Biotecnología

Debate y consenso científico

Clara De Vega Códigos: 26.761.462

Tatiana Milena Sánchez Códigos: 33308118
Denise Isabel Verona Tamayo Códigos: 1066750607

Curso:
3005689_2

Tutor:
Fedra Lorena Ortiz

Universidad Abierta y a Distancia (UNAD)

Escuela de ciencias Básicas, Tecnología e Ingeniería
 Introducción

Este trabajo se realiza con el fin de dar a conocer la importancia del

estudio de las enzimas aplicando el modelo argumentativo de Toulmin y
de manera grupal refutar las ponencias presentadas para las tres
hipótesis y mediante el respaldo argumentativo escoger finalmente la
hipótesis que mejor se ajusta y explica el problema, que en este caso se
argumenta la hipótesis 2 como la solución al problema

Una enzima es una proteína que cataliza las reacciones bioquímicas del
metabolismo. Las enzimas actúan sobre las moléculas conocidas como
sustratos y permiten el desarrollo de los diversos procesos celulares.
(Las variaciones en la actividad enzimática se deben a las diferencias en
el pH final del medio de cultivo), siendo algunos de sus argumentos más
fuertes, que cada enzima tiene un pH en el que su actividad es máxima,
este valor corresponde al pH optimo el cual es una consecuencia de la
intervención de los pK de los grupos que en el sitio activo ayudan a fijar
el sustrato, y los pK de las cadenas laterales que contribuyen a
estandarizar la conformación global de la enzima y respaldaba su
garantía con que la mayoría de las enzimas tienen un pH optimo cercano
a la neutralidad, pero que no necesariamente coincide con el pH
intracelular esto sugiere que algunas enzimas no actúan al máximo de
su capacidad
Para explicar la resolución del problema planteado, presentamos la hipótesis
que mejor explica los resultados del experimento, en este caso hemos
escogido la hipótesis 2.

HIPOTESIS 2: Las diferencias en la actividad enzimática se deben a la

presencia de inhibidores en el medio de cultivo 1.

• Argumentos a favor:

Los inhibidores buscan fijar al centro de la enzima libre en este caso se trata
de inhibición competitiva y cuando el inhibidor no impide la fijación del
substrato a la enzima, pero si impide la acción catalítica a esto se le conoce
como inhibición no competitiva. Por otro lado, las enzimas digestivas como la
α-amilasa constituyen una familia de endo-amilasas, que catalizan la hidrólisis
de almidón. Los inhibidores de α-amilasas se encuentran en semillas de
leguminosas y gramíneas (Richardson 1991) y se han purificado de semillas de
trigo, fríjol, maíz y Amaranthus sp.

Los inhibidores de α-amilasas son glicoproteínas de bajo peso molecular que se

acumulan en vacuolas especializadas en la fase media de desarrollo de la
semilla. En Phaseolus vulgaris L. var. Radical se ha registrado un inhibidor de
α-amilasas de la broca del café Hypothenemus hampei, con más de 80% de
inhibición, el cual también inhibe las α-amilasas de mamíferos. Es necesaria la
búsqueda de nuevos inhibidores de α-amilasas en otras especies vegetales que
tengan un efecto similar al de fríjol y con especificidad a la α-amilasa.

Algunos inhibidores de α-amilasas inhiben la actividad tanto en insectos como

en mamíferos, otros inhiben solamente la α-amilasa de insectos como los
aislados de trigo, maíz y Amaranthus spp., entre otros (Franco et al. 2002;
Gatehouse 1999). También hay especificidad en el género del insecto, ya que
la formación del complejo inhibidor más amilasa tiene un pH óptimo de 5.5 y
por esta razón inhibe amilasas en el medio ácido del intestino de insectos del
orden Coleóptera pero no en el alcalino del orden Lepidóptera (Chrispeels
1997).

• Argumentos en contra:

Unas de las debilidades encontradas en la ponencia científica de mi compañera

No relaciona los datos del experimento con la hipótesis planteada.

