompañan de este proceso ( Xu et al., 2015 ). En
consecuencia, los gías anteriormente mencionado químicas y gías física se consideran alternativas
amigables caro y no medio ambiente ( Wagner-Dobler, 2013 ). Por lo tanto, en casi todos los procesos
ensayados, el mercurio debe ser recuperado y se trata a través de los procesos de neutralización,
tales como la biorremediación ( Chaturabul et al., 2015 ). En biorremediación bacteriana de mercurio,
los ismos remediar meca- constan de volatilización y biosorción ( Xu et al., 2015 ; Wang et al., 2017 ).
La volatilización implica bacterias resistentes al mercurio que llevan un mer-operón utilizado para la
unión, el transporte y la desintoxicación de Hg (II) y especies de Hg orgánicos a elemental Hg ( Wagner-Dobler,
2013 ; Peng et al., 2017 ). Los estudios realizados con anterioridad descubrieron una serie de mi-
croorganisms que tienen operón mer incluidos Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa, Serratia
marcescens, Xanthomonassp, Pseudomonas Stutzer, Staphylococcus aureus ( Yu et al., 2014 ).
Además, biosorción es otra técnica que puede implicar mecanismos de inmovilización que dependen
de diversos mecanismos fisicoquímicos, tales como la adsorción, complejación superficie,
intercambio de iones, o precipitación de superficie ( Francois et al., 2011 ; Yin et al., 2016 ; Zhang et
al., 2012 ). Estos mecanismos pueden ser descubiertos después del aislamiento de cepas
bacterianas de mercurio-tolerante. Muchas bacterias costeras y tierra nativos fueron aisladas e
identificadas en estudios previos de todo el mundo. Por ejemplo, una cepa aislada S. epidermidis de
río amarillo en China puede resistir alta concentración (100 mM = 20,06 ppm) de mercurio y reducir
Hg (II) para elemental Hg en 30 h ( Yu et al., 2014 ). bacterias altamente resistentes ( Bacilo
turingiensico)
al mercurio se han aislado a partir de sedimentos marinos costeros en la India y fue capaz de tolerar
hasta 50 ppm de cloruro de mercurio ( Dash et al., 2013 ). Además, las bacterias resistentes al
mercurio aeróbicas fueron aisladas de los sedimentos de la zona de mercurio contaminado de la
desembocadura del Tajo en Portugal que eran en su mayoría Bacilo spp. y fueron capaces de tolerar
hasta 10 ppm Hg 2+ y puede reducir Hg 2+ a Hg 0 ( Figueiredo et al., 2016 ). Otro estudio encontró que las
bacterias de Sphingobium género aislado a partir de un sitio contaminado con mercurio en Australia
tienen alta mercurio Tol- erance (concentración mínima inhibitoria (MIC) (hasta 48,48 ppm Hg 2+) y
mercurio tasa de volatilización del 80%, indicando potencial ción bioremedia- ( Mahbub et al., 2016 ).
Por otra parte, las cepas aisladas de géneros Pseudomonas y Psychrobacter a partir de sedimentos
de la laguna de Orbetello en Italia mostraron mercurio de resistencia de hasta 0,1 mM (= 3,55 ppm).
Tres de esas cepas aisladas reduce mercurio orgánico e inorgánico al mercurio elemental, biofilms
en forma de partículas de piedra pómez, y mostraron potencialidades en la eliminación del mercurio
de los lixiviados de sedimentos ( Pepi et al., 2011 ). Otras cepas bacterianas sedimento marino se
aislaron a partir de una zona de manglares y el estuario Xixiang en las costas de China, que resistida
niveles de Hg en concentraciones de 20 ppm y más y mostró capacidades de biorremediación
distintivos por arriba de toma de Hg 2+
( Deng y Wang, 2012 ). También una bacilo turingiensico cepa PW-05 se aisló de la costa Odisha en
India y se encontró que resistir 50 ppm de Hg ( Dash et al., 2013 ). tales estudios de caso de las
bacterias aisladas de ambientes nativos y aprobará ser prometedores en el tratamiento de mercurio
son motivación para estudiar las potencialidades de las especies locales. Aunque algunos estudios
muestran el uso de algas, hongos y plantas en biorremediación de metales pesados, las bacterias
son más fáciles de cultivar, puede crecer más rápido y Ac- acumular metales pesados ​en diversas
condiciones externas ( Malik, 2004 ). En Qatar, un estudio anterior se realizó en cepas aisladas de
suelos contaminados de aceite de petróleo en el área industrial. Tres de las cepas aisladas ( Enterobacter
helveticus, Citrobacter amalonaticus y Cronobacter muytjensii) fueron probados para la
biorremediación de mercurio a partir de
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CFL pasado y mostró la eficiencia bio-absorción de mercurio que varió de
28,8% a 63,6% ( Al-Ghouti et al., 2016 ). Los metales pesados ​como el mercurio tienden a acumularse en
ambientes marinos costeros a través de fuentes principalmente de, actividades domésticas, relacionadas
con hidrocarburos, puertos comer- ciales industriales y de aguas residuales. En consecuencia, las cepas
de mercurio de bacterias resistentes se pueden encontrar en tales sedimentos costeros. Por lo tanto, esto
podría alentar a los estudios en Qatar para identificar bacterias resistentes al mercurio de los sedimentos
costeros, y el objetivo de maximizar su capacidad de biorremediación.
2. Materiales y métodos
2.1. Toma de muestras y aislamiento de bacterias
Once muestras de sedimentos marinos se recogieron a partir de un sitio de mangle, en la zona
intermareal, situada en la parte norte-oriental de la costa de Qatar alrededor de Al-Thakhira (25 °
45'11.8 N & 51 ° 31'41.4 E). Las muestras se recogieron en siete diferentes estaciones cada una de
aproximadamente 100 metros de distancia y a una profundidad de aproximadamente 15 cm. Las
muestras se recogieron en bolsas de plástico etiquetados y se mantienen a baja temperatura en una
caja de hielo para ser entregado al laboratorio, donde se transfieren al refrigerador 4 ° C hasta ser
filtrada y probado.
Para el cribado para aislar bacterias resistentes de mercurio, de cada muestra de suelo, de un gramo
