Vinícius Vieira ~ MEDUEAXXXII

Transcrição Genética - Replicação do DNA

Procariontes não tem o nucleossomo. Isso é uma das razões para ser mais rápido nos
procariontes a replicação do DNA. É necessário separar os nucleossomos para fazer a
replicação.
Nucleossomos são as unidades da cromatina formado pelas histonas (octâmero)
Para replicar em eucarionte é preciso abrir o DNA e quando ele abrir vai precisar separar os
nucleossomos. Ou seja, é necessário separar as histonas que formam o nucleossomo.

Regras da replicação

1 - Semiconservativa
● Porque nós temos a fita de origem que dará origem a 2 novas fitas.
● É a forma ideal de copiar e transmitir a informação genética.

2 - Bidirecional e início único

● Tanto eucarionte quanto procarionte é bidirecional.
● Em procariotos têm apenas um sítio, já em eucariotos tem diversos sítios de
reconhecimento das proteínas pré-iniciais.
● O sítio de origem é rico em AT. Em procariontes esse sítio se chama Oric, e contém
245 pares de bases.
● Os sítio são sequências ricas em adenina e timina, onde o complexo proteico inicial
reconhece para que haja a replicação do DNA. As proteínas reconhecem e formam a
bolha de replicação.
● A enzima DNA polimerase vai inserir nucleotídeos em sentidos opostos.
● Bolha ou Forquilha de replicação: Esses sítios ou origem em eucariontes são
chamados de ARS 50 Pares de bases.
● ARS são sequências de repetição autônoma ricos em adenina e timina, que se
distribuem vários pontos específicos do DNA. Eles reconhecem o complexo proteico
inicial. São sítios de reconhecimento enzimático para que o DNA se abra.

3 - A síntese de DNA é feita na direção 5´ → 3´ e é semidescontínua

A fita líder se forma do sentido 5’ → 3’.
É semidescontinua, pois uma fita se forma de forma continuada. A outra fita se forma
através de fragmentos(Fragmentos de OKAZAKI).
Os fragmentos se formam para que diminua os prováveis erros de adição de nucleotídeos e
gerar no sentido 5’ → 3’. Pois se fosse muito rápido, os erros seriam mais prováveis. Atrás
das enzimas que estão adicionando nucleotídeos já vem enzimas de reparos para verificar
possíveis erros.
A fita contínua é a fita líder que está no sentido 5’ → 3’, Enquanto a fita que forma os
fragmentos é dita fita tardia.
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Principais enzimas envolvidas

1 - Nuclease
Qualquer enzima capaz de clivar ácido nucleico. A maioria das enzimas no processo atuam
como nuclease( helicase, topoisomerase, DNA polimerase).
As nucleases podem atuar nas pontas do DNA ou na parte interna

2 - Primase
As primeiras proteínas a reconhecer o sítio de início são as proteínas pré iniciais.
As primases são enzimas RNA, elas têm a capacidade de adicionar ao DNA uma sequência
RNA iniciador (Contendo 10 nucleotídeos).
Porque uma primase que é uma enzima RNA vai atuar no DNA ?
Pois as enzimas que comandam a replicação as DNA polimerase, mas elas só consegue
atuar se houver uma hidroxila (-OH) livre, para que haja ligação fosfodiéster. As enzimas
RNA (primase) tem a capacidade de iniciar uma sequência sem a presença de uma
hidroxila (-OH). Apenas pelo reconhecimento dos nucleotídeos base.
A primase vai reconhecer e vai adicionar uma sequência que contém uracil. Essa sequência
que ela adiciona é chamada de RNA iniciador ou ​primer​. Agora a DNA polimerase pode
adicionar a sequência de nucleotídeos até o final.
No final da replicação a Uracil devem ser retirada. Para isso, as enzimas de reparo vão
retirar o Uracill do primer e vão adicionar adenina e timina no lugar.