Teniendo en cuenta las siguientes tablas de datos y el resultado de la

experimentación y revisando el artículo científico propuesto Inhibidores de α -
amilasas de la broca del café.
Y revisando la tesis de grado de Espitia Rocha L.C
(2006).http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis206.pdf
teniendo en cuenta, que generalmente la acción de alfa y beta amilasas sobre
al almidón natural de los granos no es muy efectiva porque estos presentan
una resistencia a la digestión amilolítica (Sarikaya et al. 2000). Es preciso
reconocer que nos encontramos frente a inhibidores enzimáticos lo cual hace
necesario precisar frente a qué tipo específico de inhibidor nos encontramos
dependiendo de la forma en que actúan por ello es preciso explicar la
hipótesis a partir de Inhibidores Reversibles no Competitivos, porque los
problemas de inhibición no se pueden superar con concentraciones altas de
sustratos para dejar por fuera de competencia al inhibidor que se encuentra en
la harina de fríjol (Phaseolus vulgaris L.).

Por ello al establecer la garantía tendríamos que respaldarla desde el punto de

vista cinético expresándolo de la siguiente forma.

INHIBIDORES REVERSIBLES NO COMPETITIVOS

A diferencia de los inhibidores competitivos, los no competitivos se unen a la

enzima en un sitio específico diferente al activo. De esta propiedad se deriva
su nombre, pues no compiten con el sustrato para ocupar el sitio activo. Aún
más, este tipo de compuestos puede tener una estructura química totalmente
diferente a la del sustrato. Se piensa que al unir a la enzima un inhibidor de
este tipo, se produce un cambio en su estructura tridimensional que altera la
configuración del sitio activo, imposibilitando el reconocimiento del sustrato.
Cuando EI se rompe, la enzima adquiere su conformación activa.

Figura 6.21 inhibición no competitiva.(Figura elaborada por el autor).

La grafica que se presenta en la figura 6.21 fue obtenida de un experimento

con inhibidores no competitivo.

En este caso se puede hacer énfasis en lo siguiente:

1. Las rectas con o sin inhibidor interceptan al eje x (1/ [S]), en el mismo
punto y de acuerdo a la ecuación de Michaelis - Menten, ese punto vale -
1/Km, por lo que se puede concluir que: los inhibidores no competitivos no
afectan la Km de la enzima, es decir, no alteran la afinidad de la enzima por su
sustrato.

2. Las rectas sin inhibidor interceptan al eje y (1/v0), en puntos más bajos que
las que sí tienen. A mayor concentración de inhibidor, el intercepto está más
arriba. Cuando no hay inhibidor, el punto de intersección es igual a 1/Vmax.
Para que este punto se desplace hacia arriba y coincida con los puntos de
intersección de las rectas con inhibidor, Vmax debe ser más pequeña. Esto
significa que la presencia de un inhibidor no competitivo disminuye la velocidad
máxima de la enzima.http://libroelectronico.uaa.mx/capitulo-6-
enzimas/inhibidores-enzimaticos.html