de suelo se transfirió a 9 ml de agua destilada estéril y, a continuación diluciones en serie de hasta 10 -3 estaban
preparados. El procedimiento más tarde se repitió cinco veces para cada muestra de suelo.
Las muestras diluidas se incubaron durante una hora a 35 ° C y, a continuación 100 l de cada
muestra se sembraron en medio de cultivo sólido LB con- TaiNing 5 ppm de HgCl 2 y se incubaron a
35 ° C durante tres días. Las colonias se observó la morfología y aislado en consecuencia y
sub-cultivaron en agar LB para 24 h de incubación a 35 ° C. Cada aislado bacteriano purificado se le
dio un número, etiquetado y se mantuvo en el refrigerador. En el estudio también se realizó en once
muestras de suelo recogidas en un estudio previo de diferentes suelos contaminados de aceite /
diesel ubicada en talleres de automóviles en la zona industrial en Doha, además de una muestra de
suelo sabkha de Dukhan, Noroeste de Qatar. El aislamiento de las cepas se realizó utilizando M9
mínimo de sales de medio que contiene 5 ppm de HgCl 2.
La preservación a largo plazo de todas las cepas aisladas se realizó en 60% de glicerol
mediante la suspensión de una colonia pura en caldo LB 0,5 ml, añadiendo 0,5 ml de 60% de glicerol
para obtener 1 ml distribuye por igual en tres tubos Eppendorf (330 l de volumen total en cada tubo) y
se conservó a -80 ° C congelador.
2.2. Mínimo Ensayo de inhibición de MIC concentración de bacterias aisladas
Se encontró un total de ocho aislamientos ser prometedores ya que mostró un buen crecimiento
en LB que contenía HgCl 2. Después de los aislados fueron rado puramente cul- en agar LB, HgCl 2 solución
madre de 1000 ppm se utilizó para pre- parar diferentes concentraciones de tratamiento para la prueba
de MIC. MIC es la concentración más baja que inhibe completamente el crecimiento de bacterias ( Andrews,
2001 ). Mezclas de caldo LB y HgCl 2 estaban preparados. El intervalo de concentración tratamiento de
HgCl 2 utilizado fue de seis concentraciones: 0, 10, 20, 40, 60 y 100 ppm. Un volumen de mezclas de
medios de comunicación y de tratamiento de 10 ml de LB se prepararon en tubos Falcon de 15 ml y
mezclado por vórtice. Cada una de las ocho cepas se inocularon, por triplicado, en todos los seis
concentraciones de tratamiento y después se incubaron durante 3 días a 35 ° C con 180 rpm en un
agitador incubador. La densidad óptica a 600 nm se midió de todos los cultivos bacterianos y un cultivo
estándar (tratados con 10 ppm de HgCl 2
y contenía 568 × 10 6 Las células bacterianas / ml) utilizando un fotómetro UV-Vis espectrometría. 100 l de
cada tubo de cultivo y luego se extendió en placas de agar LB para obtener confirmado la viabilidad
colonias. se observó un crecimiento después de la incubación durante 34 h a 35 ° C y los resultados de la
densidad de crecimiento (positivo / negativo) se registraron.
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2.3. optimización de crecimiento
Las condiciones óptimas de crecimiento se determinaron para cinco cepas que mostraron la
más alta tolerancia a la concentración de mercurio (HA3, HA4, HA6, HA9 y ZA3-S). Para la
determinación del pH óptimo, el pH del medio de caldo fue alterado utilizando cualquiera de NaOH o
HCl para llegar a valores de pH de
5, 6, 7 y 8. salinidad crecimiento óptimo se midió también para las concentraciones de salinidad de
10, 15, 20 y 25 g L -1 usando NaCl para aumentar la salinidad de los medios de caldo. Para cada uno
de los cuatro aislamientos, un loopfull de la placa de cultivo puro se transfirió a cada uno de los
caldos de cultivo experimentales usando un bucle de inoculación desechable 10! L de plástico. Los
aislados se cultivaron en cinco repeticiones en cada uno de la presencia y ausencia de 10 ppm HgCl 2
y se incubó a 37 ° a 180 rpm, y luego se midió la densidad óptica a 600 nm para la todos los cultivos
experimentales estándar y.
2.4. La evaluación de los aislados más prometedoras para la eliminación de mercurio (II) extraído de las
lámparas fluorescentes desechadas
El método para la extracción de mercurio de las lámparas fluorescentes gastado se asistida por
microondas de lixiviación con relación de 3HCl: 6HNO 3. Este método mostró la mayor eficacia de la
extracción en el estudio realizado anteriormente ( Al-Ghouti et al., 2016 ). El con- centración mercurio
lixiviado medida por vapor frío espectrometría de absorción atómica (CVAAS) se encontró que era
7,9 ppm. Los mismos cinco cepas de más alta resistencia al mercurio se ensayaron para determinar
su eficiencia en la eliminación de Hg 2+. Todas las cepas se inocularon en caldo LB mezclado con el
mercurio se extrae en forma líquida para conseguir una concentración de 7,9 ppm HgCl 2 en los tubos
de cultivo. se llevó a cabo la incubación a 37 ° C durante 6 días en cinco réplicas. Se utilizaron dos
controles: un control negativo con medio LB y el mercurio extraído y un control positivo con cepas
bacterianas cultivadas en ausencia de mercurio. Después de la incubación, los tubos de cultivo eran
cen- trifuged y se recogió y se transfirieron a otros tubos para el análisis de la concentración de
mercurio a través de CVAAS sobrenadante. Previo al análisis, se añadieron 100 l de dicromato de
potasio como agente oxidante y los tubos se colocaron en un agitador a 600 rpm durante 30 minutos
para que la reacción tenga lugar ( Nixon et al., 1999 ; Deng y Wang, 2012 ). Las muestras se diluyeron
a continuación 500X con agua destilada para conseguir un volumen total de la muestra de 10 ml
(0,02 ml de muestra en 9.98mL de agua destilada). El instrumento CVAAS (CVAAS-aula-254) con
límite de detección de 0,01 ppb se utilizó para medir la concentración de mercurio en las muestras
usando un método estandarizado (EPA-254.1) y solución estándar (ICV-NIST 1641d 10 ppb). La
eficiencia de eliminación de mercurio de todas las cinco cepas se determinó mediante la