3 - DNA polimerase
A DNA polimerase é a enzima que vai comandar a replicação.
Vai adicionar nucleotídeos de DNA. E fazer o reparo do DNA (Para consertar os possíveis
erros que ainda existam).
Retira uracil e adiciona timina.
Para que haja a replicação é necessário a presença do DNA pré-existente (molde),Primer
de RNA iniciador, Desoxirribonucleotídeos de adenina, timina, guanina e citosina.
Os íons de magnésio(Mg) auxiliam a DNA polimerase adicionar os nucleotídeos corretos.
A DNA polimerase vai adicionando os nucleotídeos a partir da hidroxila livre que foi
originada a partir da primase.
Acontece o ataque nucleofílico do trifosfato do nucleotídeo livre na hidroxila da ponta 3’.
Acontece a liberação de dois fosfato (Difosfato), e assim a molécula vai crescendo, vai
replicando DNA.
Obs:. Os nucleotídeos de uma célula que entrou em apoptose são reaproveitados por
outras células
Quais os tipos de DNA polimerase que vão atuar na replicação ?
Em procariotos são 3​: DNA polimerase I, DNA polimerase II, DNA polimerase III
DNA polimerase I: Ela faz reparo do DNA. Polipeptídico único gene polA. Ela vem atrás da
maquinaria da replicação procurando erros.
DNA polimerase II: Também faz reparo do DNA atuando nos sentidos opostos da fita( “o
sentido não precisa saber”), provém gene polB.
DNA polimerase III: É a chamada replicase do DNA,vai comandar a replicação. É ele que
vai adicionar os nucleotídeos a partir do primer. É uma enzima multimérica ( 20
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polipeptídeos, cada polipeptídeo vai ter uma função na molécula), portanto é uma
holoenzima. A sua função é replicar o DNA.
Tem um braço (subunidade) que vai reconhecer o primer, e tem outra estrutura chamada de
Clamp (grampo). Este se prende ao DNA para evitar que a DNA polimerase deslize (Se ela
deslizar, pode acidentalmente repetir a mesma sequência, gerando mutações por deslize da
polimerase). As subunidades (são 20) se juntam para formar esse cerne catalítico que tem a
função de replicar o DNA.

Em eucariontes: ​São 5 DNA polimerase.

● α e δ- Replicação do DNA no núcleo (“Igual a DNA polimerase III dos procariotos”;
uma atua na fita contínua “δ”, a outra na fita descontínua “α”)
● γ- Replicação do DNA mitocôndrias (É similar a de procariontes)
● β e ε- Reparo do DNA ( são únicas, somente uma subunidade,ou seja, elas não são
multiméricas ; Elas vêm para trás das enzimas de replicação reparando os erros)

4 - DNA ligase
Vai conectar os fragmentos finais do DNA, por exemplo quando tira a uracil do primer.
Obs:. Para formar um fragmento de okazaki é necessário ter um primer antes. Na fita
contínua há apenas um primer, enquanto que na fita descontínua há mais de um primer.

5 - DNA helicases
É uma das proteínas pré-iniciais, porque depois que o complexo Inicial reconhece o sítio de
início, aí a helicase também se liga a ele e abre a fita (clivando as pontes de hidrogênio,
com gasto de ATP).
OBS:. As fitas de DNA tendem a voltar a se enrolar, se atraem quimicamente a todo
momento.

6 - SSB
Estabilização das fitas separadas. Para evitar que as fitas se enrolem e se atraem
quimicamente.
As SSB se ligam no DNA estabilizando a fita separada.
Há um problema, o DNA e dinâmico ele faz movimentos sobre si mesmo (Movimento
reverso). Para evitar que isso aconteça nós temos as tropoisomerases.

7 - Tropoisomerases (Meio confuso a explicação dela)

Vão atuar na frente da Forquilha de replicação tem a função de evitar a super espiralização.
Para evitar o movimento dinâmico do DNA as topoisomerases vão se ligar.
As topoisomerases vão clivar uma ou ambas as fitas a frente da Forquilha (Separando a fita
que está em movimento da fita que está parada). Elas se envolvem na frente da Forquilha
Elas giram em torno do DNA e o separam em duas partes (Momentaneamente): A que está
em movimento da que está parado.
Depois que a helicase se aproxima da tropoisomerase, a helicase religa o DNA nesse ponto
e movimento outro ponto do DNA mais à frente para que haja uma nova quebra à frente da
Forquilha.
Tropoisomerase I: Quebra somente uma fita
Tropoisomerase II: Quebra ambas as fitas
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A Forquilha se aproxima, a Tropoisomerase religa e quebra mais à frente, e assim por

diante.
A Tropoisomerase Também atua restabelecendo o DNA original. Vai ter tropoisomerase a
frente evitando que se espiralize e vai ter tropoisomerase atrás restabelecendo o processo
original do DNA (Vai voltar o espiralado normal do DNA).
No fim das contas o objetivo da tropoisomerase é ​manter a forma natural do DNA, ou seja,
não deixar que ele se superespiralize e nem desespiralizem.
Elas podem ser chamadas também de girases.