• Evaluación de la evidencia

1. Evalúe sí la ponencia de su compañero presenta una estructura

argumentativa.
No. la compañera solo se apoyó en el artículo de la broca del café y no
cito autores que haya investigado el mismo tema.
2. Determine sí la hipótesis escogida proviene de los datos del
experimento. En qué datos se basa?
Si está basada en los datos. El medio 1 a diferentes temperaturas
presenta < UA/ enzimática con respecto al medio 2.
3. Cómo se relacionan los datos presentados con la hipótesis que
presenta?, cuál es el fundamento teórico?, referencia autores
que expliquen la teoría?
Un inhibidor enzimático es algún compuesto que impide, que alguna, o
algunas enzimas catalicen. Este tipo de compuestos son
específicos, ósea pueden inhibir un grupo de enzimas pero no
tener ninguna actividad con otras enzimas.
Los inhibidores de -amilasas se encuentran en semillas de
leguminosas y gramíneas (Richardson 1991) y se han purificado de
semillas de trigo (Triticum aestivum L.), fríjol (Phaseolus vulgarisL.),
maíz (Zea mays L.) y Amaranthus sp., en busca de sus propiedades
insecticidas contra coleópteros (Schimoler-O’Rourkeet al. 2001;
Franco et al. 2000; Valenciaet al. 2000; Minney et al. 1990 citado
por Gatehouse 1999; Ishimoto y Kitamura 1989, citado por Chrispeels
1997; Chagolla-López et al. 1994).
4. La hipótesis está respaldada con otros estudios o artículos
científicos que puedan evidenciar qué la hipótesis escogida es la
más adecuada?
La hipótesis solo se basó en un solo artículo científico le falto más
investigación y respaldo apoyándose en otros artículos.
5. En la ponencia presenta las condiciones en las cuales podría ser
refutada su hipótesis?
Si dado que en la ponencia la compañera no especifico que tipo de
inhibición se presenta lo cual hace necesario precisar frente a qué tipo
específico de inhibidor nos encontramos dependiendo de la forma en que
actúan por ello es preciso explicar la hipótesis a partir de Inhibidores
Reversibles no Competitivos, porque los problemas de inhibición no
se pueden superar con concentraciones altas de sustratos para dejar por
fuera de competencia al inhibidor que se encuentra en la harina de fríjol
(Phaseolus vulgaris L.).
Explicación de Hipótesis 2 siguiendo el modelo de Toulmin.

Texto científico

Con los resultados anteriores se obtuvo la cepa más eficiente en degradar el

almidón, ahora se pretende optimizar las condiciones para esta producción.
Para ello se desea comparar dos medios de cultivo, los cuales se preparan así:

SUSTRATO MEDIO 1 MEDIO 2

Fuente de Carbono Harina de yuca (10g. L- Harina de trigo (10g. L-

1) 1)

Fuente de Nitrógeno Harina de frijol (5g. L-1) Harina de sangre (5g. L-

1)

Mezcla de K(1ml. L-1) K(1ml. L-1)

micronutrientes

Las condiciones de cultivos en los dos casos fueron: 5 días de fermentación en

medio líquido y agitación constante de 120 rpm. Se realizaron dos
fermentaciones para cada medio.

Al final el experimento se obtuvo los resultados que se muestran en la

siguiente tabla, la cual muestra la actividad enzimática obtenida por cada
medio.

Tabla de Resultados:

Temperatura pH Final UA/Enzimática

M1 55 5,2 5,4

M1 57 5,7 4,6

M2 57 5,2 13,3

M2 55 5,4 14,2

Condiciones de dos medios de cultivo con diferente sustrato

Las condiciones de cultivo en dos casos fueron: cinco días de fermentación en

medio líquido y agitación constante de 120 rpm. Se realizó un experimento, en
los cuales cada medio de cultivo se incubo a dos temperaturas diferentes
(30°C y 35°C), con tres replicas, no se controló el pH durante la fermentación.
La amilasa, se produce mediante fermentación de sustratos. Durante la
producción es importante el control de la temperatura, pH y la presencia de
compuestos químicos inactivantes. Los medios de cultivo han facilitado a los
microorganismos el desarrollo de enzimas con propiedades fisicoquímicas muy
deseables. La producción de alfa amilasa puede darse en medio sumergido o
en estado sólido o por procedimientos de fermentación.

Resultados de la comparación de los medios de cultivo.

El medio 1 a diferentes temperaturas presenta < UA/ enzimática con respecto

al medio 2.

Garantía

Inhibidores enzimáticos

Un inhibidor enzimático es algún compuesto que impide que alguna, o algunas,

enzimas catalicen. Este tipo de compuestos son específicos, o sea que pueden
inhibir a un grupo de enzimas pero no tener ninguna actividad con otras
enzimas. Los inhibidores, dependiendo de la forma en que actúan se han
clasificado en dos grandes grupos:

· Inhibidores irreversibles

· Inhibidores reversibles. (Martínez Guerra J.J -2014).