comparación de la concentración de los cultivos tratados con la concentración obtenida a partir del
control.
2.5. Análisis de los datos
Todos los datos de densidad óptica fueron sometidos a ANOVA de un factor y los valores medios
significativas entre los niveles de tratamiento se separaron usando la prueba de Tukey a PAG ≤0.05
(SigmaStat 4.0 Systat Software, Inc.). Cinco complicaciones re- se llevaron a cabo en todos los ensayos
experimentales.
2.6. Caracterización e identificación de cepas de mercurio tolerantes prometedores
Las cepas prometedoras se caracterizaron utilizando características macroscópicas (morfología
de colonias) microscópico (Gram y tinción de esporas) y y después se somete a la identificación de
cepas por láser asistida por matriz de desorción ionización - tiempo de vuelo - espectrometría de
masas (MALDI-TOF MS):
2.6.1. preparación de la muestra
se utilizó etanol / procedimiento de extracción de ácido fórmico para extraer teins pro a partir de
cultivos recién preparados. Como se ha descrito previamente por Bibi et al. (2018) ; un bucle lleno de
cultivos se suspende inicialmente en 300 l de agua estéril. A continuación se añadieron 900 l de
etanol y se centrifugaron a
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13.000 rpm durante 2 minutos. El sobrenadante se eliminó y se añadió un volumen igual de ácido
fórmico (70%) y acetonitrilo (100%) al sedimento y se agitó a fondo. Después de la centrifugación; 1 l
de sobrenadante (proteínas extraídas) se transfirió a MALDI placa biotarget y se cubrió con 1 l de
HCCA (a cyanohydroxycinnamic-ácido) matriz proporcionado por el fabricante (Bruker Daltonics /
Alemania).
2.6.2. Identificación de microorganismos
La placa biotarget se cargó en el MALDI-TOF MS instru- ment (Bruker Daltonics / Alemania).
Los espectros de masas se adquirieron usando el software de control de la flexión y la identificación
de microorganismos se hizo comparando los espectros obtenidos con la base de datos utilizando una
función en software MALDI Biotyper. La puntuación de comparación se expresó en la escala de
registro desde 0.00 a 3.00 para la interpretación de resultados. Sobre la base de la recomendación
del fabricante, la puntuación de identificación se tarse la in- como identificación altamente probable
nivel de especie para la puntuación entre 2,3 y 3,00, la identificación género y la identificación a nivel
de especie probable de 2,00 a 2,299 y la identificación nivel de género probable para la puntuación
entre 1,7 y 1.999. La puntuación por debajo de 1,7 se interpretó como identificación no fiable y por lo
tanto el resultado de la identificación no se informó.
3. Resultados y discusión
3.1. Aislamiento de cepas bacterianas de mercurio tolerantes de suelo qatarí
El cribado de muestras de suelo recogidas de reserva de manglar de Al-thakhira produjo un total
de 10 cepas resistentes que fueron aislados después del cultivo en presencia de 5 ppm de HgCl 2 y
etiquetados como: HA1, HA2, HA3, HA4, HA5, HA6, HA7, HA8, HA9 y HA10. Sin embargo, HA7 y
HA8 no fueron capaces de crecer cuando se sub-cultivaron después. Otros tres cepas resistentes se
aislaron de las muestras de pre-recogida de suelo de la zona industrial y Dukhan Sabkha, aquellos
fueron etiquetados como: ZA1-S, ZA2-S y ZA3-S. La prueba se realizó MIC para todos los
aislamientos contra concentraciones de tratamiento de mercurio 0-200 ppm para obtener su nivel de
tolerancia. La respuesta de crecimiento de los cultivos se muestra como medición de la densidad
óptica ( tabla 1 ) Y se ilustra en la ( Figura 1 ). Se observó la misma tendencia para todas las cepas
probadas como la OD en las concentraciones más bajas parecían estar aumentando ligeramente a
medida que el tratamiento aumenta la con- centración o mantuvo casi constante. Cuando la
concentración alcanzó los 100 y 150 ppm de los valores de DO aumentaron bruscamente y se redujo
a casi cero a una concentración de 200 ppm ( Figura 1 ). Esto se observó con todas las cepas
estudiadas, así como después de repetir el experimento para una segunda vez. Por lo tanto, los
cultivos de caldo se extendieron en placas para observar el crecimiento de bacterias y confirmar que
después de 24 h de incubación a 35 ° C. El crecimiento se midió sobre la base de mación estimación
visual y utilizando una escala como sigue: un + se refiere a aproximadamente el 10% o menos del
área de la placa Petri se llenó de colonias crecidas; ++ se refiere a alrededor de 30-70% de
crecimiento y +++ se refiere a casi todo el área de la placa se cubre ( Figura 2 ). Los resultados se
resumen en la ( tabla 1 ) Donde se demuestra que el MIC para los aislados HA3 y se encontró HA6 a
ser 100 ppm, mientras que HA4, HA10 y ZA3-S fue de 150 ppm y aíslan HA9 creció positivamente
hasta 200 ppm. Otras cepas restantes tenían MIC de tan sólo 50 ppm. Las cepas que fueron capaces
de resistir al menos 100 ppm (HA3, HA4, HA6, HA9 y ZA3-S) se caracterizaron morfológicamente y
también por la tinción de Gram ( Tabla 2 ).
3.2. optimización de crecimiento
3.2.1. factor de crecimiento de la salinidad
El efecto de las concentraciones de salinidad de 10, 15, 20 y 25 g L -1 NaCl de la densidad de
crecimiento de los aislados más prometedores se estudió. El crecimiento (densidad óptica) de
cultivos los aislados con niveles de salinidad variables en presencia y ausencia de 10 g L -1 de Hg se
compararon para cada aislado ( Figura 2 ). Está claro que la concentración de salinidad óptima para
todas las cepas de HA se encontró que era 10 g L -1 tanto en la presencia y
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tabla 1
nivel de tolerancia (A) Crecimiento de cepas bacterianas a la concentración de mercurio. El crecimiento se observó mediante la medición de la densidad óptica a 600 nm y después de 3 días de incubación a 35 ° C, y (B) la respuesta de crecimiento de