8- Telomerases
Forma os telômeros. Na maioria das células elas param de se expressar após o
nascimento.
A replicação vai acontecer até a DNA polimerase encontrar o telômero.
A DNA polimerase faz a replicação quando encontra o telômero e então sai do DNA.
O telômero só é adicionado se existir telomerase.

A helicase sinaliza para primase. A união das duas se chama primossomo.

Na fita descontínua, forma-se um laço por dentro da enzima durante a replicação. Isso
facilita o movimento da enzima no sentido 5’ → 3’.
Os livros falam que o primer é retirado, Mas quem na verdade é removido é a Uracil.

Replissomo: É o aparelho de replicação do DNA (junção de todas as enzimas).

​ Diferenças entre eucariotos e procariotos

● Os Primer e os fragmentos de okazaki são mais curtos em eucariotos do que em
procariotos. Porque quanto mais curto o fragmento, menor a probabilidade de erros.
● A replicação e procariontes acontecem todo ciclo celular, já em eucariontes só
durante a fase S da intérfase. Isso também diminui a probabilidade de erros em
eucarionte.
● Em procariontes existe um início único (Oric), já em eucariotos existem vários (ARS).
● DNA polimerase de replicação de procariotos é somente uma, em eucariotos são
duas ( fita descontínua “α”, fita contínua “δ”).
● Procariontes não possuem nucleossomos já que não tem histonas, sendo assim,
não vai formar cromatina, nem cromossomo, ou seja, o processo é mais rápido.
Eucarionte possui nucleossomo devido às histonas.
● Procariontes a replicação é circular (igual nas mitocôndrias de eucariontes). Em
eucariontes a replicação é linear.
● Procarionte não tem telômero, enquanto que eucariontes tem telômero (tem a
função de proteger).

​Transcrição Genética - Transcrição do DNA

Tipos de moléculas de RNA

Atuam no código genético
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1- RNAm (mensageiro)
❖ É justamente a codificação da informação genética. Codificar a informação genética
do DNA para aminoácido na proteína, assim gerando uma função específica
proteica.
❖ Essa codificação de DNA para proteínas é feito a partir da trinca de bases. Cada
trinca de nucleotídeos do DNA equivale a uma trinca de nucleotídeos no RNA,
chamada códon que, por sua vez, é lida em aminoácidos na proteína.
❖ O RNA mensageiro vai ser codificado nessa tabela, onde cada códon será lido nos
aminoácidos (20 tipos de aminoácidos).

2- RNAt (transportador)
❖ Assim que ele é gerado, sai do núcleo e vai para o citoplasma se ligar a um
aminoácido.
❖ O RNA transportador, por sua vez, é formada por várias estruturas dobradas.
Dobram sobre si mesmo por ligações de ponte de hidrogênio, formando uma fita
dupla (parecido com DNA) pela complementaridade dos três nucleotídeos
❖ A função desse RNA transportador: ele contém três sítios. Um sítio de ligação ao
aminoácido que é específico ao seu aminoácido(​ela não deu continuidade ….)
❖ Cada RNA transportador com tem especificidade aos seus aminoácidos
❖ Os aminoácidos estão livres no citoplasma . Os aminoácidos vem de proteínas
degradadas.
❖ O RNA sai do núcleo e vai para o citoplasma e como são específicos para seus
aminoácidos eles já vão se ligar nos seus aminoácidos.
❖ O RNA transportador fica no citoplasma aguardando o RNA mensageiro que vai sair
lá do núcleo contendo informações que irão ser codificadas em proteína nos
ribossomos.
❖ O RNA transportador contém outro sítio. Um sítio chamado anticódon esse sítio
(Nesse caso fenilalanina, ele é específico a AAG e esse sítio vai reconhecer no
mensageiro o códon UUC).
❖ Anticódon específico para o códon.
❖ Quando o RNA transportador vai fazer a leitura do RNA mensageiro? Quando o
mensageiro estiver no ribossomo. Quando esse códon do mensageiro estiver
exatamente No sítio termocatalítico do ribossomo o transportador é ativado, e faz a
ligação.
3- RNAr ribossômico
❖ Cuja função é se associar a proteínas ribossômicas que formam ribossomo, o qual
irá comandar síntese proteica.
❖ Os tipos de RNA ribossômicos:
➢ Em eucariontes são 5.
➢ Eles se associam a 80 proteínas para formar o ribossomo.
4- snRNA Nucleares
❖ Não sai do núcleo
❖ Esse RNA nuclear provém de genes específicos.
❖ São cinco tipos de RNA nuclear que, por sua vez, provém de cinco genes
específicos. Eles vão se associar 40 proteínas para formar esse complexo chamado
de Spliceossomo. Que é similar ao ribossomo
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❖ Função do Spliceossomo:
➢ Retirar íntrons do RNA mensageiro e vai unir os éxons
➢ O processo de retirada de íntrons se chama Splicing. Esse processo
acontece no núcleo em eucariontes.

