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PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA CARRERA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

DISERTACIÓN PREVIA A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

ANÁLISIS MANUAL DE INMUNOGLOBULINA E TOTAL SÉRICA MEDIDA POR INMUNOELISA EN EL LABORATORIO CLÍNICO DEL CENTRO MEDICO MEDICENTRO EN NIÑOS DE 1 A 11 AÑOS DE EDAD QUE CONSTAN EN LISTAS DE LOS CENTROS INFANTILES DEL BUEN VIVIR” Y LA ESCUELA FISCAL “LA LIBERTAD” DE LA PARROQUIA SAN ANTONIO DE PICHINCHA EN EL MES DE DICIEMBRE, 2015

KAREN REBECA GÓMEZ SAMPEDRO

DIRECTORA: MSC. NORA ALBORNOZ

QUITO, 2017

DECLARACIÓN Y AUTORIZACIÓN

Yo, Karen Rebeca Gómez Sampedro, con C.I. 17197954-3, autora del trabajo de graduación intitulado “ANÁLISIS MANUAL DE INMUNOGLOBULINA E TOTAL SÉRICA MEDIDA POR INMUNOELISA EN EL LABORATORIO CLÍNICO DEL CENTRO MEDICO MEDICENTRO EN NIÑOS DE 1 A 11 AÑOS DE EDAD QUE CONSTAN EN LISTAS DE LOS CENTROS INFANTILES DEL “BUEN VIVIR” Y LA ESCUELA FISCAL “LA LIBERTAD” DE LA PARROQUIA SAN ANTONIO DE PICHINCHA EN EL MES DE DICIEMBRE, 2015” previa a la obtención del grado académico de BIOQUÍMICA CLÍNICA en la Facultad de Medicina:

1. Declaro tener pleno conocimiento de la obligación que tiene la Pontificia Universidad Católica del Ecuador, de conformidad con el artículo 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior de entregar a la SENESCYT en formato digital una copia del referido trabajo de graduación para que sea integrado al Sistema Nacional de Información de la Educación Superior del Ecuador para su difusión pública respetando los derechos de autor.

2. Autorizo a la Pontificia Universidad Católica del Ecuador a difundir a través del sitio web de la Biblioteca de la PUCE el referido trabajo de graduación, respetando las políticas de propiedad intelectual de la Universidad.

KAREN REBECA GÓMEZ SAMPEDRO

C. I. 171979544-3

DEDICATORIA

El tiempo invertido para la creación del presente trabajo ha sido una lucha constante en la cual he tenido que dejar algunas cosas de lado para poder presentar este estudio, por lo tanto, considero que es prudente dedicar todo aquel esfuerzo y el corazón que he puesto a lo largo de éste proyecto a mis padres, quienes a pesar de los momentos difíciles nunca me han abandonado. A ellos, quienes me han ayudado durante las noches en vela y las tardes de estudio durante mi carrera estudiantil.

Darles éste pequeño pedazo de lo que soy es absolutamente necesario, porque es gracias a ellos y a todas sus enseñanzas, que he llegado a ser la persona que soy ahora. Les dedico éste trabajo, con todo mi amor y humildad, esperando que los llene de orgullo y de felicidad.

AGRADECIMIENTO

En primer lugar, me gustaría agradecer a Dios por haberme dado la vida y por ser mi más grande maestro y guía en cada momento.

Quisiera agradecer a mi familia por brindarme todo su apoyo desde el momento en que nací. Aunque sé que no ha sido fácil para ellos, me han ayudado en todas las maneras posibles en cada paso que he dado, enseñándome a no darme por vencida en la lucha constante que representa la vida.

A mi padre que me ha apoyado económicamente a lo largo de la carrera y para la

realización de ésta tesis, mi madre que me colaboró con la toma de muestras necesarias para la elaboración de exámenes y a mi hermana por estar siempre a mi lado ayudándome a seguir adelante.

Agradezco a la Pontificia Universidad Católica del Ecuador, en especial a la carrera de Bioquímica Clínica y todos los docentes que me ayudaron a formar como profesional.

Es necesario agradecer de igual manera a la Magister Nora Albornoz, directora de tesis,

por su guía y por dedicar su tiempo para la revisión de la tesis a continuación presentada, así como también a la Magister Rosa Chiriboga como lectora, por su invaluable

colaboración e instrucción como docente y a la Magister Sandra Andrade igualmente como lectora, por todo su apoyo a lo largo de la carrera, y por ser un modelo de profesional digno

de seguir.

RESUMEN

Análisis manual de Inmunoglobulina E total sérica medida por Inmunoelisa en el laboratorio clínico del centro médico Medicentro en niños de 1 a 11 años de edad que constan en listas de los centros infantiles del “Buen Vivir” y la escuela fiscal “La Libertad” de la parroquia San Antonio de Pichincha en el mes de diciembre, 2015

La rinitis alérgica es una enfermedad crónica que afecta a los individuos desde niños a partir de la edad escolar hasta adultos y es diagnosticada dentro de los 5 y 20 años de edad.

Esta patología es una enfermedad de hipersensibilidad tipo I, mediada por Inmunoglobulina E ubicada en la superficie de mastocitos y basófilos, en la que el sistema inmunitario actúa de forma exacerbada frente a un antígeno no patógeno causando lesión tisular en el organismo del individuo.

Los síntomas generales de la rinitis alérgica son: rinorrea, prurito nasal, obstrucción nasal, congestión conjuntival y de senos paranasales, estornudos y anosmia; estos síntomas conllevan al malestar general del paciente causando en los niños que tiendan a ausentarse a clases afectando directamente a su capacidad cognitiva y de memoria. Los adultos de igual manera presentan estos síntomas causando malestar general y por consiguiente afectando su capacidad laboral.

Es importante un diagnóstico temprano y tratamiento adecuado para que la calidad de vida del individuo no se vea afectada.

En el presente estudio se realizó la cuantificación de Inmunoglobulina E total sérica por medio del método INMUNOELISA manual en niños que acuden a los centros infantiles del buen vivir de la parroquia de San Antonio de Pichincha en la ciudad de Quito, Ecuador, en el cual se tomaron muestras de sangre a todos los niños que presentaron el consentimiento informado firmado por el representante legal. Posteriormente, dichas muestras fueron procesadas en el laboratorio del centro médico Medicentro.ec ubicado al norte de la ciudad de Quito.

Palabras clave: Hipersensibilidad, Rinitis alérgica, Inmunoglobulina E.

ABSTRACT

Allergic rhinitis is a chronic disease that affects individuals since the age of 5 years old until their adulthood, and it’s diagnosed between 5 to 20 years old.

This pathology is a hypersensitiveness I disease mediated by Immunoglobulin E that is located in the surface of mast cells and basophile. The immunity system has an exacerbated reaction against a non-pathogen antigen causing tissue lesion in the organism of the individual.

The general symptoms of allergic rhinitis are: rhinorrhea, nasal itch, nasal obstruction, conjunctive and paranasal congestion, sneeze, and anosmia. These symptoms carry general malaise in the patient, therefore causing those children to be absent at school, affecting directly to their cognitive and memory capacity. Adults also show those symptoms causing general malaise and consequently affecting their work capacity.

An early diagnostic and adequate treatment is essential, for the individual’s quality of life not to be affected.

This study aims to quantify the total serum Immunoglobulin E by the ELISA method (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) in children that attend to the Children’s Center of the Good Living in San Antonio de Pichincha parish in Quito, Ecuador. Study in which blood samples were taken from 215 children who presented the consent signed by their legal representative. Afterwards, those samples were processed in the clinical laboratory of the medical center Medicentro.ec located at the north of Quito.

Key words: Hypersensitiveness, Allergic rhinitis, Immunoglobulin E.

CONTENIDO

RESUMEN

IV

ABSTRACT

V

INDICE

DE

TABLAS

IX

ÍNDICE DE ILUSTRACIONES

VIII

INDICE DE GRÁFICOS

X

ÍNDICE

DE

ANEXOS

XI

ÍNDICE

DE

ABREVIATURAS

XI

INTRODUCCIÓN

XIII

1

1

1.1. JUSTIFICACIÓN

1

1.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

3

1.3. OBJETIVOS:

4

Objetivo General:4

4

Objetivos Específicos:4

4

Limitación del estudio5

5

6

6

2.4.

MARCO TEÓRICO CONCEPTUAL

6

Antecedentes

Antecedentes

6

2.5.

MARCO TEÓRICO

9

Inmunoglobulina E9

9

Hipersensibilidad9

9

2.5.6.1. Hipersensibilidad tipo I

11

2.5.6.2. Fase de sensibilización

11

2.5.6.3.

Receptores de la IgE

12

 

2.5.6.4. Fase de efectora temprana

14

2.5.6.5. Degranulación

14

2.5.6.6. Fase efectora tardía

18

2.5.6.7. Infiltrado celular

21

2.5.6.8. Citocinas relacionadas con la IgE y la alergia

21

2.5.6.9. Rinitis alérgica

22

2.5.6.10. Síntomas y Calidad de vida

24

2.5.6.11. La IgE contra agentes alérgenos causantes de rinitis alérgica

24

2.5.6.12. Alérgenos causantes de rinitis alérgica

25

2.5.6.13. Diagnóstico alergológico

29

2.6.

MARCO CONCEPTUAL:

30

32

32

3.1.

MARCO METODOLÓGICO

32

Materiales y métodos

Materiales y métodos

32

3.1.1.1. Tipo de estudio

32

3.1.1.2. Tipo de muestreo

33

3.1.1.3. Tamaño de la muestra

33

3.1.1.4. Decisión

35

3.1.1.5. Criterios de inclusión

35

3.1.1.6. Criterios de exclusión

35

3.2.

OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES

36

3.2.1. Variable dependiente

36

3.2.2. Variable independiente

36

3.3.

MATERIALES Y PROCESO

37

3.3.1.

Materiales

37

3.3.2.

Reactivos

37

3.3.3.

Procedimiento

38

3.3.3.1. Fase Uno

38

3.3.3.2. Fase Dos

38

3.3.3.3. Fase Tres

38

 

2.6.6.14.

Fase Cuatro

39

3.3.3.4.