cepas bacterianas recogidas a las concentraciones de mercurio. El crecimiento se observó por la densidad de crecimiento en medio de agar LB después de la extensión de cultivos de caldo tratadas después de 24 h de incubación a 35 ° C.

(A) el nivel de tolerancia Crecimiento de cepas bacterianas a la concentración de mercurio concentración de mercurio (ppm)

0 10 20 40 60 100 150 200

HA1 0,146 una 0,027 do 0,025 do 0,026 do 0,035 do 0,096 segundo 0,126 ab 0,032 do
HA2 0,189 una 0,036 discos compactos 0,048 do 0,046 do 0,056 do 0,137 segundo 0,110 segundo 0,020 re
HA3 0,426 una 0,334 segundo 0,042 re 0,042 re 0,038 re 0,128 do 0,116 do 0,004 mi
HA4 0,186 una 0,032 discos compactos 0,038 discos compactos 0,045 do 0,052 do 0,122 segundo 0,086 antes de Cristo 0,014 re
HA5 0,202 una 0,050 do 0,049 do 0,055 do 0,072 antes de Cristo 0,083 segundo 0,065 antes de Cristo 0,003 re
HA6 0,128 una 0,055 antes de Cristo 0,061 antes de Cristo 0,043 do 0,047 do 0,115 una 0,072 segundo 0,011 re
HA9 0,224 una 0,037 re 0,034 re 0,030 re 0,033 re 0,098 do 0,144 segundo 0,008 mi
HA10 0,074 do 0,017 mi 0,027 Delaware 0,035 re 0,037 re 0,106 segundo 0,351 una 0.000 mi
ZA1-S 0,142 una 0,036 do 0,041 do 0,036 do 0,039 do 0,106 segundo 0.000 re 0.000 re
ZA2-S 0,147 una 0,030 do 0,034 do 0,034 do 0,036 do 0,103 segundo 0.000 re 0.000 re
ZA3-S 0,121 segundo 0,028 discos compactos 0,034 do 0,035 do 0,037 do 0,105 segundo 0,392 una 0.000 re

