AJUSTE DE INOCULO Y PRUEBAS DE PATOGENICIDAD

ORLEY OBISPO BIPURO

TANIA MARLEI RAMOS
ESTUDIANTES

DONALD RIASCOS ORTIZ

CARLOS EMIRO ARBOLEDA
DOCENTES

UNIVERSIDAD DEL PACÍFICO

PROGRAMA DE AGRONOMÍA
ASIGNATURA: FITOPATOLOGÍA
DISTRITO ESPECIAL BUENAVENTURA VALLE
MAYO 2019
 INTRODUCCIÓN

En los estudios encaminados a conocer la etiología de la enfermedad, una vez se ha aislado

los microrganismos en cultivo puro, es importarte preparar el inoculo y ajustarlo a una
concentración de 1x106 conidias/ml para hongos y 1x108ufc (unidades formadoras de
colonias)/ml para bacterias, con el propósito de realizar pruebas de patogenicidad, y en ese
sentido confirmar los postulados de Koch.

OBJETIVO

- Conocer los procedimientos para la preparación de inóculos de hongos, mediante

conteo en cámara de Neubauer o hemocitometro.

- Determinar la etiología de enfermedades mediante pruebas de patogenicidad.

METODOLOGÍA

1. De un hongo crecido en cultivo puro tome esporas con ayuda de un asa micológica.
2. Inmediatamente transfiera las esporas a un recipiente con un volumen de agua destilada
estéril.
3. Con ayuda de un vortex agite la suspensión conidial.
4. Transfiera a una cámara de Neubauer 10 µl de la suspensión conidial
5. Realice conteo en cámara de Neubauer, de acuerdo con la explicación del profesor.
Considere el tamaño de las esporas para definir el campo en cual realizar el coteo.
6. Realice la sumatoria del número de esporas, considerando el número de campos
registrados y multiplique por la constante (50.000 o 2000) para determinar la concentración
de la suspensión inicial). Considere para tal fin, el tamaño de las esporas y la región de la
cuadricula en la cual se hizo el conteo.
7. A partir de esta suspensión conidial, realice los cálculos pertinentes para preparar una
segunda suspensión conidial ajustada a una concentración de 1 x106.
8. Posteriormente, realice la desinfección superficial de órganos sanos por inmersión en
etanol al 70% por 1 minuto, hipoclorito de sodio al 1% por 1 minuto y agua destilada estéril
(3 lavados).
9. Finalmente, realice la inoculación de los órganos e incube los montajes de acuerdo con
las indicaciones del profesor.
10. Realice el seguimiento de la sintomatología y registre los periodos de incubación y de
latencia.
 DATOS Y OBSERVACIONES

Figura 1. Cultivo puro de la esporas Figura 2. Utilizando el Microscopio

del Hongo Colletrotricum sp. De se hizo Conteo en cámara de
mango. Neubauer.
- Utilizando el asa micológica se - Utilizando la Micropitetas
pudo extraer las esporas de un calibrado a 100 µl, luego se
cultivo vivo, para luego diluir en adiciono en la cámara de
tubo de ensayo la cual contenía Neubauer, para realizar el
agua destilada estéril. conteo de las esporas con la
ayuda del microscopio.

DISCUSIÓN

Para la realización del conteo de las esporas se utilizó una cámara de Neubauer, luego se
procedió a la observación en el microscopio, para darles número de las esporas. Teniendo
los datos de las esporas de C1, C2, C3, C4 y C5 se hizo una sumatoria, para luego
multiplicar por 50.000 que es el dato o valor constante que se utiliza, para el conteo de las
esporas deben estar dentro del cuadro de la Cámara Neubauer. Así mismo se encuentra
el resultado real de las esporas que se utiliza, en la siguiente ecuación.

C1 6
C2 6
C3 7
C4 7
C5 8
34 x 50.000 = 1.700.000

Formula: 1 x 106 esp/ml

C1 x V1 = C2 x V2
C1 1.700.000 esp/ml
V1 ?
C2 1.0 x 106 esp/ml
V2 10 plantas x 10 µl =100µl =0.1ml

1.0*106 esp/ml*0.1µl
V1 = = 0,06µl
1.7*106 esp/ml

Otra forma de Conversión de ml pasar µl.

1000μl
0,06ml = = 60μl + adiciono 40 μl para completar 100 μl.
1ml

CONCLUSIÓN

Mediante la practica en el laboratorio se logró observar y reconocer esporas de hongos con

la cámara de Neubauer donde en ello se escogió cinco cuadriculas al azar para realizar el
conteo de esporas esta práctica es muy eficaz porque se puede determinar la etiología de
la enfermedad y conocer en qué estado del fruto si es joven o ya en estado adulto es
susceptible a la enfermedad cuando lo afecta para poder tener en cuenta o seguir los
postulados de Koch para tener en cuenta las estrategias de manejo y control de la
enfermedad para tener avances positivos.
 BIBLIOGRAFÍA

- Agrios, N. G. (2005). Fitopatología. México, D. F: Editorial Limusa.

- Almodóvar, W. I. (1996). ENFERMEDADES EN LAS PLANTAS Organismos Patógenos,

Identificación y Diagnóstico. Clínica de Plantas, 1- 4.