Fase Cinco

41

42

42

4.1. RESULTADOS

42

4.2. RELACIÓN ENTRE IGE Y OTROS FACTORES EVALUADOS

52

4.3. DISCUSIÓN

63

65

65

5.1. CONCLUSIONES

65

5.2. RECOMENDACIONES

66

BIBLIOGRAFÍA

68

ANEXOS

72

FOTOGRAFÍAS

77

 

ÍNDICE DE ILUSTRACIONES

Ilustración 1. Fases de la reacción alérgica

12

Ilustración 2. Activación de mastocitos y basófilos

17

Ilustración 3. Reacción tardía mediada por

20

Ilustración 4. Mecanismos de la reacción

22

Ilustración 5. Hipótesis de la higiene

23

Ilustración 6. Reacción mediada por IgE

25

Ilustración 7. Esquema Diagnóstico Tratamiento

30

INDICE DE TABLAS

Tabla 1. Clasificación de Gell y Coombs de

10

Tabla 2. Productos liberatos de los mastocitos y los basófilos

16

Tabla 3. Productos contenidos en el interior de los gránulos de los eosinófilos

19

Tabla 4. Clasificación de la rinitis

23

Tabla 5. Alérgenos

27

Tabla 6. Factores de riesgo para la aparición de las enfermedades alérgicas

28

Tabla 7. Centros Infantiles del Buen Vivir

33

Tabla 8.Cálculo Número de Muestra

34

Tabla 9. Definición de la prueba de IgE en el equipo STAT FAX

41

Tabla 10. Distribución según el Centro

42

Tabla 11. Distribución según Grupos Etarios

43

Tabla 12. Distribución según género y Centro

44

Tabla 13. Distribución según resultados de

45

Tabla 14. Distribución según presencia de Parasitosis Intestinal

46

Tabla 15. Distribución según resultados de

47

Tabla 16. Distribución según resultados de

48

Tabla 17. Distribución según valores de

49

Tabla 18. Distribución según resultados de

50

Tabla 19. Distribución según valores de Eosinófilos en Moco

51

Tabla 20. Tabla cruzada

53

Tabla 21. Tabla cruzada IgE*Grupo

54

Tabla 22. Tabla cruzada IgE*Parasitosis

56

Tabla 23. Tabla cruzada

57

Tabla 24. Tabla cruzada

58

Tabla 25. Tabla cruzada IgE*Eosinófilos en Sangre

59

Tabla 26. Tabla cruzada IgE*Eosinófilos en Moco

60

Tabla 27. Tabla cruzada Eosinófilos en Sangre*Eosinófilos en Moco

61

INDICE DE GRÁFICOS

Gráfico 1. Distribución según Centro

43

Gráfico 2. Gráfico Grupos Etarios

44

Gráfico 3. Centros Infantiles y Género

45

Gráfico 4. Resultados de IgE

46

Gráfico 5. Parasitosis

47

Gráfico 6. Niveles de

48

Gráfico 7. Resultados de

49

Gráfico 8. Resultados de

50

Gráfico 9. Resultados de

51

Gráfico 10. Resultados de Eosinófilos en Moco

52

Gráfico 11. Relación entre valores de IgE y Centros

54

Gráfico 12. Relación Resultados IgE y Grupos

55

Gráfico 13. Relación IgE y Parasitosis

56

Gráfico 14. Relación entre IgE y

58

Gráfico 15. Relación entre IgE y Segmentados

59

Gráfico 16. Relación entre IgE y Eosinófilos en moco

61

Gráfico 17. Relación entre Eosinófilos en sangre y en moco

62

ÍNDICE DE ANEXOS

Anexo 1: Consentimiento informado

73

Anexo 2: Certificado de Calibración de Pipeta

74

INDICE DE FOTOGRAFÍAS

Fotografía 1. Consentimientos informados autorizados y no autorizados

77

Fotografía 2. Centros Infantiles del Buen Vivir de la parroquia de San Antonio de

Pichincha y Escuela fiscal “La

79

Fotografía 3. Toma de muestras sanguíneas en los Centros Infantiles del Buen

80

Fotografía 4. EQUIPO LECTOR DE ELISAS MANUALES STAT-FAX 4700

82

Fotografía 5. REACTIVOS Y

83

Fotografía 6. PROCESAMIENTO DE

83

Fotografía 7. ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS

86

ABREVIATURAS

Ac:

Anticuerpo

Ag:

Antígeno

ARIA:

Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma

C. I. B. V.:

Centro Infantil del Buen Vivir.

GAD:

Gobierno Autónomo Descentralizado

HI:

Hipersensibilidad tipo I

IgE:

Inmunoglobulina E

MIES:

Ministerio de Inclusión Económica y Social

nm:

Nanómetros

RA:

Rinitis alérgica

WAO:

World Allergy Organization

INTRODUCCIÓN

La hipersensibilidad de tipo I es una reacción exacerbada del sistema inmunitario, contra antígenos no patógenos mediada por la Inmunoglobulina E causando daño tisular en el organismo. Dentro de la hipersensibilidad de tipo I se pueden manifestar diferentes enfermedades o patologías como dermatitis atópica, urticaria, alergia ocular y rinitis alérgica.

Este estudio se enfoca en la rinitis alérgica, enfermedad crónica cuya epidemiología va aumentando cada vez más, siendo afectados los individuos a lo largo de su vida desde la niñez.

Los síntomas más frecuentes que un paciente con rinitis alérgica manifiesta, son estornudos recurrentes, prurito nasal, obstrucción nasal, paranasal y conjuntival y anosmia. Los pacientes exhiben trastornos de sueño, cansancio, disminución de la capacidad cognitiva y de memoria en niños y en adultos disminución en su capacidad laboral.

La prevalencia de la rinitis alérgica ha ido en aumento, debido a hábitos perjudiciales para la salud como el tabaquismo, sedentarismo y contaminación ambiental. Otro factor predisponente, para manifestar rinitis alérgica que está en estudio es la higiene excesiva. Los niños actualmente viven en hogares muy limpios, son bañados con mucha frecuencia y vacunados contra numerosas enfermedades. Esto provoca que el sistema inmunitario se confunda cuando un antígeno no patógeno ingresa al organismo, existiendo una respuesta inmune innecesaria, exacerbada, causando daño tisular y sensibilizando al individuo.

Los centros infantiles del buen vivir de la parroquia de San Antonio de Pichincha se encuentran ubicados en sectores áridos, secos y rodeados de canteras, siendo un factor ambiental predisponente para que los niños, que acuden a estos centros infantiles desarrollen problemas alérgicos como rinitis alérgica.

Los niños participantes del estudio, presentan varios de los síntomas generales descritos en la bibliografía como rinorrea, estornudos y prurito nasal, consecuentemente presentan fatiga y decaimiento, seguido de ausencia a clases, afectando directamente su capacidad cognitiva y de memoria.

Es importante un diagnóstico temprano y tratamiento adecuado, en el paciente que presenta síntomas indicativos de rinitis alérgica. En el caso de que no se diagnostique, ni se trate la enfermedad, los síntomas se pueden agravar, aumentando el riesgo de presentar enfermedades de comorbilidad como asma, otitis, sinusitis, acrecentando así su cuadro clínico y su calidad de vida.

El objetivo principal de este estudio es determinar la prevalencia de Inmunoglobulina E, en los niños que asisten a los centros infantiles del buen vivir de la parroquia de San Antonio de Pichincha y la escuela fiscal de Tanlahua “La Libertad” por el método de ELISA manual, siendo un método económico, preciso, confiable y sensible.

1.1. Justificación

1.1. Justificación El diagnóstico temprano de alergias en niños es fundamental, para que la calidad de

El diagnóstico temprano de alergias en niños es fundamental, para que la calidad de vida de los individuos no se vea afectada desde una edad temprana. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Existe un sinnúmero de agentes alergénicos a los que los niños pueden presentar una reacción de hipersensibilidad inmediata mediada por IgE. A estos agentes alergénicos se los conoce como antígenos. Al tener contacto con estos alérgenos se despliegan varias complicaciones alérgicas. (Abbas, Lichtman, & Pillai, Inmunología Básica: funciones y trastornos del sistema inmunitario, 2014).

Una de las principales alergias en niños de edad escolar que se diagnostica antes de los veinte años de edad es la rinitis alérgica, enfermedad que afecta significativamente al paciente en su calidad de vida. Los individuos con rinitis alérgica presentan somnolencia y cansancio, afectando su capacidad cognitiva y rendimiento escolar. (Quezada, Gallardo, Jadue, Loosli, & Roessler, 2009).

Un diagnóstico temprano de rinitis alérgica, se lo puede determinar mediante la realización de varios exámenes de laboratorio clínico como pruebas cutáneas. Estas pruebas, expondrán la presencia de IgE específica en los mastocitos dérmicos. Determinación de IgE específica en suero, determinación de IgE total sérica y citología nasal que, a pesar de ser inespecífica, nos indica un aumento de eosinófilos. (Cardona Villa & Serrano Reyes,

2010).

La realización a tiempo, de exámenes de laboratorio clínico pertinentes para el estudio de rinitis alérgica, ayudará al médico tratante a definir el diagnóstico y un adecuado tratamiento para el paciente. (Zubeldia, Baeza, Jáuregui, & Senet, 2012).

Existen varias técnicas para la cuantificación de IgE total sérica, como la técnica de Radio Inmuno-ensayo (RIA) y la Citometría de flujo. Estas técnicas tienen un costo mayor en comparación a la técnica del ELISA manual.

La prueba de ELISA es una técnica sencilla de realizar y con un bajo costo en comparación con otras técnicas, siendo la técnica recomendada para utilizar en laboratorios pequeños con un manejo pequeño de pacientes. Está técnica nos indica, si el valor de la IgE está elevado; más no, nos indica, si está elevada por causa inflamatoria alérgica o por parasitosis.

Una desventaja de esta prueba, es que no diferencia si el aumento de Inmunoglobulina E total sérica, se debe a rinitis alérgica, parasitosis u otras causas. Por lo cual, se realizarán exámenes complementarios para diferenciarlo.

La técnica para descartar si la elevación de IgE total sérica se encuentra elevada por parasitosis, es el Coproparasitario, en el cual se observa microscópicamente los parásitos en la muestra de heces.

Una técnica que respalda a la confirmación de rinitis alérgica, es la determinación del porcentaje de eosinófilos en moco nasal. Los eosinófilos se presentan en la mucosa nasal en casos de inflamación alérgica, más no, en casos de gripe común.

La biometría hemática es una prueba de laboratorio clínico, que también corrobora si el valor de la IgE total sérica se debe a un proceso inflamatorio alérgico u otras causas. En la biometría hemática, la fórmula leucocitaria se invertiría, en el caso de que los síntomas que presentan los individuos sean debido a gripe viral.

El área de acción social de la carrera de Bioquímica Clínica de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador, realizará exámenes complementarios de laboratorio clínico para diferenciar si el incremento de IgE se debe a rinitis alérgica o parasitosis.

Dentro de los exámenes complementarios que se realizan por parte de acción social, se encuentra la determinación del porcentaje de eosinófilos en moco nasal, coproparasitario y biometría hemática. Todos estos exámenes junto al valor obtenido de IgE total sérica, nos confirman si los niños presentan una reacción inflamatoria alérgica causante de rinitis alérgica.

En los centros infantiles del buen vivir de San Antonio de Pichincha “Santo Domingo”, “José María García”, “Semillitas”, “Caritas Sonrientes”, “Capullitos de Luz” y la escuela fiscal “La Libertad” asisten 303 niños, los cuales presentan varios síntomas de rinitis alérgica como rinorrea, congestión nasal, estornudos y malestar general, consecuentemente afectando su vida diaria dentro y fuera de los centros infantiles.

Al cuantificar la Inmunoglobulina E total sérica, se desea confirmar que la inflamación de las vías respiratorias superiores que presentan los niños de estos centros infantiles es de origen alérgico y no por otras causas como gripe, ya que se podría mejorar la calidad de vida de estos niños combatiendo al agente efector alérgico y así permitir que los niños continúen asistiendo a los centros infantiles del Buen Vivir de la parroquia de San Antonio de Pichincha.

Estos exámenes complementarios, ayudarán a determinar si la elevación de los niveles de Inmunoglobulina E total sérica, es debido a una inflamación alérgica, parasitosis u otras causas.

1.2. Planteamiento del Problema

Los centros infantiles del Buen Vivir y la escuela fiscal “La Libertad”, están ubicados en la zona rural de la parroquia San Antonio de Pichincha, en consecuencia, se encuentran rodeados de canteras que propician un ambiente seco y lleno de polvo.

Los niños que asisten a los centros infantiles del Buen Vivir y la escuela “La Libertad”, día

a día se encuentran expuestos a los agentes alérgenos, debido a la alta cantidad de polvo y sequedad en el entorno.

La exposición continua a los alérgenos provoca en los niños varios síntomas como obstrucción nasal, congestión conjuntival y de senos paranasales, prurito nasal, estornudos, anosmia, rinorrea.