(B) la respuesta de crecimiento de cepas bacterianas recogidas a las concentraciones de mercurio HgCl 2 ( ppm)

HA1 HA2 HA3 HA4 HA5 HA6 HA9 HA10 ZA1-S ZA2-S ZA3-S

0 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
50 + + + + + + + + + + + + + + + +
100 - - + + + + + - + + - - - + + +
150 - - - + - - + + + + - - +
200 - - - - - - + + - - - -

HA1 a HA10 se refiere a cepas bacterianas aisladas de suelo recogida de área de manglar costero Qatari mientras ZA1-S, ZA2-S y ZA3-S se aislaron de muestras de suelo Dukhan sabkha. Dentro de cada prima, los
valores medios con letras comunes no son significativamente diferentes PAG ≤0.05 según la prueba de Tukey.

ausencia de mercurio en los medios de comunicación. Para ZA3-S, la salinidad óptima fue de 25 g L -1 en el 4. Discusión
control, mientras que cuando se expone al mercurio era 10 g L -1

( Figura 2 ).
3.2.2. factor de crecimiento de pH
Se estudió el efecto de pH variable de medios (5, 6, 7 y 8) de la densidad de crecimiento de los
aislados más prometedores. El crecimiento (densidad óptica) de cultivos los aislados con niveles de
pH variables en presencia y ausencia de 10 ppm de Hg se compararon para cada aislamiento ( Fig. 3 ).
El pH óptimo para el control fue de entre 7 y 8 por casi todos los aislados, mientras que en presencia
de Hg, pH casi no tenía efecto sobre el crecimiento. Para ZA3-S, el pH óptimo fue de entre 5 y 6 ( Fig.
3 ).
3.3. Eficiencia de los aislamientos para la eliminación de mercurio (II) extraídos de las lámparas fluorescentes
desechadas
Se encontró que la concentración de Hg en el polvo extraído de las lámparas fluorescentes para
ser 7,9 ppm. Fig. 4 representa la eficacia de las cepas aisladas en la eliminación de extraído
mercurio presente en medios LB después de 6 días de incubación. Análisis de los datos por el test de
Tukey mostró que las cepas HA3, HA4 y ZA3-S no son significativamente diferentes PAG ≤0.05, por lo
tanto tienen eficacias de Bio-captación similares entre 60 y 70%. La cepa bacteriana con la mayor
eficiencia bio-absorción fue HA9 con un porcentaje de 98,9% eliminado del mercurio extraído. La
siguiente cepa más eficiente era HA6 con eficiencia bio-absorción de 96,7%, y ambas cepas HA6 y
HA9 no fueron significativamente diferentes en PAG ≤0.05 según la prueba de Tukey.
3.4. Identificación de posibles cepas bacterianas
Es bien conocido que el medio costero de Qatar está expuesta a una amplia variedad de
contaminantes de metales pesados, tanto desde fuentes internas, así como industriales. La
disponibilidad de cepas de bacterias resistentes al mercurio de este modo se puede encontrar
después de la detección de tales sedimentos. Ocho de diez cepas Hg-tolerantes apantallados de
manglares costeros qataríes sedimentación mentos fueron capaces de tolerar un mínimo de 5 ppm
de HgCl 2 Después de tres días. Además, 3 cepas ZA1-S, ZA2-S y ZA3-S se aislaron de muestras de
suelo Dukhan sabkha también fueron encontrados para tolerar un mínimo de 5 ppm de nivel de
mercurio. Las mediciones de DO en las concentraciones más bajas parecen estar aumentando
ligeramente a medida que aumenta el tratamiento con- centración, por no decir casi lo mismo. Sin
embargo, similar a la prueba de tolerancia para las cepas pre-aislado ZA, cuando la concentración
alcanzó los 100 y 150 ppm de los valores de DO aumentó bruscamente a continuación se dejó caer a
una concentración de 200 ppm ( Figura 1 ). Esto se observó con todas las cepas estudiadas, así como
después de repetir el experimento para una segunda vez. Se plantea la hipótesis de que el cambio
en el color de caldo de cultivo a marrón causó este alto efecto absorbancia ya que estaba mostrando
el color en ambas 100 y 150 tubos de cultivo de tratamiento ppm ( Fig. 3 ). Por otra parte, se informó
de que cuando las bacterias se exponen a Hg, un color marrón se forma debido a una reacción de
Hg con un poco de sustancia liberada por las bacterias, o la bioacumulación del metal, seguido por
su excreción en el medio ambiente en una forma reducida químicamente ( Lima e Silva, 2012 ). Para
explicar esta tendencia en ( Figura 1 ), Inicialmente la adición de mercurio se detiene el crecimiento de
bacterias en comparación con la presencia de mercurio en los medios de comunicación, entonces la
medida que aumenta la concentración, la más intensa reacción reduc- ción tiene lugar y oscurece los
medios de comunicación. En otras palabras, la reacción de bioacumulación y la reducción de
mercurio que se lleva a cabo por las bacterias es más notable (color marrón más intenso) a altas
concentraciones de mercurio. Por otra parte, cuando la concentración de tratamiento de mercurio es
aún mayor (200 ppm y más), las bacterias son incapaces de crecer y no la reducción química del
mercurio se lleva a cabo, por lo tanto, el color (absorbancia) es baja en la intensidad y también lo es
los valores de DO . Una cantidad de 100 l de caldo de cultivo de prueba fromMIC se extendió en
placas para confirmar el crecimiento real de los aislados tratados, y a partir de ( tabla 1 ) Se dedujo la
MIC para cada cepa. MIC para los aislados HA3 y fue HA6