No caso do RNA não vai precisar de um primer. A própria RNA polimerase pode iniciar a
adição de nucleotídeos.
O RNA se forma no sentido 5’ → 3’
Ela vai ser lida a partir da fita molde contrária 3’ → 5’, para sintetizar no sentido 5 linha 3
linha( antiparalelo a fita de DNA).

❖ RNA polimerase:
➢ É uma holoenzima
➢ Tem várias unidades com funções diferentes. Uma dessas unidades
reconhece o sítio promotor do gene no DNA. Outra unidade é o cerne
catalítico (Faz a transcrição do RNA).
➢ A RNA polimerase vai encontrar e reconhecer a região promotora do DNA e
a partir dela iniciará a Transcrição do RNA.
➢ Os fatores de transcrição cliva e abrir o DNA (Somente a parte do gene).

Estágios da transcrição

1- Início
No estado de início a RNA polimerase vai reconhecer os sítios promotores.
Regiões promotoras são sequências de reconhecimento enzimático para RNA polimerase
no Gene para que haja a transcrição.
Aqui nós temos as regiões promotoras Dos genes de eucariotos. A sequência TATA
(Adenina e timina) é uma sequência promotora conservada. Essa região é altamente
conservadas existe em quase todos os genes.
Além dessa sequência (TATA) os genes podem ter outras sequências na região promotora
Digamos que a sequência TATA está alterada, então a RNA polimerase busca a
sequência auxiliar. Isso é uma forma de não perder o gene. se as duas estiverem alterados
aí não tem jeito.
Depois que reconhece o promotor não começa a transcrição imediatamente. O processo é
assim: Primeiro reconhece o sítio promotor, em seguida desliza pelo gene até encontrar a
sequência de início (Trinca de início).
“ essa numeração significa que esse promotor está a 30 nucleotídeos da trinca de início”.
Toda sequência tem consenso, isso significa que tem sentido na abertura. todas elas são
capazes de iniciar a transcrição.
É procarionte tem uma sequência diferente.
Em eucariotos os fatores de transcrição são diversos e vão sinalizar para RNA polimerase
Se ligar na região promotora.
O fator de transcrição TFIIH tem função semelhante a helicase ou seja ela vai cliva as
pontes de hidrogênio (Somente nas regiões do gene). então forma-se uma bolha de
replicação e são adicionados os primeiros núcleos.
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2- Alongamento
Significa que a RNA polimerase vai adicionar os sucessivos nucleotídeos. Alongando a
cadeia.
durante o alongamento ou RNA vai se formando.7-metil-guanosina (CAP) várias guaninas
associadas a adenina.É como se compactar-se a ponta do RNA, Ou seja, têm função de
proteger de degradação.
A média de vida do RNA de procarionte é 5 minutos já eucariontes é 5 horas. Eucarionte
demora mais porque tem todo esse processo de proteção contra enzimas ( RNAses).
A CAP 5’ sinalizar para proteínas de revestimento chamadas CDP (Tem função de
proteção)
Um procarionte transcreve, traduz e degrada (Quase simultâneamente). A RNA polimerase
faz praticamente tudo.

3- Término
Em um dado momento a RNA polimerase, que está deslizando no gene, encontra o sítio de
término do gene (é rico em T, portanto a RNA polimerase vai adicionar várias adeninas)
Quando a RNA polimerase encontra o sítio de término, ela sinaliza para enzimas chamadas
endonucleolíticas. Essas enzimas clivam o RNA então o ele é liberado.
Eucarionte o término ocorre quando a RNA polimerase encontrar um sítio rico em
citocinas(C). Nesse sítio chamado Ro, cliva-se o RNA e o libera.
E procariontes o processo ou não dependente de Ro, onde as bases complementares do
RNA se atraem e formam uma espécie de grampo, Isso desestabiliza o RNA que então
consegue se liberar.