Todos estos síntomas son propios de la rinitis alérgica, enfermedad que altera el estado

general de los niños, provocando que los infantes tiendan a ausentarse al centro infantil o a

la escuela, afectando su capacidad de memoria y capacidad cognitiva.

Una de las pruebas de laboratorio clínico, para el diagnóstico de rinitis alérgica es la cuantificación de la Inmunoglobulina E total sérica; la cual, media la reacción inflamatoria de la Hipersensibilidad de tipo I o Hipersensibilidad inmediata.

La determinación de los niveles de Inmunoglobulina E total sérica, en los niños que viven

y asisten a los centros infantiles del Buen Vivir de San Antonio de Pichincha, donde las

condiciones sociodemográficas pueden causar rinitis alérgica es de suma importancia. Ya

que, con estos resultados y junto con el porcentaje de eosinófilos en moco nasal, el coproparasitario y la biometría hemática los médicos podrán dar un diagnóstico oportuno de posible rinitis alérgica. Esta acción se realizará en conjunto con el área de acción social de la carrera de Bioquímica Clínica, de la facultad de Medicina de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador

En el caso de no obtener un diagnóstico temprano, los síntomas se pueden exacerbar teniendo riesgo de presentar enfermedades de comorbilidad como asma, otitis media, sinusitis. Así su cuadro clínico podría agravarse y aún más, su calidad de vida.

Es importante un diagnóstico temprano de RA para que el médico pueda dar tratamiento y seguimiento a los niños en cuestión y no se vean afectados por la inflamación alérgica o sentirse disminuidos en su salud, desempeño en los estudios o en su calidad de vida en general.

1.3. Objetivos:

Objetivo General:estudios o en su calidad de vida en general. 1.3. Objetivos:  Determinar el nivel de

Determinar el nivel de Inmunoglobulina E total sérica en niños de edad escolar que acuden a los centros infantiles del buen vivir en la parroquia San Antonio de Pichincha.

Objetivos Específicos:del buen vivir en la parroquia San Antonio de Pichincha.  Relacionar un valor elevado de

Relacionar un valor elevado de Inmunoglobulina E total sérica con las variables sociodemográficas del lugar de estudio, parasitosis y porcentaje de eosinófilos en moco nasal en los niños que acuden a los centros infantiles del Buen Vivir en San Antonio de Pichincha.

Determinar la prevalencia de Inmunoglobulina E total sérica en cada centro infantil de la parroquia de San Antonio de Pichincha.

Determinar el porcentaje de niños con posible rinitis alérgica que presentan eosinófilos en moco nasal.

Definir la causa de los síntomas relacionados con rinitis alérgica que presentan los niños que acuden los centros infantiles del buen vivir.

Definir las posibles causas de niveles de Inmunoglobulina total sérica elevada y eosinófilos en moco nasal en niños de edad escolar con signos de rinitis alérgica.

Establecer frecuencia de niños con posible rinitis alérgica que presentan elevados niveles de Inmunoglobulina E sérica y porcentaje elevado de eosinófilos en moco nasal

Descartar la presencia de parasitosis y gripe viral en los niños que asisten a los centros infantiles del Buen Vivir en San Antonio de Pichincha.

Diferenciar la elevación de Inmunoglobulina E total sérica entre parasitosis o causas alérgicas.

Discriminar la parasitosis de las alergias con las pruebas que se realizarán, constatando cuanta parasitosis existe en la parroquia San Antonio de Pichincha y su relación con la IgE.

San Antonio de Pichincha y su relación con la IgE. Limitación del estudio  El estudio

Limitación del estudio

El estudio será limitado a realizarse solo a los niños que acuden a los centros infantiles del Buen vivir de la Parroquia de San Antonio de Pichincha.

Los niños que acudan a realizarse los exámenes que no acuden a los centros infantiles, se les realizará los exámenes, los datos obtenidos de estos exámenes no entraran en los datos para la estadística de la disertación.

El estudio estará limitado por la elevación de Inmunoglobulina E total sérica debido a causas de parasitosis.

2.4. Marco teórico conceptual Antecedentes La parroquia San Antonio de Pichincha se encuentra ubicada al

2.4. Marco teórico conceptual

2.4. Marco teórico conceptual Antecedentes La parroquia San Antonio de Pichincha se encuentra ubicada al norte

Antecedentes

La parroquia San Antonio de Pichincha se encuentra ubicada al norte de la ciudad de Quito, con una altitud de 2.439 msnm desde el punto más alto y una superficie aproximada de 116,26 Km2 con un clima cálido seco-templado y temperaturas que oscilan entre los 12º C y 18º C. (GAD San Antonio de Pichincha, 2012).

La parroquia San Antonio de Pichincha limita al norte con la Parroquia San José de Minas, al sur con la Parroquia Pomasqui y Calderón, al este con la Parroquia Puéllaro y Cantón Pedro Moncayo y al oeste con la Parroquia Calacalí. (GAD San Antonio de Pichincha,

2012).

San Antonio de Pichincha tiene una población aproximada de 32.357 habitantes, dividiéndose en 15.912 hombres y 16.445 mujeres, según el censo realizado en el año

2010. De los cuales 6.556 personas son niños de 1 a 9 años de edad, representando el 20%.

De los 6.556 niños de la parroquia, el 3% acuden a los centros infantiles del Buen Vivir del

Ministerio de Inclusión Económica y Social. (GAD San Antonio de Pichincha, 2012).

La mayor parte de la población se asienta en la parte urbana de la parroquia y el resto en el área rural siendo el área más extensa de la parroquia.

Las principales actividades a las que se dedican los habitantes de la parroquia son:

fabricación de bloque, explotación de canteras, textileras, plásticos, fundición de hierro, piedras ornamentales; siendo las actividades de explotación minera las de más alto riesgo, ya que se las realiza sin ninguna técnica de explotación o control de calidad (GAD San Antonio de Pichincha, 2012). A pesar de las actividades económicas antes mencionadas, existe un porcentaje de pobreza del 34.16% del total de la población.

Además del alto índice de pobreza, la población se encuentra en mal estado, debido a la contaminación de los recursos del suelo, agua y aire, gracias a los desechos sólidos que

producen las fábricas, debido a que no existe un control y manejo adecuado por parte de las autoridades. (GAD San Antonio de Pichincha, 2012)

La población tiene gran dificultad para acceder a los servicios básicos, ya que apenas el 52% de la parroquia San Antonio de Pichincha cuenta con red pública de agua potable y el 48% restante obtienen agua por otros medios como son: agua del pozo, río, vertiente o acequia, carro repartidor o agua de lluvia.

La obtención de agua no potable de fuentes inseguras provoca que la salud de la población se vea afectada, predisponiendo inmunológicamente a los individuos a desarrollar afectaciones alérgicas y sobre todo parasitosis. (GAD San Antonio de Pichincha, 2012) (Abbas, Lichtman, & Pillai, Inmunología celular y molecular, 2012)

El alto índice de utilización de pozos sépticos y pozos ciegos sin manejo adecuado es un significativo foco de infección y propagación de enfermedades, ya que solo el 56,52% tiene acceso al sistema de alcantarillado. El servicio de recolección de basura llega solo al centro parroquial en un 65,22%, y el 34,78% restante, trata los desechos de manera inadecuada, ya sea quemándolos o votándolos en los barrancos, generando otro foco de infección. (GAD San Antonio de Pichincha, 2012)

El subcentro de salud del Ministerio ubicado en la parroquia no dispone de suficientes medicamentos y presenta falta de personal profesional de la salud. Las enfermedades más frecuentes en la parroquia son Infecciones Respiratorias Agudas y Diarrea por parasitosis. (GAD San Antonio de Pichincha, 2012)

La rinitis alérgica es una enfermedad que va en aumento junto con otras enfermedades alérgicas en todo el mundo, tanto en países desarrollados como en países en desarrollo. Según la OMS, cientos de millones de individuos padecen de rinitis alérgica en todo el mundo. (Neffen, y otros, 2010)

En el año 2007, la Organización Mundial de la Alergia (WAO) publica el primer informe mundial de alergias y en 2011 presenta el Libro Blanco de la Alergia indicando problemas reales que afectan a los pacientes que presentan enfermedades alérgicas. (World Allergy Organization, 2011)

Un objetivo de la WAO es concientizar a todo el mundo de la afectación que sufre un paciente al tener una enfermedad alérgica y la importancia de que éstas sean tratadas por especialistas en alergología y no por especialistas en otorrinolaringología, neumología o un

dermatólogo ya que muchas personas tienen alergias manifestando reacciones en varios órganos. (World Allergy Organization, 2011).

Según el estudio ARIA (Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma), en la etapa I en la que participó Latinoamérica, los resultados obtenidos indican un incremento elevado de las enfermedades respiratorias crónicas como la rinitis alérgica, con una prevalencia entre el 5- 50% con conclusiones que el factor ambiental cumple un gran factor de riesgo. (Neffen, y otros, 2010).

En un estudio realizado en Loja en el año 2013 por la Licenciada Melisa Luzuriaga en el cual se determinó la utilidad de la prueba de IgE total por el método inmunoenzimático del kit comercial de la marca Monobind, se estudió a 70 niños entre los 5 y 12 años, obteniendo como resultados un 91,43% de niños con valores de IgE superiores a 280 UI/ml, definiendo así que esta prueba es de gran utilidad para el diagnóstico, valoración y monitoreo de rinitis alérgica. (Luzuriaga Banda, 2013).

En el año 2015 en la ciudad de Riobamba, Ecuador, la licenciada López realiza un estudio para la validación de la prueba de IgE, para definir la importancia de esta prueba en el diagnóstico alergológico en 50 niños de 2 a 14 años. El estudio se realizó con el kit comercial HUMAN TOTAL IgE ELISA obteniendo como resultado un 62% de participantes con un valor de IgE total mayor a 100 UI/ml. (López Chávez, 2015).

En la ciudad de Cumaná, Venezuela en el año 2008 se realizó un estudio con 85 pacientes con sintomatología respiratoria provenientes de la consulta de Emergencia Pediátrica del Servicio Autónomo Hospital Universitario “Antonio Patricio de Alcalá” Cumaná, determinando la concentración de IgE por el método de ELISA, en el cual se obtuvo un 55,29% de pacientes con IgE elevada, comparando con la sintomatología concluyendo la presencia de enfermedades alérgicas. (Ruíz Vera, 2008).

La cuantificación de IgE total por el método de ELISA manual se realizará en el equipo STAT FAX4700 en el laboratorio clínico del centro médico Medicentro, ubicado al norte de Quito.

2.5. Marco teórico

Inmunoglobulina E2.5. Marco teórico La inmunoglobulina E (IgE) es una molécula monomérica que pesa aproximadamente 190kDa. La

La inmunoglobulina E (IgE) es una molécula monomérica que pesa aproximadamente 190kDa. La molécula de IgE está formada por una cadena pesada y dos cadenas livianas. La IgE está formada por un dominio de cadena variable pesada y cuatro dominios de cadena constante pesada. (Male, Brostoff, Roth, & Roitt, 2014).

La IgE tiene una concentración sérica baja de 0-90 UI/ml en adultos. Se estima que la mitad de la concentración de IgE total se encuentra unida a las células que poseen receptores específicos para la mencionada molécula. (Male, Brostoff, Roth, & Roitt, 2014)

Son los mastocitos y los basófilos las células que poseen mayor cantidad de receptores específicos para IgE.