INHIBIDORES REVERSIBLES

A diferencia de los inhibidores irreversibles, los reversibles reaccionan con la

enzima, pero el complejo enzima inhibidor producido puede separarse para
formar la enzima libre más el inhibidor. Mientras I permanezca unido a E la
enzima es inactiva puesto que no puede unir al sustrato:

La enzima libre, producida por la reacción que transforma EI en E + I, no se ha

modificado y por lo tanto tiene actividad catalítica. Además, la enzima libre
puede colisionar, o con una molécula de inhibidor, o con una de sustrato. En el
primer caso forma EI y en el segundo ES, el cual se rompe en E + P. La
probabilidad de que una molécula de enzima encuentre una molécula de
sustrato, o de inhibidor, depende de la concentración a la que se encuentren
estas moléculas, si hay más inhibidor que sustrato, es más probable que se
forme EI que ES. Hay dos tipos de inhibidores reversibles los cuales se
estudian por separado.
INHIBIDORES REVERSIBLES NO COMPETITIVOS

A diferencia de los inhibidores competitivos, los no competitivos se unen a la

enzima en un sitio específico diferente al activo. De esta propiedad se deriva
su nombre, pues no compiten con el sustrato para ocupar el sitio activo. Aún
más, este tipo de compuestos puede tener una estructura química totalmente
diferente a la del sustrato. Se piensa que al unir a la enzima un inhibidor de
este tipo, se produce un cambio en su estructura tridimensional que altera la
configuración del sitio activo, imposibilitando el reconocimiento del sustrato.
Cuando EI se rompe, la enzima adquiere su conformación activa.

Figura 6.21 inhibición no competitiva.(Figura elaborada por el autor).

La grafica que se presenta en la figura 6.21 fue obtenida de un experimento

con inhibidores no competitivo.

En este caso se puede hacer énfasis en lo siguiente:

1. Las rectas con o sin inhibidor interceptan al eje x (1/[S]), en el mismo punto
y de acuerdo a la ecuación de Michaelis - Menten, ese punto vale - 1/Km, por lo
que se puede concluir que: los inhibidores no competitivos no afectan la
Km de la enzima, es decir, no alteran la afinidad de la enzima por su
sustrato.

2. Las rectas sin inhibidor interceptan al eje y (1/v0), en puntos más bajos que
las que sí tienen. A mayor concentración de inhibidor, el intercepto está más
arriba. Cuando no hay inhibidor, el punto de intersección es igual a 1/Vmax.
Para que este punto se desplace hacia arriba y coincida con los puntos de
intersección de las rectas con inhibidor, Vmax debe ser más pequeña. Esto
significa que la presencia de un inhibidor no competitivo disminuye la
velocidad máxima de la enzima.
http://libroelectronico.uaa.mx/capitulo-6-enzimas/inhibidores-
enzimaticos.html
Los inhibidores de -amilasas se encuentran en semillas de leguminosas y
gramíneas (Richardson 1991) y se han purificado de semillas de trigo (Triticum
aestivum L.), fríjol (Phaseolus vulgarisL.), maíz (Zea mays L.) y Amaranthus
sp., en busca de sus propiedades insecticidas contra coleópteros (Schimoler-
O’Rourkeet al. 2001; Franco et al. 2000; Valenciaet al. 2000; Minney et al.
1990 citado por Gatehouse 1999; Ishimoto y Kitamura 1989, citado por
Chrispeels 1997; Chagolla-López et al. 1994).

Los inhibidores de amilasas son glicoproteínas de bajo peso molecular que se

acumulan en vacuolas especializadas en la fase media de desarrollo de la
semilla. Al ser proteínas de semillas, son excelentes candidatos para ser
expresados heterologamente en tejidos homólogos como la semilla del café,
donde ocurre el desarrollo biológico de la broca. Esto es particularmente
importante porque inhibidores de amilasas , como el AI el frijol, para poder ser
activo, es necesario que en la semilla ocurra cambios postraduccionales como
la glicosilacion y proteólisis, y crear así un sitio de unión a la enzima blanco.
Chrispeels (1997) registra que cunado los genes de proteína de semillas son
expresados en platas heterologas, los productos de la transgénesis son
correctamente procesados y transportados hasta las vacuolas especializadas
para la formación de un inhibidos de amilasas activo. La actividad máxima del
inhibidor se obtiene en un intervalo de temperatura de entre 22 y 37°C. El
tiempo de incubación para la activación del inhibidor varía entre 10 minutos a
un pH de 4,5 y entre 40 minutos a 120 minutos para un pH de 6,9 que es el
óptimo para la enzima amilasa (Marshall y Lauda 1975, le berre Anton et
al.,,1997; Jiang et al., 2008).

