UROGÉNESIS EN HÍGADO

Calderón Hidalgo J. 1, Casas Martel L.1, Rivera Huanaquiry J.1, Santa Cruz Cruz L.1
Gordillo Rocha G.2, Solano Canchaya G.2
1
Alumnos de la Facultad de Farmacia y
Bioquímica, UNMSM
2
Docentes del Departamento de Bioquímica

INTRODUCCION:
La urea es el producto final mayoritario del metabolismo del nitrógeno proteico en los seres
humanos. Constituye la fracción más abundante del nitrógeno no proteico. La urea se produce en
el hígado y es excretada por la orina. Su elevación es producto de trastornos en la función renal o
hepática, problemas dietéticos, diabetes y otros. 1

OBJETIVOS
 Evidenciar la acción de arginasa con la obtención de la urea obtenido del hígado
 Cuantificar la cantidad de nitrógeno presente en la muestra.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTALN°4
UROGÉNESIS EN HÍGADO
Experimento N°1: Obtención de la enzima arginasa a partir de hígado
Pesar 5g de hígado, enjuagar con KCl 0.15 M y secar con papel filtro. Añadir 10 ml KCl 0.15 M –
MnCl2 5mM. Homogenizar en frío y centrifugar a 3000rpm por 10 minutos. El sobrenadate
contiene arginasa.

Activavcion de la enzima arginasa. Añadir 10 mL buffer glicina 0.2 m pH 9 e incubar a 37°C por 30
min.

Estudio de la actividad enzimática.

Reactivos 1 2
Arginina 0.1M 0.8 ml o.8 ml
Buffer glicina 0.2 M pH 9 0.5 ml 0.5 ml
Sol. Arginasa 0.5 ml -
Agua destilada - 0.5 ml
Mezclar completamente y llevar a BM a 37 °C durante 30 minutos. Luego colocar los tubos
en un bañp con hielo durante 5min.
Determinación del amoniaco
Preparar 4 tubos de prueba.

Reactivos 1 2 St B
Sobrenadante 0.01 0.01 - -
Est. De
- - 0.01 -
nitrógeno
Ureasa I I I I
Agua
- - - 0.01
destilada
Reactivo de
1 1 1 1
salicilato
Reactivo de
1 1 1 1
hipoclorito

RESULTADOS N°4

Tubo Absorbancia
1 0.207
2 0.243
3 0.185
4 0.174

30 𝑚𝑔/𝑑𝑙 − − − − 0.24 𝐿
𝑋 − − − − − −0.03 𝐿
𝑋 = 4.481 𝑚𝑔/𝑑𝑙
El contenido de nitrogeno presente en la muestra es 4.481 𝑚𝑔/𝑑𝑙

DISCUSIONES
En la práctica N° 4 se puede observar una coloración verdosa esto se debe, a urea
presente en la muestra, es desdoblada a amonio por acción de la enzima ureasa.
El amonio producido reacciona con salicilato e hipoclorito en ambiente alcalino formando
un complejo de color verde. La intensidad del color producido es directamente
proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra y su absorbancia se lee a
600nm.1

CONCLUSIONES
 Se evidenció la acción de arginasa con la obtención de la urea obtenido del
hígado y cuantificó la cantidad de nitrógeno presente en la muestra siendo
esta 4.481 𝑚𝑔/𝑑𝑙.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Urea (Salicilato) (En línea). Disponible en: http://andinamedica.com.pe/wp-

content/uploads/2016/08/VTK-urea-salicilato.pdf Acceso el 9 de mayo del 2019.