La Inmunoglobulina E total sérica media la inflamación alérgica de las reacciones de Hipersensibilidad tipo I como el asma bronquial, sinusitis, conjuntivitis y por causas no alérgicas como la parasitosis por helmintiasis. (Vennera & Picado, 2012).

Hipersensibilidadparasitosis por helmintiasis. (Vennera & Picado, 2012). La respuesta inmune inicia con la entrada de un

La respuesta inmune inicia con la entrada de un antígeno al organismo continuando con reacciones que ocurren siguientes a este suceso y finaliza con la eliminación del inmunógeno y la restitución de la homeostasis. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Cuando un antígeno ingresa al organismo, las células presentadoras de antígenos lo procesan para presentarlos en el contexto de MHC II a los linfocios T CD4+. Los LT CD4+ se activan y proliferan para poder secretar citocinas y producir moléculas de superficie las cuales activan a los Linfocitos B. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010)

Los linfocitos B producen y secretan Inmunoglobulinas para atacar y eliminar al antígeno que desencadenó la respuesta inmune. (Abbas, Lichtman, & Pillai, Inmunología Básica:

funciones y trastornos del sistema inmunitario, 2014).

Si la reacción se dio dentro de los límites normales y no ocasiona ningún tipo de daño tisular, el individuo queda inmunizado ante dicho antígeno y la siguiente vez q el antígeno

entre en el organismo la respuesta inmune será más corta, rápida y efectiva. (Cardona Villa

&

Serrano Reyes, 2010).

Si

la reacción inmune no se dio dentro de los límites normales y ocasiona daño tisular, el

individuo queda sensibilizado dando lugar a reacciones de hipersensibilidad, las cuales son

reacciones excesivas de parte del sistema inmune contra antígenos ambientales no patógenos produciendo enfermedades alérgicas. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

A partir de este suceso, el paciente se mantiene asintomático hasta que se vuelva a poner

en contacto con el antígeno que se sensibilizó, el linfocito T efector lo reconoce y se produce una respuesta inflamatoria anormal, presentando signos y síntomas propios de una alergia. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

En 1975 Coombs y Gell clasificaron las reacciones de hipersensibilidad en 4 tipos, basándose en las células y moléculas involucradas en la reacción inmunológica, el tiempo de reacción y las características clínicas que presenta el individuo al producirse la respuesta inmunológica y el patrón de inflamación. (Cuevas & Cuevas, 2012).

Tabla 1. Clasificación de Gell y Coombs de Hipersensibilidad.

HIPERSENSIBILIDAD

NOMBRE ALTERNATIVO

MEDIADORES

Tipo I

Alergia (inmediata)

 

IgE

Tipo II

Anticuerpo dependiente

IgM o IgG

Tipo III

Enfermedad del complejo inmune

IgG (Complemento)

Tipo IV

Citotóxica

/

Hipersensibilidad

Linfocitos T

retardada

2.5.6.1.

Hipersensibilidad tipo I

La hipersensibilidad de tipo I abarca un grupo complejo de enfermedades en las cuales la respuesta inmunitaria está mediada por IgE, anticuerpo que se encuentra unido a la superficie de mastocitos y basófilos por el receptor de alta afinidad FcεRI. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Existen tres fases bien diferenciadas en la reacción de la hipersensibilidad tipo I: fase de sensibilización, fase temprana y fase tardía.

2.5.6.2. Fase de sensibilización

Cuando un alérgeno ha logrado ingresar al organismo atravesando la piel, por tracto respiratorio o por tracto gastrointestinal, el antígeno es procesado por las CPA, las cuales presentan al antígeno a los Linfocitos T CD4+ vírgenes que muestran en la superficie receptores de tipo TCR con los cuales receptan a los alérgenos. (Parham, 2011).

Los linfocitos T CD4+ vírgenes están expuestos a citocinas como IL-4, IL-13 provocando que los Linfocitos T CD4+ maduren y proliferen y se diferencien en células productoras de citocinas IL-4, IL-13, IL-5, IL-10, entre otras, pertenecientes a las citocinas del grupo Th2. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Las citocinas IL-4 e IL-13 secretadas por los LT CD4+ activan a los linfocitos B para que produzcan IgE específicas. Para que esto ocurra, el antígeno se une al receptor específico BCR de los linfocitos B, el alérgeno es internalizado, procesado y presentado a los Linfocitos T CD4+ activados. Los LT CD4+ secretan las citocinas IL-4 e IL-13, éstas interactúan con la molécula de superficie CD40 del linfocito B, liberando señales para activar la célula. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Al activarse los linfocitos B maduran y se proliferan y realizan el cambio de isotipo a IgE específica para el antígeno.

Una parte de los linfocitos B que se proliferaron maduran y se diferencian en células plasmáticas productoras de IgE específica, mientras que otra parte queda en reposo como células de memoria. (Salinas Carmona, 2010).

Las inmunoglobulinas E producidas por los linfocitos B se unen a los receptores de alta afinidad ubicados en las superficies de mastocitos y basófilos. Estas células quedan sensibilizadas a la espera de un nuevo ingreso del alérgeno.

La vida media de IgE en suero es de tres días, mientras que las IgE que se encuentran unidas a los receptores de los mastocitos y basófilos pueden vivir desde semanas hasta unos meses. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

La afinidad de los receptores de alta afinidad (FcεRI) es mil veces mayor que la afinidad de los receptores de baja afinidad (FcεRII), existiendo aproximadamente 40.000 a 90.000 receptores en las superficies de los basófilos y mastocitos. (Cuevas & Cuevas, 2012).

de los basófilos y mastocitos. (Cuevas & Cuevas, 2012). Ilustración 1. Fases de la reacción alérgica

Ilustración 1. Fases de la reacción alérgica

2.5.6.3. Receptores de la IgE

Se conocen dos tipos de receptores para IgE, uno de alta afinidad (FcεRI) que se encuentran en la superficie de los mastocitos y basófilos y uno de baja afinidad (FcεRII) que se encuentran en los linfocitos B y leucocitos granulados. (Male, Brostoff, Roth, & Roitt, 2014)

El FcεRI es una glucoproteína formada por dos dominios extracelulares equivalentes a los dominios de las inmunoglobulinas, por tanto, pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas. (Salinas Carmona, 2010).

El FcεRII también se lo conoce como CD23, tiene una estructura sustancial similar a las lectinas de tipo C de los animales, por lo que no pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas. (Male, Brostoff, Roth, & Roitt, 2014).

El receptor de alta afinidad está formado por una cadena α, una cadena β y dos cadenas γ, formando así el complejo receptor αβγ 2 unidas por puentes disulfuro. Las cadenas α presentan dos dominios de inmunoglobulinas, las cuales interactúan con los dominios CH3 y CH4 de las cadenas pesadas de la IgE. Las cadenas γ tienen un motivo ITAM de activación basado en tirosinas, las cuales interactúan con cinasas de tirosinas intracelulares activando la célula. (Male, Brostoff, Roth, & Roitt, 2014).

El receptor de baja afinidad (CD23) tiene sus terminales tipo C de los polipéptidos en la zona extracelular, es decir que es una molécula transmembrana tipo 2. Existen dos tipos de receptores de baja afinidad:

- CD23a: Presentes en los linfocitos B activados por el antígeno e intervienen en la producción de IgE.

- CD23b: Expresados en gran cantidad de células estimuladas por la citocina Interleucina 4

(IL-4).

El receptor de IgE CD23, al ser lectina de tipo C por su forma, es sensible a la glucosilación y se puede unir a la IgE. El FcεRI se une a la IgE sin necesidad de glucosilarse. (Male, Brostoff, Roth, & Roitt, 2014).

Los receptores FcεRII se unen específicamente a los dominios CH3 de las IgE, lo cual proporciona un importante control de la intensidad de la reacción de la IgE en la respuesta inflamatoria. (Salinas Carmona, 2010).

Asimismo, los receptores FcεRII presentes en los Linfocitos B facilitan la captura del antígeno para presentarlos a los Linfocitos T CD4+ para la reacción en la fase tardía de la reacción. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Debido a la alta afinidad del receptor FcεRI se considera a la unión de la IgE con su receptor un enlace irreversible al ser un enlace muy estrecho en comparación con los enlaces de otros anticuerpos con su región Fc específica. (Parham, 2011).

Los receptores FcεRI de los mastocitos, basófilos y eosinófilos se expresan cuando estas células se han activado gracias a la estimulación inducida por las citocinas producidas después de un primer contacto con un antígeno. Las moléculas de IgE que no se han unido al antígeno se unirán a los receptores FcεRI. (Parham, 2011).

2.5.6.4. Fase de efectora temprana

Ya sensibilizado el individuo, al exponerse de nuevo al alérgeno al cual está sensibilizado, ocurre la interacción del antígeno con el anticuerpo IgE dando a lugar una serie de señales intracelulares en las cuales se produce la activación celular, liberación y formación de mediadores químicos iniciando la inflamación. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

2.5.6.5. Degranulación

Al interactuar la IgE con el alérgeno provocan que una mayor cantidad de FcεRI se una a los mastocitos y basófilos activando las cinasas responsables de la fosforilación de tirosinas. La fosforilación activa mensajeros mediadores del proceso de degranulación de los mastocitos y basófilos. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

El entrecruzamiento de FcεRII hace que los fosfolípidos de la membrana se metilen y la concentración de fosfatidilcolina aumente, de esta forma la fluidez de la membrana aumenta y se forman canales de calcio.

El calcio que ingresa al citoplasma promueve al ensamblaje de microtúbulos al actuar conjuntamente con la cinasa de proteína C activada y la contracción de microfilamentos, lo que provoca que los gránulos se muevan hacia la membrana. A más de esto, el calcio aumenta la actividad de la adenilato ciclasa presente en la membrana consecuentemente aumentando la concentración de AMP cíclico. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

El AMPc activa las cinasas, las cuales fosforilan a las proteínas de membrana de la célula aumentando su permeabilidad para el agua y calcio, provocando edematización de los gránulos, fusionándose con las membranas y liberando su contenido hacia al espacio extracelular. Inmediatamente después de que la concentración de AMPc aumenta, disminuye su concentración enseguida para poder dar fin a la degranulación. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

La fosfolipasa C fosforilada convierte la fosfatidil 4,5 bifosfato en diacilglicerol e Inositol trifosfato. El diacilglocerol activa la cinasa de proteína C y el inositol trifosfato que al unirse con el retículo endoplasmático promueven la liberación de calcio almacenado en la célula aumentando la concentración de calcio en el citoplasma (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Los tromboxanos, prostaglandinas y leucotrienos, mediadores proinflamatorios importantes, son metabolizados por el ácido araquidónico por la vía de la ciclooxigenasa o por la vía de la lipooxigenasa. El ácido araquidónico es obtenido mediante la ruptura de la fosfatidilcolina la cual es mediada por la fosfolipasa A2 activada por el calcio. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Paralelamente al metabolismo del ácido araquidónico, se activa la transcripción de genes para citoquinas proinflamatorias, quimiocinas y otras citocinas involucradas en la activación de basófilos, eosinófilos y mastocitos. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Otros estímulos se pueden dar para que se dé la degranulación de los mastocitos como anafilotoxinas y distintos químicos o fármacos. (Parham, 2011).

El contenido de los gránulos de los mastocitos, al ser liberado se unen a receptores epiteliales y vasculares, de esta manera se inicia el proceso inflamatorio alérgico gracias a los cambios tisulares que se dan. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010) (Parham, 2011).

Tabla 2. Productos liberatos de los mastocitos y los basófilos.