Respaldo.

Los genes de inhibidores de alfa-amilasas de fríjol (AI) han sido identificados y

clonados con el propósito de obtener plantas transgénicas. Se han obtenido
plantas de arveja (Pisum sativum L.) vía Agrobacterium tumefaciens que
expresan AI, acumulándose de forma estable en sus semillas, a niveles de 0,8
-1% de expresión. Estudios en campo y bioensayos con semilla de arveja
transgénica ocasionaron 100% de mortalidad de larvas de Bruchus pisorum
L.(Coleoptera: Bruchidae) (Chrispeels 1997; Schroeder et al. 1995).

Valencia Et al (2000), encontraron mediante ensayos espectrofotométricos y

zimogramas de inhibición, que inhibidores de amilasas, de frijol (P. Vulgaris y
Phaseolus coccineus L) bloquean la actividad de la amilasas de la broca del
café. Los genes de inhibidores de amilasa de frijol han sido identificados y
clonados con el propósito de obtener plantas transgénicas. Se han obtenido
plantas de arveja (Pisum Sativum L). Vía Agrobacterium tumefaciens (Smith y
Towm) que expresan AI, acumulándose de forma estable en sus semillas, a
niveles de 0,8 a 1%. Estudios de campo y bioensayos con semilla de arveja
transgénica ocasionaron 100% de mortalidad de larvas de Bruchus Pisorum L.
(Coleoptera: Bruchidae) (Chrispeels 1997)

Excepción: Una de las formas de regulación de la actividad de una enzima es

a través de moléculas que disminuyen su velocidad de reacción, llamadas
inhibidores. La unión de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al
sitio activo de la enzima y/u obstaculizar que la enzima catalice su reacción
correspondiente. La unión del inhibidor puede ser reversible o irreversible.
Normalmente, los inhibidores irreversibles reaccionan con la enzima de forma
covalente y modifican su estructura química a nivel de residuos esenciales de
los aminoácidos necesarios para la actividad enzimática. En cambio, los
inhibidores reversibles se unen a la enzima de forma no covalente, dando lugar
a diferentes tipos de inhibiciones, dependiendo de si el inhibidor se une a la
enzima, al complejo enzima-sustrato o a ambos.

Cualificador Modal.

Probablemente los Inhibidores Enzimáticos presentes en algunos alimentos

pueden ser el factor que impida la correcta acción de las Enzimas y por ende el
uso eficiente del sustrato.

Según el análisis de la situación es posible que el déficit de crecimiento

enzimático del medio 1 se deba seguramente a la presencia del inhibidor del
frijol que fue utilizado como fuente de nitrógeno

Conclusión.

De acuerdo a lo anteriormente concluimos que en el problema planteado la

diferencia de actividad enzimática en el medio 1 con respecto al medio 2, se
debe a la presencia de inhibidores en la harina de frijol y la harina de yuca
(Medio 1)
 Referencias bibliográficas

- Ortiz, F. (2012). Módulo de Biotecnología. Universidad Nacional

Abierta y a Distancia. Páginas: 44-47. En:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/305689/Contenido_Bio
tec-nologia_305689_actualizado.pdf.

- Ortiz, F. OVA de Fermentaciones. Universidad Nacional Abierta y

a Distancia.
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/305689/ova/index2.ht
ml

- Inhibición enzimática (2017). Recuperado el 29 de marzo

del 2017. Disponible en:
http://libroelectronico.uaa.mx/capitulo-6-
enzimas/inhibidores-enzimaticos.html