Los aislados bacterianos potenciales fueron caracterizadas basado en las características micro
y macroscópicas morfológicas ( Tabla 2 ) E identificado mediante MALDI-TOF MS. Cuatro de cinco
cepas bacterianas potenciales en mercurio bio-absorción pertenecen al género Bacillus y sólo una
cepa pertenecen al género Acinetobacter ( Tabla 3 ).

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Figura 1. respuesta de crecimiento de cepas bacterianas recogidas a las concentraciones de mercurio. El crecimiento se observó mediante la medición de la densidad óptica a 600 nm y después de crecimiento en caldo LB y 3 días de
incubación a 35 ° C. HA1 a HA10 se refiere a cepas bacterianas aisladas de suelo recogida de área de manglar costero Qatari mientras ZA1-S, ZA2- S y ZA3-S se aislaron a partir de muestras Dukhan sabkha.

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Figura 2. Efecto de la salinidad (concentración de NaCl) sobre el crecimiento de HA3, HA4, HA6, HA9, y ZA3-S cepa bacteriana se cultiva en medio de caldo LB, en ausencia (A) y en presencia de 10 ppm HgCl 2 ( SEGUNDO). Dentro de
cada gráfico, los valores medios con letras comunes no son significativamente diferentes PAG ≤0.05 según la prueba de Tukey. Las barras de error representan el error estándar de las medias (N = 5). aislamientos bacterianos se
identificaron utilizando MALDI-TOF MS como sigue: HA3 Bacillus pumilus; HA4 Bacillus infantis;
HA6 Bacillus marisflavi; HA9 schindleri Acinetobacter; y ZA3-S Bacillus pumilus ( para más detalles, véase Tabla 3 ).

222
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Figura 2. ( continuado)

Tabla 2 nivel de salinidad informó para las bacterias degradante de la contaminación aisladas de ambiente
morfología microscópica y la tinción de Gram de los aislados más prometedores. salino ( Hu y Li, 2007 ; Li et al., 2013 ). Para el pH óptimo de crecimiento, casi todas las cepas de HA
mostraron la densidad más alta de crecimiento al nivel de pH entre 7 y 8 con la excepción de HA3
HA3 HA4 HA6 HA9 ZA3-S
cepa que favoreció pH 6. Se obtuvieron resultados similares en un estudio que aísla una bacteria
La tinción de Gram + + + - + marina Rheinheimera aestuari a partir de los sedimentos costeros en Corea del Sur ( Baek y Jeon,
Forma bacilos bacilos bacilos bacilos bacilos
2015 ). Para ZA3-S, ya que esta cepa se recogió desde un lugar diferente, se encontró que el pH
colonia de color Blanco naranja Amarillo Amarillo De color amarillo pálido
óptimo para ser 5-6; esto puede ser debido a la diferente acidez de la zona de la que se recogieron
Aspecto colonia Irregular Circular Circular Circular Circular
Margen Ondular Todo Ondular Todo Todo las muestras de sedimento.
Elevación Plano Elevado Plano Convexo Plano

encontrado que 100 ppm, mientras que HA4, HA10 y ZA3-S fue de 150 ppm. In- terestingly, aislar
HA9 era capaz de tolerar todas las concentraciones de tratamiento de hasta 200 ppm, mientras que
las otras cepas restantes tenían MIC de tan sólo 50 ppm ( tabla 1 ). Las cepas que fueron capaces de
resistir al menos 100 ppm (HA3, HA4, HA6, HA9 y ZA3-S) se considera que tiene una resistencia
significativa al mercurio con concentraciones de tolerancia mucho más altas que se informó
anteriormente ( De et al., 2003 ; Al-Ghouti et al., 2016 ). Se seleccionaron aquellas cepas para los
experimentos de optimización de crecimiento para estudiar el efecto de la salinidad y pH de su
densidad de crecimiento. El crecimiento óptimo de la salinidad para todos los aislados en la
presencia o ausencia de mercurio se encontró que era 10 g L -1 o 1% de NaCl (salinidad normal de
medios LB). Esta concentración salinidad óptima de 10 ppm fue también el favorecida
De acuerdo con varios autores, el método MALDI-TOF MS para identi- ficar microorganismos
ofrece una identificación válida para ensayos de selección de varias copias con ventajas de
sensibilidad, de bajo coste y rápido procesa- miento ( Greis et al., 2006 ; Bibi et al., 2018 ). Cuatro de
cada cinco cepas bacterianas potenciales en mercurio bio-absorción eran pertenecen a género Bacilo
y sólo una cepa fue pertenecen a género Acinetobacter ( Tabla 3 ). Los aislados de Bacilo especies
son muy bien conocidos en tolerar Hg y otros metales pesados ​( Kamala-Kunnan y Lee, 2008 ; Francois
et al., 2011 ; de Lima e Silva, 2012 ). Dos cepas diferentes (HA6 y HA3) fueron identificados como B.
pumilus y se encontró que tolerar hasta 100 ppm de mercurio en forma de HgCl 2. Coinciden con el
presente estudio B. pumilus También se aisló del sedimento marino costero de la India y reportado
como Hg bio-remediater ( De Jaysankar et al., 2007 ). HA4 y HA6 fueron identificados como B. infantis
y