 

Mastocitos

Basófilos

Efecto biológico

 

Beta-glucuronidasa

 

No

Degradación de glucurónidos

 

Carboxipeptidasas

 

No

Degradación de proteínas

 

Captesina

Degradación de proteínas

 

Condroitin sulfato

 

Anticoagulación, estabilización de los gránulos, efecto anticomplemento

Elastasa

No

Degradación de elastina

 

Hidrolasas ácidas

 

No

Degradación lisosómica de partículas

 

Histamina

Vasodilatación, aumento de la permeabilidad, picor, contracción músculo liso, secreción de moco

Heparina

Anticoagulación, estabilización de los gránulos, efecto anticomplemento

Proteasas neutras

 

Fibrinogenólisis, activación de colagenasas

 

Triptasa

No

Activación

de

colagenasas,

degradación

de

neuropéptidos

Factores atrayentes de eosinófilos

Quimiotácticos de eosinófilos

 

Factor

activador

de

Agregación de plaquetas, vasodilatación, aumento de la permeabilidad, broncoconstricción

plaquetas

Leucotrienos

 

Quimiotácticos de diferentes células, secreción de moco, broncoconstricción, aumento de la permeabilidad vascular

Como proceso inflamatorio se presentan varias manifestaciones: vasodilatación, aumento de la permeabilidad vascular y epitelial, infiltración celular eosinofílica y linfocítica, edema, exudado plasmático. (Cuevas & Cuevas, 2012).

Otro mediador preformado involucrado en la fase efectora temprana de la hipersensibilidad es la Histamina, sustancia amina vasoactiva contenida dentro de los gránulos de mastocitos y basófilos que al ser liberados se distribuyen fácil y rápidamente por los tejidos uniéndose a receptores específicos que son el H1 y H2.

Cuando la histamina se une a su receptor específico H1 ubicado en músculo liso de endotelio o de bronquios, se producen manifestaciones clínicas como prurito nasal, obstrucción nasal, aumento de secreción nasal, broncoconstricción. Estas manifestaciones se dan debido a la triple respuesta de Lewis que involucra vasodilatación periférica, vasoconstricción central y aumento de la permeabilidad vascular produciendo edema. (Cruz Hernandez, 2011).

Además de estas acciones, la histamina induce a la quimiotaxis de eosinófilos y producción de más mediadores proinflamatorios. Los eosinófilos atraídos producen histaminasa, la cual inactiva a la histamina y suspende su producción para un control de la reacción inflamatoria. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Asimismo, la triptasa es otro mediador proinflamatorio preformado que se encuentra en los mastocitos, su función aunque incierta es la de romper los factores C3 y C3a del complemento.

incierta es la de romper los factores C3 y C3a del complemento. Ilustración 2. Activación de

Ilustración 2. Activación de mastocitos y basófilos

2.5.6.6. Fase efectora tardía

La respuesta efectora tardía se produce cuando la respuesta temprana ha finalizado, es decir de 4 a 12 horas después de la exposición al alérgeno y depende de la cantidad de alérgeno que ha ingresado al organismo (dosis) y de la sensibilización del individuo. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

En esta fase se produce el reclutamiento y la posterior infiltración de basófilos, eosinófilos

y linfocitos, las cuales como células inflamatorias activadas sintetizan mediadores

secundarios. Los mediadores secundarios tienen una capacidad de acción más lenta y tardía, pero son los que producen los síntomas en el individuo ya que inducen vasodilatación, aumento de la permeabilidad vascular y el aumento en la secreción glandular. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Tras la activación celular, la fosfolipasa A2 libera al ácido araquidónico que se encuentra esterificado formando parte de los fosfolípidos de la membrana celular.

El ácido araquidónico forma diferentes productos al metabolizarse. Por la vía de la lipooxigenasa produce leucotrienos que tienen en común la función de aumentar la permeabilidad vascular, pero también tienen funciones diferentes entre ellas. B4 es un leucotrieno que induce quimiotaxis de neutrófilos, E4 facilita la respuesta bronquial y C4 junto a D4 actúan como broncoconstrictores causando constricción alveolar. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Por la vía metabólica de la ciclooxigenasa, el ácido araquidónico produce prostaglandinas, prostaciclinas y tromboxanos. Entre las prostaglandinas producidas, D2 se encuentra dentro de los mastocitos, producen vasoconstricción en arterias coronarias y pulmonares, inhibe la agregación plaquetaria, promueve quimiotaxis de neutrófilos y ayuda a la liberación de histamina por parte de los basófilos. F2 provoca vasocontricción y es vasodilatador y broncoconstrictor al igual que A2 que es un tromboxano con la diferencia que A2 influye también en la agregación plaquetaria. (Cardona Villa & Serrano Reyes,

2010).

El

Factor Activador de Plaquetas (PAF) es otro mediador secundario muy potente ya que

es

activo a concentraciones bajas, influye en la agregación plaquetaria, incrementa la

permeabilidad vascular, contrae el músculo liso y es quimiotáctico y activador de neutrófilos y eosinófilos. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Tabla 3. Productos contenidos en el interior de los gránulos de los eosinófilos

Moléculas

Función

Hidrolasas lisosomales

Degradación de diferentes moléculas

Lisofosfolipasas

Degradación de fosfolípidos de membrana

Neurotoxinas

Actividad de ribonucleasa

Proteína básica principal

Toxicidad para células eucariotas

Proteínas catiónicas

Toxicidad para células eucariotas y procariotas

Por último las Quininas que se encuentran en el plasma, activadas por la quininogenasa ubicada en los mastocitos, incrementan la permeabilidad vascular, producen vasodilatación de arterias, produce vasoconstricción poscapilar venoso, hipotensión, contracción del músculo liso, dolor y activa la producción de metabolitos del ácido araquidónico. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

En la fase efectora tardía también intervienen los mediadores derivados del sistema nervioso los cuales regulan el sistema inmune e influyen en el desarrollo de enfermedades del sistema inmunitario.

La respuesta inmune afecta directamente a la función neuronal, la cual a su vez modifica la respuesta inmune debido a la gran cantidad de receptores compartidos de los mediadores de los dos sistemas como citocinas y neuromediadores.

Al existir una interacción entre reacción alérgica, sustancias mediadoras, desequilibrio vegetativo, receptores celulares y nucleótidos cíclicos intracelulares se produce la aparición de sintomatología. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Al presentarse estímulos inespecíficos como frio, humedad, polución, sustancias irritantes, se produce una hiperactividad de las mucosas debido al desequilibrio vegetativo a causa de la hiperactividad inespecífica.

Entre los mediadores neuronales está la acetilcolina que es un neurotransmisor parasimpático que al unirse al receptor muscarínico (nicotínico) produce vasodilatación e hipersecreción mientras que la atropina bloquea a los receptores muscarínicos.

Existen neuropéptidos y neurotransmisores que se liberan en las terminaciones nerviosas. La sustancia P se produce en las neuronas aferentes y es responsable de la activación de los linfocitos T. Produce también vasodilatación, extravasación plasmática, estimula la producción de FNT-α de los monocitos y macrófagos. (Cardona Villa & Serrano Reyes,

2010).

El Péptido Relacionado al gen de Calcitonina (CGRP) provoca el aumento de AMPc activando la adenilato ciclasa. Es vasodilatador, causante de hiperalgesia, e interviene en la cicatrización de heridas debido al estímulo que provoca induciendo la proliferación de fibroblastos. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

El Péptido Intestinal Vasoactivo (VIP) al igual que la Somatostatina es un importante inmunosupresor y antiinflamatorio ya que suprime la proliferación de linfocitos T y frena la producción de IL-2 e IFN-γ.

de linfocitos T y frena la producción de IL-2 e IFN- γ. Ilustración 3. Reacción tardía

Ilustración 3. Reacción tardía mediada por células.

2.5.6.7.

Infiltrado celular

Es característico de la hipersensibilidad inmediata que exista un importante infiltrado celular, principalmente de eosinófilos, basófilos, mastocitos y linfocitos T, en especial Linfocitos T helper 2.

Los factores quimiotácticos como Eotaxina 1 y 2, Proteína Quimiotáctica de Monocitos (MCP), Quimiocina de Regulación por Activación expresada y secretada por Linfocitos T (RANTES) y la Proteína Inflamatoria del Macrófago (MIP) son las moléculas más importantes en el infiltrado celular. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

2.5.6.8. Citocinas relacionadas con la IgE y la alergia

La IL-4 es la citocina responsable de que se produzca el cambio de isotipo de IgM a IgE en la superficie de los linfocitos B, citocina producida por los linfocitos T Helper 2 a partir de una respuesta innata. (Abbas, Lichtman, & Pillai, Inmunología celular y molecular, 2012).

Para que se produzca el cambio de isotipo de los anticuerpos es fundamental la presencia de la enzima desaminasa inducida por activación. La IL-4 induce la transcripción en línea germinal a través del locus Iε--. Esto lleva primero a la producción de transcriptos de ε en línea germinal en un linfocito B que exprese IgM, y después a la recombinación de la región de cambio Sμ con la región de cambio Sε. El ADN situado en medio se pierde y el exón VDJ queda entonces adyacente a Cε. El resultado final es la producción de IgE con la misma región V que la IgM original producida por ese linfocito B. (Male, Brostoff, Roth, & Roitt, 2014).

La IL-5 actúa como un estimulante de los leucocitos eosinófilos. Al estimular a los eosinófilos actúan en la respuesta inmune mediada por IgE ya que presentan receptores para IgE. (Quezada, Gallardo, Jadue, Loosli, & Roessler, 2009).

Ilustración 4. Mecanismos de la reacción alérgica. (Zubeldia, Baeza, Jáuregui, & Senet, 2012) 2.5.6.9. Rinitis

Ilustración 4. Mecanismos de la reacción alérgica. (Zubeldia, Baeza, Jáuregui, & Senet, 2012)

2.5.6.9. Rinitis alérgica

La rinitis alérgica es una enfermedad con una prevalencia realmente alta a nivel mundial,

especialmente en pacientes de edad escolar.

La rinitis alérgica afecta a niños de edades a partir de los 3 años en adelante y es

diagnosticada hasta los 20 años.

La prevalencia de la rinitis alérgica cada vez va en aumento y se cree que es debido a los

cambios ambientales, contaminación atmosférica, cambios en los hábitos alimenticios, tabaquismo y sedentarismo en adultos. (Zubeldia, Baeza, Jáuregui, & Senet, 2012).

La teoría de la higiene se ha presentado y se la está estudiando como causante de enfermedades alérgicas. Esta teoría dice que ahora los niños viven en ambientes muy

limpios, son bañados con mucha frecuencia, son vacunados contra numerosas enfermedades, es decir nunca están sucios. (Zubeldia, Baeza, Jáuregui, & Senet, 2012).

Esto hace que el sistema inmunitario, a muchos antígenos no patógenos los perciba como antígenos patógenos, causando respuestas inmunitarias innecesarias, provocando daño tisular, sensibilizando al individuo y produciendo enfermedades alérgicas. (Zubeldia, Baeza, Jáuregui, & Senet, 2012).

alérgicas. (Zubeldia, Baeza, Jáuregui, & Senet, 2012). Ilustración 5. Hipótesis de la higiene Tabla 4.

Ilustración 5. Hipótesis de la higiene

Tabla 4. Clasificación de la rinitis alérgica.

Clasificación de la rinitis alérgica

Intermitente

Persistente

Síntomas menos de 4 días/semana o menos de 4 semanas consecutivas

Síntomas más de 4 días/semana y más de 4 semanas consecutivas

Leve

Moderada-Grave

Sueño normal

Interfiere el sueño

Sin alteración de actividades deportivas

Con alteración de las actividades deportivas

Actividad escolar normal

Actividad escolar alterada

Sin síntomas molestos

Con síntomas molesto

2.5.6.10.