❖ O RNA passa por três modificações:

➢ A primeira é adição do CAP (7-metil-guanosina não aponta 5’), com função
de revestimento e proteção.
■ Durante o alongamento o RNA vai se formando. É adicionado
7-metil-guanosina (CAP) que são várias guaninas associadas a
adenina. Elas compactam a ponta do RNA, ou seja, tem função de
proteger da degradação.
■ A CAP 5’ sinalizar para proteínas de revestimento chamadas CDP
(Tem função de proteção e reconhecimento pelo ribossomo)

➢ Poliadenilação na ponta 3’
■ Aponta 3’ deve ser protegida. Então vem uma enzima
Poli(A)Polimerase que vai acionar uma calda de adeninas na ponta
3’. Essa calda de adenina é composta por vários nucleotídeos de
adenina (cerca de 200), o que caracteriza uma Poliadenilação na
ponta 3’.
■ Essa cauda tem a função de proteger a ponta 3’ . Além disso, vai
atrair proteínas de revestimento (Proteínas de ligação na cauda PoliA
- função de proteção)
➢ Retirada dos Íntrons
■ o RNA só pode sair do núcleo após retirar íntrons
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■ Após a retirada, o RNA é revestido por várias proteínas que

protegem e sinalizam para sua saída do núcleo. Para que ele possa
atravessar os canais de poro nuclear. Se não houvesse esse
revestimento, o RNA não conseguiria atravessar os canais. A terceira
função seria permitir o reconhecimento do RNA pelos ribossomos,
através das CDP .Resumidamente, a função dessas proteínas seria:
proteção, sinalização para sair do núcleo e reconhecimento pelos
ribossomos.
■ O íntrons formam alças quando estão sendo retirado.
■ Existem os sítios ​ÉXON​ ​GT…..AG​ ​ÉXON .​As enzimas reconhecem
esse sítio e clivam o íntron, depois unem os éxons por ligação
Fosfodiéster.
■ A remoção dos introns é diferente para cada tipo de RNA. No ​RNA
transportador​ ocorre a clivagem pela enzima chamada
endonuclease de recomposição.
■ Após os íntrons serem retirados, os grupos hidroxila e fosfodiéster
tendem a se atrair e a enzima ligase de recomposição faz a ligação
entre os dois grupos, assim juntando os éxons.
■ Já no ​RNA ribossômico​ até hoje não se encontrou nenhuma enzima
que faça a clivagem dos Íntrons, estudos mostram que a retirada dos
é autocatalítica( O próprio RNA é capaz de retirar os seus íntrons
Através de algumas guaninas hidroxiladas ou qualquer tipo de
nucleotídeo hidroxilado. O nucleotídeo hidroxilado compete com o
sítio de ligação fosfodiéster, nessa competição os fosfatos do íntron
se liga na hidroxila. Então ocorre a ligação liberando a hidroxila do
éxon. Essa hidroxila por sua vez por sinalização faz ligação com o
grupo fosfato do outro éxon.)
■ o íntron vai circulariza-se por ligação fosfodiéster.
■ No RNA mensageiro​ quem faz a retirada dos íntrons é o
Spliceossomo. Que é formado por moléculas de DNA nucleares
associadas a ribonucleoproteínas, essa associação faz o
Spliceossomo que reconhece o sítio GT…..AG e faz a retirada dos
íntrons e depois a ligação do éxons.
❖ O RNA é auto-suficiente, as suas enzimas são mais altos suficientes que as de
DNA. Entretanto o DNA é mais estável
❖ Diferenças na transcrição entre eucarionte e procarionte
➢ Em procariontes o RNA mensageiro é multigênico, já em eucariontes o RNA
pode ser multigênico ou monogênico
➢ Procarionte só tem uma polimerase, enquanto que eucariontes possui três
➢ Um procarionte o transcrito primário não sofre modificações, já eucarionte
sofre três modificações(adição do CAP (7-metil-guanosina não aponta 5’);
Poliadenilação na ponta 3’ e retirada de íntrons)
➢ Procariontes não possuem proteínas de revestimento( por isso é
rapidamente degradado), Eucariontes é o contrário( demora 5 horas para ser
degradado).