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(Leyenda en la página siguiente)

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Fig. 3. Efecto del pH sobre el crecimiento de HA3, HA4, HA6, HA9, y ZA3-S cepa bacteriana se cultiva en medio de caldo LB, en ausencia (A) y en presencia (B) de 10 ppm HgCl 2. Dentro de cada gráfico, los valores
medios con letras comunes no son significativamente diferentes PAG ≤0.05 según la prueba de Tukey. Las barras de error representan el error estándar de las medias (N = 5). aislamientos bacterianos se identificaron
utilizando MALDI-TOF MS como sigue: HA3 Bacillus pumilus; HA4 Bacillus infantis; HA6 Bacillus marisflavi; HA9 schindleri Acinetobacter; y ZA3-S Bacillus pumilus ( para más detalles, véase Tabla 3 ).

Fig. 3. ( continuado)

B. marisflavi y se encontró que tolerar 150 y 100 ppm de Hg, respectivamente. En otro estudio, B. donde la eficiencia bio-absorción de cepas bacterianas en ese estudio no alcanzó niveles por encima
marisflavi se aisló a partir de un plano de marea del Mar Amarillo en Corea y caracterizado como de 63% ( Al-Ghouti et al., 2016 ). Además, la eficiencia de eliminación (II) de mercurio de cepas HA6, B.
halófilos. Por lo que sabemos, B. infantis y B. marisflavi No se informó previamente como marisflavi y HA9, bacter Acineto- sp. superado la eficiencia bioacumulación informado (70%) de una
bioremediadores mercurio. En el presente estudio, se identificó como HA9 bacter Acineto- sp. y para cepa bacteriana marina recogida de un área de manglar en China ( Deng y Wang, 2012 ). Además,

ser tolerante hasta 200 ppm de mercurio. Acinetobacter esas cepas potenciales remediar fueron capaces de superar una cepa recogida de sedimentos
contaminados en Australia que remediadas 79% de mercurio ( Mahbub et al., 2016 ). Los resultados

cepas se aislaron de Onondaga Lake en los EE.UU. y encontraron a ser tolerante a Hg ( Caslake et eficacia de eliminación también mostraron consistencia con la eficiencia de cepas recogidas de una

al., 2005 ). laguna en Italia con la eliminación de 96% de mercurio lixiviada a partir de sedimentos contaminados

El mercurio (II) la eficiencia de eliminación fue la más alta para HA6, B. Maris- ( Pepi et al., 2011 ). Dado que el instrumento CVAAS utilizado es capaz de medir la concentración

Flavi y HA9, Acinetobacter sp. mostrando 96,7% y 98,9% de bio-UP- eficiencia toma respectivamente. total de mercurio y no detecta las concentraciones de diferentes especies de mercurio (Hg 2+

Otras cepas eran capaces de eliminar más del 60% de las lámparas fluorescentes compactas extrae el
mercurio de los medios de comunicación. Estos resul- tados indican las potencialidades más altos de las
cepas aisladas en este estudio que las cepas estudiadas previamente aislados a partir de sedimentos de
Qatar y Hg 0) y el sobrenadante medido (medios de comunicación) estaba libre de células, puede