Síntomas y Calidad de vida

La rinitis alérgica al ser una enfermedad crónica afecta significativamente la calidad de vida de los individuos que la presentan ya que causa malestar físico, emocional y psíquico.

El paciente con rinitis alérgica presenta varios síntomas que dependen de la gravedad de la patología; estos síntomas generalmente son estornudos, rinorrea, prurito nasal, obstrucción nasal, prurito ocular. (Quezada, Gallardo, Jadue, Loosli, & Roessler, 2009).

Al presentar estos síntomas el paciente se torna pálido, presenta ojeras, ojos llorosos y ojeras; experimenta prurito faríngeo, de paladar y oídos; puede presentar también tos y ronquera y por la noche apnea del sueño y malestar general. (Cuevas & Cuevas, 2012).

El mal control de la rinitis alérgica en edades infantiles y adultas conduce a alteraciones en el descanso nocturno, baja capacidad de concentración como consecuencia y finalmente disminución en la producción laboral y escolar. (Zubeldia, Baeza, Jáuregui, & Senet,

2012).

Además del malestar general que siente el individuo, existen varios costos económicos para manejar las enfermedades alérgicas, los cuales van en aumento. Los costos económicos directos son los que el individuo o padre de familia individuo infantil deben invertir en asistencia médica como visitas al médico, medicamentos, exámenes, etc. (Zubeldia, Baeza, Jáuregui, & Senet, 2012).

2.5.6.11. La IgE contra agentes alérgenos causantes de rinitis alérgica

La mayor cantidad de moléculas de IgE se encuentra enlazada a los receptores FcεRI presentes en los eosinófilos, basófilos y mastocitos a la espera de unirse a un antígeno específico para IgE. Las células que se encuentran recubiertas por la molécula de IgE generalmente se localizan en el tejido conectivo bajo la superficie epitelial en todo el cuerpo humano particularmente piel, vías respiratorias y tubo digestivo con excepción del sistema nervioso y la retina. (Parham, 2011).

Cuando el epítope del antígeno se ha unido al parátopo específico del anticuerpo IgE que éste, a su vez se encuentra unido a los mastocitos, estas células liberan el contenido de sus gránulos. (Peakman & Vergani, 2011).

Los gránulos de los mastocitos contienen principalmente heparina, histamina, Factor de Necrosis tumoral, sulfato de condroitina, proteasas neutras y más enzimas degradadoras. (Male, Brostoff, Roth, & Roitt, 2014).

Entre otros efectos, las sustancias contenidas en los gránulos logran reacciones violentas en el músculo liso, provocando que el individuo tosa, estornude, vomite o presente diarrea. De esta manera el patógeno se expulsa al exterior del paciente. (Parham, 2011).

se expulsa al exterior del paciente. (Parham, 2011). Ilustración 6. Reacción mediada por IgE 2.5.6.12.

Ilustración 6. Reacción mediada por IgE

2.5.6.12. Alérgenos causantes de rinitis alérgica

Dentro de los alérgenos más comunes en el país son los ácaros de polvo de casa pertenecientes a las especies Dermatophagoides pteronyssinus y Dermatophagoides farinae. Estos alérgenos habitan constantemente en el polvo ambiental, polvo de casa y camas teniendo contacto frecuente con los humanos. (Valdivieso, Iraola, & Estupiñán,

2012)

Otro alérgeno importante es el proveniente de las mascotas. El alérgeno originario de perros y gatos son principalmente proteínas solubles llamadas lipocalinas o la albúmina presente en fluidos, secreciones y epitelio. Perros y gatos liberan una alta cantidad de alérgenos y al estar dentro de casa se forman reservorios de alérgenos en alfombras, camas, sofás, etc. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Los alérgenos de los perros más conocidos y estudiados son Can f 1 y Can f 2, siendo lipocalinas altamente alérgenos; en el caso de los gatos, sus alérgenos son Fel d 1.

El polen también representa otro alérgeno para el humano pero en menor frecuencia, ya que tienen un tamaño de entre 10-60 micras, lo cual imposibilita el ingreso del polen a las vías respiratorias inferiores. Sin embargo, el condicionante ambiental logra que los alérgenos del polen se liberen como proteína libre y causen inflamación alérgica en las vías respiratorias superiores. (Valdivieso, Iraola, & Estupiñán, 2012) (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Los hongos también son un importante y conocido factor alergénico, ya que al estar en no solo lugares abiertos sino también en lugares cerrados y su alta capacidad para desplazarse fácilmente por el ambiente, pueden causar rinitis alérgica. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

La sensibilización que presentan los niños ante los ácaros es de un 79,1%, mientras que la sensibilización ante el pelo de perros y gatos representa un 32% y por último, la sensibilización que presentan los niños ante el polen es del 7%. (Valdivieso, Iraola, & Estupiñán, 2012).

Hay que tener en cuenta que las proteínas causantes de alergias pueden tener diferentes actividades biológicas como actividad enzimática, transporte, motilidad, integrantes de citoesqueleto, etc. (Cardona Villa & Serrano Reyes, 2010).

Tabla 5. Alérgenos inhalados.

Alérgenos inhalados (transportados por aire)

Del exterior:

 

Árboles

Pólenes

Malezas

Hierbas

Mohos

Alternaria

Cladosporium

Del interior:

Ácaros

Domésticos

De almacenamiento

 

Alternaria

Hongos

Cladosporium

Mascotas

Gatos

Perros

Insectos

Cucarachas

Polillas

Tabla 6. Factores de riesgo para la aparición de las enfermedades alérgicas.

Factores de riesgo para la aparición de las enfermedades alérgicas

Factores predisponentes

Atopía

Herencia

Sexo

Raza

Factores contribuyentes

Infecciones respiratorias

Uso de antibióticos

Número de hermanos

Orden de nacimiento

Asistencia a guarderías

Bajo peso al nacer

Polución ambiental

Factores potenciales de prevención primaria

Alérgenos del interior

o

Ácaros domésticos

o

Mascotas

o

Alérgenos de cucarachas

o

Hongos

Alérgenos del exterior

o

Pólenes y hongos

Exposición prenatal y posnatal al humo de cigarrillo

Falta de lactancia materna

Introducción precoz de leche de vaca

Dieta-obesidad

(Paris Mancilla, Sánchez, Beltramino, & Copto García, 2013)

2.5.6.13. Diagnóstico alergológico

Para determinar si el paciente presenta una enfermedad alérgica es importante valorar los síntomas que expone el paciente, definir el agente alérgeno que lo afecta y la realización de pruebas de laboratorio útiles y oportunas que ayuden al diagnóstico certero del paciente.

Dentro de las pruebas de laboratorio clínico que se pueden realizar para la determinación de rinitis alérgica están:

Pruebas cutáneas: consiste en una punción intradérmica o por contacto con un extracto del posible alérgeno. Si la prueba es positiva se podrá observar un eritema, pápula o induración, en la cual se producirá liberación de mediadores contra el antígeno. El tamaño del eritema indicará la intensidad de la sensibilización contra dicho antígeno. (Cruz Hernandez, 2011)

Pruebas de provocación: se fundamenta en la provocación de la reacción alérgica contra un alérgeno específico en el paciente. El paciente puede presentar varias molestias y solo se lo debe realizar en casos de que no se haya podido diagnosticar correctamente al paciente. En la prueba respiratoria, nasal o bronquial, el paciente inhala neumoalérgenos y se valorará la respuesta clínica y funcional.

Pruebas in vitro: Dentro de las diferentes pruebas in vitro que se pueden realizar al paciente está la determinación de eosinófilos en sangre periférica, con una cifra mayor de 500/mm 3 se puede sospechar que el paciente presenta una alergia, no obstante, el valor de los eosinófilos en sangre periférica puede elevarse en casos de parasitosis.

Determinación de IgE total: es una prueba realizada comúnmente en pacientes con posible diagnóstico de alergia. La IgE total se va elevando conforme el paciente tiene mayor edad y se toma como patológico cuando el valor de IgE total es mayor a dos desviaciones estándar de su valor normal según su edad.

Determinación de IgE específica: se basa en la determinación de IgE sérica contra un alérgeno en específico, definiendo así cual es el alérgeno que afecta al paciente.

Otras pruebas de laboratorio son la cuantificación de mediadores químicos producidos por los basófilos o neutrófilos como leucorienos, triptasa o histamina.

Ilustración 7. Esquema Diagnóstico Tratamiento. 2.6. Marco Conceptual:  Ácaros: microorganismos artrópodos que

Ilustración 7. Esquema Diagnóstico Tratamiento.

2.6. Marco Conceptual:

Ácaros: microorganismos artrópodos que miden de 0,2y 0,8mm.

Afinidad: Fuerza de unión entre un solo lugar de unión de una molécula y un receptor.

Anosmia: Pérdida del sentido del olfato.

Anticuerpo: molécula glucoprotéica producida por los linfocitos B, que se unen a los antígenos específicos.

Antígeno: molécula de naturaleza proteica, ácido nucleico, hidrato-carbónica, lipídica que se une a un anticuerpo o al TCR.

Atopia: Reacción anormal de hipersensiblidad inmediata frente a diversos alérgenos, probablemente con predisposición hereditaria o con antecedentes familiares alérgicos, y cuyas manifestaciones clínicas más frecuente son: rinitis alérgica, asma bronquial y dermatitis atópica.

Biotina: vitamina estable al calor, soluble en agua y alcohol, y susceptible a la oxidación que interviene en el metabolismo de los hidratos de carbono, grasas, aminoácidos y purinas. Esencial para la síntesis y degradación de grasas y la degradación de ciertos aminoácidos.

Citocinas: Proteínas que median la inflamación y reacciones inmunitarias.

Colinérgico: molécula o receptor activado por la acetilcolina.

Comorbilidad: presencia de dos o más enfermedades de origen y patología distintas que pueden interferir entre sí en el diagnóstico, pronóstico y respuesta al tratamiento en un mismo individuo.

Epítope: fracción específica de una antígena macromolécula que se une al anticuerpo.

Estreptavidina: proteína tetramérica sinteitzada por la bacteria Streptomyces avidinii que tiene gran afinidad para la Biotina. Utilizado en técnicas de biología molecular.

Exacerbarse: agrandamiento, agravarse.

Helmintos: grupo de gusanos parásitos del hombre.

Hipertonía: aumento anormal del tono muscular

Inmunoglobulina: anticuerpo de naturaleza glucoproteica, producidas por las células plasmáticas.

Interleucina: nombre de las citocinas, nombradas Interleucina acompañadas de un número de acuerdo al orden de descubrimiento.

Parásito: organismo que vive sobre otro o dentro de él y a sus expensas.

Parasitosis: enfermedad o infección parasitaria.

Parátopo: zona del anticuerpo cuya función es reconocer el antígeno.

Perenne: que dura muchos años o de forma indefinida.

Polen: Polvo fino y fecundante contenido en la antera de los estambres de las flores.

Protrusión: desplazamiento de un órgano, de una parte o de un tumor que sobresalen de sus límites normales, por lo general como consecuencia de un aumento de volumen o del impulso causado por una lesión situada en un plano posterior. (Real Academia Nacional de Medicina, 2012)

Recidivante: aplicado a una enfermedad o a sus manifestaciones: que aparecen de nuevo tras un intervalo de mejoría.