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Fig. 4. La eficiencia de remoción de cepas bacterianas potencial bioremediating COL- cionado del suelo
qatarí y se cultivaron en medio de caldo LB, en presencia de mercurio de las lámparas fluorescentes (7,9
ppm). Los datos son la media de seis réplicas. porcentaje de eficiencia fue encontrado por% = (μC-mT /
mT) * 100% donde C = concentración media de mercurio sin tratamiento bacteriano (control) y T es la
concentración media de mercurio en la presencia de bacterias y después de 6 días de incubación ción.
HA3 a HA9 se refiere a cepas bacterianas aisladas de suelo recogida de zona costera Qatari mientras
ZA3-S se aisló de muestras Dukhan sabkha. aislamientos bacterianos se identificaron utilizando
MALDI-TOF MS como sigue: HA3 Bacillus pumilus; HA4 Bacillus infantis; HA6 Bacillus marisflavi; HA9 dleri
Acinetobacter schin-; y ZA3-S Bacillus pumilus ( para más detalles, véase Tabla 3 ). Los valores medios con
letras comunes no son significativamente diferentes PAG ≤0.05 según la prueba de Tukey. Las barras de
error representan el error estándar de las medias (N = 5).
Tabla 3
La identificación de los aislamientos por MALDI-TOF MS y anota identidad.
Número cepa Identificación
HA9 schindleri Acinetobacter
HA6 Bacillus marisflavi
ZA3-S Bacillus pumilus
HA4 Bacillus infantis
HA3 Bacillus pumilus
una La coincidencia de perfil se expresó en una escala logarítmica de 0 a 3 puntuación. La puntuación se
interpretó como por las instrucciones del fabricante en el que 2,3 a 3,000 puntuación indica la identificación a
nivel de especie altamente probable, 2,00-2,299 muestra identificación género y la identificación a nivel de
especie probable y 1,70-1,999 puntuación se designa como identificación del nivel probable género.
se deduce que el mecanismo de remediación fue por bio-absorción (acumulación). técnicas de
remediación que son por medio de procesos de bioacumulación o biosorción se produce
ordinariamente en microorganismos, dependiendo de la especie y las características de los
microorganismos, así como el tipo de metal pesado ( Ledin, 2000 ). bioacumulación es el proceso en
el que la energía se utiliza de metabolismo de la célula para transferir metales pesados ​a la célula y
acumular internamente ( Ledin, 2000 ). Por otro lado, biosorción implica la adsorción de partículas de
metales pesados ​a la superficie de las células sin el consumo de energía ( Volesky, 1999 ). La pared
celular bacteriana es la parte principal de la célula que puede adsorber fácilmente partículas de
metales pesados, ya que contiene grupos funcionales aniónicos para que los metales pesados
​pueden adsorber. Según Sinha y Khare (2012), una cepa microbiana de Enterobacter sp. es capaz de
eliminar el mercurio de su medio de crecimiento a través de su acumulación en forma de partículas
de tamaño nanométrico en el citoplasma así como en la pared celular. Más-más, Deng y Wang (2012)
informado de que un Pseudomonas sp. aislado de sedimentos marinos retirados y acumulado más
Hg 2+ en la superficie celular. El bio-absorción de mercurio fue más probable realiza a través de los
grupos funcionales unidos en la pared celular bacteriana tales como carboxilo, fosfato, hidroxilo, tio y
piridina grupos que contribuido a Hg 2+ la absorción, y grupos carboxilo fueron los más importantes en
esta acción. En su estudio, también mencionaron que luego desorción
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de la forma de mercurio las células se pueden hacer posible con el uso de agentes quelantes tales
como EDTA. mercurio desorbido puede de este modo, ser utilizada en el ciclismo re- de desechos que
contienen mercurio. Por lo tanto, vale la pena señalar que HA9 tensión, Acinetobacter sp. tiene
propiedades distintivas de re- sistencia (hasta 200 ppm) y bio-absorción de altas concentraciones de
mercurio (hasta 98,8%). Tales cepas prometedoras pueden ser aplicados en la biorremediación de
áreas y residuos altamente contaminado con mercurio, otros que las lámparas fluorescentes gastados.
5. Conclusión
riesgos perjudiciales para la salud humana y ambiental acompañan a disposición sin tratamiento
de desechos que contienen mercurio, tales como lámparas fluorescentes compactas. Esto lleva a la
necesidad de aplicar técnicas de biorremediación por bacterias móviles mercurio re aislados del
ambiente de Qatar. La proyección de muestras de sedimentos de la costa desde Qatar produjo un
total de diez cepas que eran al menos tolerante a 5 ppm de Hg. Cinco cepas (HA3, HA4, HA6, HA9 y
ZA3-S) tienen una MIC de al menos 100 ppm de Hg, especialmente con HA9 superior a 200 ppm de
concentración inhibitoria. En presencia de Cury mer-, estas cepas mostraron un crecimiento óptimo a
1% de salinidad (10 g L -1
NaCl) y no hay diferencia en el crecimiento con pH variable. La evaluación de la eficiencia bio-absorción indicó
una alta capacidad de las cepas aisladas en la eliminación de mercurio extraído de las lámparas fluorescentes
compactas en comparación con estudios previos realizados en la biorremediación mercurio. Por lo tanto, las
cepas bacterianas de esta investigación puede ofrecer posibilidades de biorremediación de mercurio que
pueden ser utilizados en el tratamiento de los desechos contaminados con mercurio antes de la eliminación,
así como permitir que el reciclaje del mercurio de las lámparas fluorescentes compactas gastados. Otros usos
pueden estar en ex-situ aplicaciones para eliminar el mercurio de los sedimentos con- contaminado. Tales
aplicaciones pueden ser necesarias especialmente en sitios con niveles extents de contaminación de mercurio
de alta, en el que disminuiría sustancialmente el contenido de mercurio en los sedimentos contaminados antes
de su almacenamiento seguro, disminuyendo de ese modo los costes y las emisiones de otros métodos
físicos química alternativa y.
Puntuación una
En esta investigación, el método de cuantificación de crecimiento de cultivo se puede sustituir
1.92
2.08 por otros métodos tales como la medición de la biomasa como peso seco de las células bacterianas
1.82 en lugar de tomar mediciones de DO para evitar interferencia de la química inducida cambio de color
2.05
en las culturas. Además, la identificación molecular de las cepas potenciales es necesario y puede
1.82
ser una contribución significativa a este estudio en el futuro.
Reconocimiento
Este documento ha sido posible gracias a la subvención # UREP (17-066-1-004) desde el fondo de
investigación nacional de Qatar (un miembro de la Fundación Qatar). Las declaraciones hechas en este
documento son de la exclusiva responsabilidad del autor (s).
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