Rinitis: inflamación de la nariz. Inflamación de la mucosa nasal que se presenta con rinorrea, picor nasal, estornudos, congestión nasal.

Rinorrea: flujo o emisión abundante de líquido de la nariz, debido a un aumento de la secreción de la mucosidad nasal

Quimioatrayentes: sustancias que inducen a la quimiotaxis en otras células

Leucotrienos: sustancias producto del metabolismo del ácido araquidónico, actúa como constrictor del músculo liso.

Prostaglandinas: sustancias derivadas de los ácidos grasos mediadores de respuestas en el organismo como la inflamación

Hiperalgesia: aumento anormal de la sensibilidad al dolor.

3.1. Marco metodológico

de la sensibilidad al dolor. 3.1. Marco metodológico Materiales y métodos 3.1.1.1. Tipo de estudio Este

Materiales y métodos

3.1.1.1. Tipo de estudio

metodológico Materiales y métodos 3.1.1.1. Tipo de estudio Este estudio es descriptivo transversal. Es descriptivo ya

Este estudio es descriptivo transversal. Es descriptivo ya que se encauza exclusivamente en la descripción de la prevalencia del nivel de Inmunoglobulina E total sérica en la población definida que son los niños que asisten a los centros infantiles del buen vivir de la parroquia

San Antonio de Pichincha y a la escuela fiscal “La Libertad”, mediante el método manual de ELISA, tomando una sola muestra en un punto específico del tiempo, diciembre del

2015.

3.1.1.2.

Tipo de muestreo

El muestreo se perpetró de acuerdo al cumplimiento de los criterios de inclusión, ya que se realizó la prueba a todos los niños que cumplan a cabalidad los criterios de inclusión ya definidos.

3.1.1.3. Tamaño de la muestra

En el estudio realizado se incluyó a los cinco centros infantiles del buen vivir de la parroquia San Antonio de Pichincha y la escuela fiscal “La Libertad” de Tanlahua de la misma parroquia.

Número de participantes de Centros Infantiles del Buen Vivir participantes y su ubicación en la parroquia de San Antonio de Pichincha.

Tabla 7. Centros Infantiles del Buen Vivir.

Centro Infantil

Sector

Total estudiantes

“Capullitos de luz”

Tanlahua

17

“Semillitas”

Alcantarillas

44

“Caritas sonrientes”

Rumicucho

42

“José María García”

José María Lequerica

54

“Santo Domingo”

Santo Domingo

88

Escuela fiscal “La Libertad”

Tanlahua

68

De acuerdo al cuadro anterior, se realizó un cálculo de muestreo aleatorio estratificado con afijación proporcional para obtener un número de muestra de acuerdo a la cantidad de niños que acuden a cada centro infantil del buen vivir de la parroquia San Antonio de Pichincha.

Tabla 8.Cálculo Número de Muestra.

MUESTREO ALEATORIO ESTRATIFICADO CON AFIJACIÓN PROPORCIONAL

Tamaño de la población objetivo…………………………

…………

313

Tamaño de la muestra que se desea obtener………………………………………

200

Número de estratos a considerar……………………

……

6

Afijación simple: elegir de cada estrato

 

33,33

Sujetos

 

MUESTRA

ESTRATO

IDENTIFICACIÓN

Nº SUJETOS EN EL ESTRATO

PROPORCIÓN

DEL

 

ESTRATO

1 Capullitos de luz

17

5,6%

11

2 Semillitas

44

12,9%

26

3 Caritas Sonrientes

42

13,9%

28

4 José María García

54

16,5%

33

5 Santo Domingo

88

29,0%

58

6 Escuela fiscal “La Libertad”

68

22,1%

44

Correcto

100,0%

200

3.1.1.4.

Decisión

Se tomaron 200 muestras de los cinco centros infantiles del buen vivir y de la escuela fiscal “La Libertad” distribuidos de la siguiente manera:

Centro infantil del buen vivir “Capullitos de Luz”: 11 niños.

Centro infantil del buen vivir “Semillitas”: 26 niños.

Centro infantil del buen vivir “Caritas Sonrientes”: 28 niños.

Centro infantil del buen vivir “José María García”: 33 niños.

Centro infantil del buen vivir “Santo Domingo”: 58 niños.

Escuela fiscal “La Libertad”: 44 niños

3.1.1.5. Criterios de inclusión

Se incluyó en el estudio a todos los niños que asistieron a los centros infantiles del Buen Vivir de la Parroquia de San Antonio de Pichincha y a la escuela fiscal “La Libertad”.

Fueron participes del estudio todos los niños que presentaron el consentimiento informado firmado por sus padres o representante legal.

3.1.1.6. Criterios de exclusión

Se excluyó a los niños cuyos padres no firmaron el consentimiento informado o no aprobaron ni autorizaron la toma de muestra.

Se excluyó en el estudio a los niños que se ausentaron al centro infantil el día de la toma de muestras ya que se definió un día específico, sin opción a repetición para cada centro infantil.

3.2. Operacionalización de Variables

3.2.1.

Variable dependiente

Inmunoglobulina E

3.2.2.

Variable independiente

Género

Centros infantiles

Ubicación

Parasitosis

Gripe

OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES

Variable

 

Definición

     

Tipo de

Metodología

Definición Conceptual

Dimensión

Indicador

Escala

Técnica o

Dependiente

Operacional

variable

Instrumento

 

Molécula monomérica presente en los humanos en concentraciones bajas

Inmunoglobulina

Nivel de IgE total sérica

Media

UI/ml

Cuantitativa

InmunoElisa

Niveles de Inmunoglobulina E total

mediadora de

Manual

procesos

 
 

inflamatorios

 

alérgicos

Variable

Definición Conceptual

Definición

Dimensión

Indicador

Escala

Tipo de

Metodología

Operacional

variable

Técnica o

Independiente

Instrumento

 

Enfermedad o infección parasitaria.

Niños con infección parasitaria

Quistes o trofozoitos de protozoarios

Parásitos

Nominal

Cualitativa

Observación

Parasitosis

observados

microscópica

   

Huevos de helmintos

por muestra

 

Influenza, enfermedad infecciosa aguda, epidémica o pandémica causada por un virus filtrable del que existen tres tipos

Niños con presentación de síntomas relacionados a la gripe viral

Influenza A

Observación

Nominal

Cualitativa

Observación

Influenza B

de síntomas

directa del

Gripe

como fiebre,

individuo

Influenza C

catarro

respiratorio.

Género

Caracteres fenotípicos que diferencian entre sexo femenino y masculino

Femenino

Mujer

% Mujeres

Nominal

Cualitativa

Encuesta

Masculino

Hombre

% Hombres

Centros Infantiles del Buen Vivir

Establecimientos educativos instaurados por el MIES en la parroquia de San Antonio de Pichincha

Centros infantiles que perteneces al GAD de la parroquia de San Antonio de Pichincha

Niños y niñas población total estudiada

 

Nominal

Cualitativa

Encuesta

Ubicación

Ubicación geográfica de los establecimientos

Sector en el que se encuentran ubicados los Centros Infantiles del Buen Vivir

Área rural de la parroquia de San Antonio de Pichincha

 

Nominal

Cualitativa

Encuesta

3.3. Materiales y proceso

3.3.1.

Materiales

Lector de ELISA semiautomático STAT FAX 4700.

Tubos de ensayo tapa roja

Jeringuillas de 3ml

Agujas hipodérmicas marca NIPRO 23Gx1”

Torniquete.

Torundas.

Cooler.

Guantes.

Guardián

Fundas de basura negra y roja

Curitas

Tubera

Pipetas automáticas

Puntas para pipetas

Alcohol

Muestras de heces

3.3.2.

Reactivos

Kit IgE Monobin Inc.

o

Calibradores con concentraciones conocidas de IgE

o

Biotina

o

Enzima

o

Sustrato A

o

Sustrato B

o Solución STOP

Lugol

Solución salina

3.3.3. Procedimiento

3.3.3.1. Fase Uno

En la primera fase se contactó con la dirección del Gobierno Autónomo Descentralizado (GAD) de la parroquia San Antonio de Pichincha, proponiendo, planteando y exponiendo el proyecto que se realizaría en los centros infantiles del buen vivir del MIES.

3.3.3.2. Fase Dos

En la segunda fase se elaboró el consentimiento informado y posteriormente fue aprobado (Anexo 1). Se adquirió los materiales para la toma de muestras. Se obtuvo la autorización por parte del GAD y se programó las fechas de visitas para la toma de muestras en los respectivos centros infantiles del MIES.

3.3.3.3. Fase Tres

En esta fase se recibió los consentimientos informados firmados por el padre, madre o representante legal del niño o niña previa toma de muestras sanguíneas (flebotomía), con su respectiva rotulación. Todo el proceso se realizó, bajo las respectivas normas de bioseguridad, la conservación y el transporte de las muestras hacia el sitio de procesamiento en el laboratorio clínico del centro médico Medicentro.

Descripción:

Para llevar a cabo la toma de muestra a los niños, primero se recibió el consentimiento informado firmado por un padre o representante legal en el cual el padre está o no de acuerdo y acepta o no que a su hijo se lo realice una venopunción en la parte anterior del codo y en caso de presentarse algún tipo de complicación, se realizaría una nueva venopunción en el otro brazo o en el dorso de la mano.

Se tomó la muestra de acuerdo al orden de los consentimientos informados recibidos.

La toma de muestras a los niños de los centros infantiles del buen vivir fue por el método

de venopunción en la parte anterior del codo con una jeringuilla de 3ml de capacidad y una

aguja de 23Gx1”.

La cantidad de muestra se distribuyó de la siguiente manera: 1ml en tubos minicollect de tapa lila con EDTA como anticoagulante y 2ml en tubos pequeños de vidrio sin ningún aditivo para la obtención del suero.

A los niños que por alguna complicación no se pudo obtener la muestra por venopunción

en la parte anterior del codo, se realizó una venopunción en el dorso de la mano distribuyendo la muestra de la misma manera.

2.6.6.14. Fase Cuatro

Se realizó las curvas de calibración de la prueba de IgE por InmunoElisa manual con los estándares del laboratorio.

Se procesó las muestras de acuerdo al protocolo estandarizado de la casa comercial del kit para cuantificación de IgE.

Para la cuantificación de la Inmunoglobulina E total se utilizó el reactivo para microelisa manual de la marca Monobind Inc y para la lectura de las microplacas se utilizó el lector Stat Fax 4700 del laboratorio clínico del centro médico Medicentro.

Para este método primero se adicionó el calibrador IgE, el control y la muestra del paciente al pozo revestido con estreptavidina. El anticuerpo monoclonal marcado con biotina específico para IgE se adicionó y se mezcló los reactivos. La reacción entre los anticuerpos

IgE y los IgE nativos formaron un complejo que se une con la estreptavidina cubierta del pozo. El exceso de proteínas de suero fue removido por medio del enjuague. A los pozos se les adicionó también otro anticuerpo específico monoclonal para IgE. El Ac. marcado con enzima se unió a la inmunoglobulina E ya inmovilizada en el pozo a través de su unión con el anticuerpo monoclonal marcado con biotina. El exceso de enzima fue lavado. Se generó color mediante la adición de un sustrato. La intensidad generada de color es directamente proporcional a la concentración de IgE en la muestra.

Procedimiento de la prueba:

1. Formatear los pozos de la microplaca para cada calibrador, muestras de control y de paciente para que sean ensayadas en duplicado

2. Pipetear 25μl del suero de referencia apropiado, control o espécimen dentro del pozo asignado

3. Adicionar 100μl de Reactivo de IgE Biotina a cada pozo.

4. Revolver la microplaca ligeramente por 20-30 segundos para mezclar y cubrir

5. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente

6. Descartar el contenido de la microplaca por decantación o aspiración.

7. Adicionar 300μl de buffer de lavado, decantar con golpe o aspirar. Repetir 2 veces adicionales para un total de 3 lavados.

8. Adicionar 100μl de Reactivo de Enzima IgE a todos los pozos. No revolver la placa

9. Cubrir e incubar a temperatura ambiente por 30 minutos.

10. Desechar el contenido de la microplaca por medio de decantación o aspiración.

11. Adicionar 300μl de buffer de lavado, decantar con golpe o aspirar. Repetir 2 veces adicionales para un total de 3 lavados.

12. Adicionar 100μl de solución de sustrato Activo en cada pozo. No revolver la placa

13. Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos.

14. Adicionar 50μl de solución STOP para cada pozo y mezclar ligeramente por 15-20 segundos.

15. Leer la absorbancia en cada pozo a 450nm en un lector de microplacas. (Monobind Inc, 2012)

Tabla 9. Definición de la prueba de IgE en el equipo STAT FAX 4700.

Definición de la prueba en el equipo STAT FAX 4700

Parámetro

Valor

Modo

Punto a punto

Filtro primario

450

Filtro diferencial

630

Unidades

IU/ml

Número de estándares

6

Concentración estándar 1

0,00

Concentración estándar 2

5,00

Concentración estándar 3

25,00

Concentración estándar 4

50,00

Concentración estándar 5

150,00

Concentración estándar 6

400,00

3.3.3.4. Fase Cinco

En la última fase se realizó el análisis de los resultados obtenidos mediante gráficas comparativas con el apoyo del programa estadístico SPSS y se realizó las conclusiones y recomendaciones.

4.1. Resultados

4.1. Resultados En el presente estudio en el que se busca determinar la prevalencia de IgE

En el presente estudio en el que se busca determinar la prevalencia de IgE en niños que acuden a los centros Infantiles del Buen Vivir, se asumía un total de 313 posibles participantes, de los cuales se esperaba obtener 200 muestras. Fueron partícipes del estudio para la determinación de Inmunoglobulina E total sérica 221 niños; mientras que 81 niños no presentaron el consentimiento informado; 7 niños no asistieron al centro infantil el día asignado para la toma de muestras; 2 niños presentaron denegado el consentimiento informado por sus representantes; 2 muestras de dos participantes fueron insuficientes.

Respecto al centro infantil donde están adscritos los participantes se logró determinar que en Capullitos de Luz se encuentran el 5%; Caritas Sonrientes el 15,8%; en José María García el 19,9%; la Libertad agrupa al 15,8%, en Santo Domingo se encuentran el 28,1% y en Semillitas el 15,4% del total de la muestra.

Tabla 10. Distribución según el Centro Infantil.

 

Centros Infantiles

Frecuencia

Porcentaje

 

Capullitos de luz

11

5,0

Caritas Sonrientes

35

15,8

José María García

44

19,9

Válido

La Libertad

35

15,8

Santo Domingo

62

28,1

Semillitas

34

15,4

Total

221

100,0

Gráfico 1. Distribución según Centro Infantil. Las edades que presentaron los niños, niñas y jóvenes

Gráfico 1. Distribución según Centro Infantil.

Las edades que presentaron los niños, niñas y jóvenes participantes se clasificaron según los grupos etarios, quedando la distribución con Lactante Mayor el 18,6%; Pre-escolar el 64,3%; Escolares agruparon el 14,9% y un pequeño grupo del 2,3% no presentaron este dato

Tabla 11. Distribución según Grupos Etarios.

 

Grupos Etarios

Frecuencia

Porcentaje

Válido

Lactante mayor

41

18,6

Pre-escolar

142

64,3

Escolar

33

14,9

Sin Datos

5

2,3

Total

221

100,0

Gráfico 2. Gráfico Grupos Etarios. La participación por género de cada centro infantil individualmente arroja

Gráfico 2. Gráfico Grupos Etarios.

La participación por género de cada centro infantil individualmente arroja los siguientes resultados:

Tabla 12. Distribución según género y Centro Infantil.

Centro Infantil

Masculino (%)

Femeninos (%)

Total (%)

Capullitos de Luz

2,56

2,88

5,44

Caritas Sonrientes

7,67

5,75

13,42

José María García

10,22

7,03

17,25

La Libertad

10,54

11,18

12,72

Santo Domingo

14,70

13,42

28,12

Semillitas

7,67

6,39

14,06

Total

46,6%

53,4%

100

Gráfico 3. Centros Infantiles y Género. La determinación de IgE se realizó a todos los

Gráfico 3. Centros Infantiles y Género.

La determinación de IgE se realizó a todos los participantes con el hallazgo de un 43% dentro de niveles normales y el 57% con valores elevados

Tabla 13. Distribución según resultados de IgE.

Valores de IgE

Frecuencia

Porcentaje

Válido

Normal

95

43,0

Elevado

126

57,0

Total

221

100,0

Gráfico 4. Resultados de IgE. A través del examen coprológico se pudo determinar la presencia

Gráfico 4. Resultados de IgE.

A través del examen coprológico se pudo determinar la presencia de parasitosis intestinal en los participantes, examen que no pudo realizarse en el 43,9% de los casos, sin embargo, entre los resultados obtenidos se evidenció un 28,5% de parasitosis intestinal mientras que no lo presentaron el 27,6% de los participantes

Tabla 14. Distribución según presencia de Parasitosis Intestinal.

Parasitosis Intestinal

Frecuencia

Porcentaje

Válido

Ausente

61

27,6

Presente

63

28,5

No Realizado

97

43,9

Total

221

100,0

Gráfico 5. Parasitosis Intestinal. Los valores obtenidos en cuanto a Leucocitos permitieron obtener que el

Gráfico 5. Parasitosis Intestinal.

Los valores obtenidos en cuanto a Leucocitos permitieron obtener que el 81,4% presenta resultados dentro de lo normal según los valores de referencia, un 9% con niveles por debajo de lo normal, el 7,2% se encuentran con niveles altos y un pequeño grupo de 2,3% no se les realizó este examen.

Tabla 15. Distribución según resultados de Leucocitos.

Leucocitos

Frecuencia

Porcentaje

Válido

Normal

180

81,4

Bajo

20

9,0

Alto

16

7,2

N/R

5

2,3

Total

221

100,0

Gráfico 6. Niveles de Leucocitos. Los resultados de los Segmentados refieren que 71,5% presenta valores

Gráfico 6. Niveles de Leucocitos.

Los resultados de los Segmentados refieren que 71,5% presenta valores dentro de lo normal según la referencia, un 26,2% con niveles por debajo de lo normal, no hubo registro de valores por encima de lo normal y un pequeño grupo de 2,3% no se les realizó este examen.

Tabla 16. Distribución según resultados de Segmentados.

Segmentados

Frecuencia

Porcentaje

Válido

Normal

158

71,5

Bajo

58

26,2

N/R

5

2,3

Total

221

100,0

Gráfico 7. Resultados de Segmentados. Los valores obtenidos en cuanto a Linfocitos permitieron obtener que

Gráfico 7. Resultados de Segmentados.

Los valores obtenidos en cuanto a Linfocitos permitieron obtener que el 47,5% presenta resultados dentro de lo normal, un 0,9% con niveles por debajo de lo normal, el 49,3% se encuentran con niveles altos y un pequeño grupo de 2,3% no se les realizó este examen.

Tabla 17. Distribución según valores de Linfocitos.

Linfocitos

Frecuencia

Porcentaje

Válido

Normal

105

47,5

Bajo

2

,9

Alto

109

49,3

N/R

5

2,3

Total

221

100,0

Gráfico 8. Resultados de Linfocitos. Los resultados de la biometría respecto a los Eosinófilos revelan

Gráfico 8. Resultados de Linfocitos.

Los resultados de la biometría respecto a los Eosinófilos revelan que el 63,3% presenta valores dentro de lo normal según la referencia, un 18,1% con niveles por debajo de lo normal, el 16,3% se encuentran con niveles altos y un pequeño grupo de 2,3% no se les realizó este examen.

Tabla 18. Distribución según resultados de Eosinófilos.

Eosinófilos

Frecuencia

Porcentaje

Válido

Normal

140

63,3

Bajo

40

18,1

Alto

36

16,3

N/R

5

2,3

Total

221

100,0

Gráfico 9. Resultados de Eosinófilos. Respecto a la medición de Eosinófilos en el moco nasal,

Gráfico 9. Resultados de Eosinófilos.

Respecto a la medición de Eosinófilos en el moco nasal, los resultados refieren que el 21,3% los presenta dentro de lo normal según los valores de referencia, el 38,9% con niveles por debajo de lo normal, un 34,8% se encuentran con niveles altos y un pequeño grupo de 5% no se les realizó este examen.

Tabla 19. Distribución según valores de Eosinófilos en Moco Nasal.

Eosinófilos en Fosas Nasales

Frecuencia

Porcentaje

Válido

Normal

47

21,3

Bajo

86

38,9

Alto

77

34,8

No realizado

11

5,0

Total

221

100,0

Gráfico 10. Resultados de Eosinófilos en Moco Nasal. 4.2. Relación entre IgE y otros factores

Gráfico 10. Resultados de Eosinófilos en Moco Nasal.

4.2. Relación entre IgE y otros factores evaluados

Se realizaron comparaciones de los resultados obtenidos en el principal examen planteado en esta investigación, la determinación de IgE, con los otros valores obtenidos, evidenciando cómo se comportan las relaciones entre los mismos.

Respecto a los Centros Infantiles, se demostró que el Centro Santo Domingo presentó los niveles más elevados de IgE con un 19,5%, seguido del José María García con un 13,6%, luego Semillitas y Caritas Sonrientes con resultados similares de 7,7% y 7,2% respectivamente y por último, los niveles más bajos se presentaron en los participantes adscritos al Capullitos de Luz

Tabla 20. Tabla cruzada IgE*Escuela.

 

Tabla cruzada IgE*Escuela

 
   

Escuela

   
 

Caritas

José

La

Santo

 

Total

Capullito s de luz

Sonriente

María

Liberta

Doming

Semillita

s

García

d

o

s

   

Recuent

             

o

5

19

14

21

19

17

95

Normal

%

del

             

total

2,3%

8,6%

6,3%

9,5%

8,6%

7,7%

43,0%

IgE

 

Recuent

             

o

6

16

30

14

43

17

126

Elevado

%

del

             

total

2,7%

7,2%

13,6%

6,3%

19,5%

7,7%

57,0%

 

Recuent

             

o

11

35

44

35

62

34

221

Total

%

del

             

total

5,0%

15,8%

19,9%

15,8%

28,1%

15,4%

100,0%

El valor del estadístico Chi-cuadrado fue de 0,026, siendo < de p= 0,05 se establece una

relación estadísticamente significativa

Gráfico 11. Relación entre valores de IgE y Centros Infantiles. La relación entre valores de

Gráfico 11. Relación entre valores de IgE y Centros Infantiles.

La relación entre valores de IgE y grupo etario pudo evidenciar que los participantes en edad pre-escolar fueron los que presentaron los niveles más altos de IgE con 41,6%, seguidos de los lactantes mayores con un 9,5%, luego la edad escolar con el 5,4%.

Tabla 21. Tabla cruzada IgE*Grupo etario.

 

Tabla cruzada IgE*Grupo etario

 
   

Grupo etario

   

Lactante mayor

Pre-escolar

Escolar