UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

“CONCENTRACION DE MICROORGANISMOS”
PRIMER LABORATORIO DELCURSO DE MICROBIOLOGIA SANITARIA II

ARISTA VILLARRUEL MARTIN HIPOLITO -20170613H

DOCENTE: ING. CESAR TELLO C.

LIMA, PERU 2019

MICROBIOLOGIA SANITARIA II 1
 INDICE

RESUMEN……………………………………………………………3
INTRODUCCION…………………………………………………….3
OJETIVOS……………………………………………………………4
MARCO TEORICO………………………………………….……….5
PROCEDIMIENTO……………………………….………………….7
MATERIALES……………………………………………….……….9
RESULTADOS…………………………………………………..…10
DISCUSIÓN DE RESULTADOS ………………………………...14
CONCLUSIONES……………………………………………….…14
RECOMENDACIONES……………………………….……..…….14
OBSERVACIONES………………………………….………..……15
BIBLIOGRAFIA……………………………………………………..15
ANEXOS…………………………………………………………….16

MICROBIOLOGIA SANITARIA II 2
RESUMEN
En el laboratorio realizamos mediciones que tienden a ser exactas, para asegurarnos de ello
tenemos que corroborar primeramente el estado en que se encuentran los materiales para
luego ajustarlos o calibrarlos según sus usos.
En el presente laboratorio determinaremos la concentración de los microorganismos encontrados en la
muestra de estanque de arquitectura utilizando los siguientes métodos:
Método de la franja

Este método es práctico, pero debe tenerse cuidado en la medición. Consiste en verter una gota de la
muestra en el portaobjeto y cubrir con cubreobjetos, contabilizar el número de microorganismos en cada
campo y a partir de eso determinar la concentración.

Método de conteo Sedgwick-Rafter

El método de Sedgwick Rafter es el método de contaje más preciso, pero se debe tener cuidado en
saber concentrar la muestra. Es desventajoso en la medida de que también se concentra partículas en
suspensión y si no se tiene el debido cuidado se dificulta el reconocimiento de la muestra

INTRODUCCION
La concentración de microorganismos nos da una idea de cuan contaminada esta una muestra o un cuerpo
de agua, es un parámetro de polución del agua, en base a ello se realizan los diferentes procesos para el
tratamiento de agua para eliminar o disminuir la posible contaminación por parte de los microorganismos.
La cuantificación de microorganismo es una variable crítica en muchos procesos, como la
tecnología de fermentación, la medicina y la monitorización ambiental. Su conocimiento permite
la medición de velocidades de crecimiento y síntesis de productos, coeficientes de producción
microbiana y también para el cálculo de velocidades específicas y balance de masas en
bioprocesos.

MICROBIOLOGIA SANITARIA II 3
 OBJETIVOS

 Hallar la cantidad de campos para ambas celdas por medio del microscopio óptico.

 Determinar la concentración de los microorganismos encontrados en la muestra.

 Comprender los métodos para determinar la concentración de microorganismos, observar y determinar

cuál de los dos métodos es el más preciso

 Determinar el número total de microorganismos por el método de la celda Sedwigth – Rafter y el método
de la franja.

MICROBIOLOGIA SANITARIA II 4
 MARCO TEORICO
Las algas difieren de los otros grupos de seres pequeños o microscópicos por poseer sus pigmento
internos llenos de clorofila, que a veces están ocultos parcialmente o enmascarados por otros pigmentos,
lo que las capacita en presencia de la luz, combinar agua con anhídrido carbónico para formar almidón o
sustancias análogas y liberar oxígeno.
Las algas tienen la capacidad de modificar el pH, la alcalinidad, el color y la turbiedad.

MÉTODOS

 CUALITATIVO

Nos proporciona información sobre las especies planctónicas presentes a través de la diversidad y
abundancia relativa.

 CUANTITATIVO
Nos proporciona información sobre la densidad total de plancton a través del número de microorganismos
presentes por unidad de volumen de agua.
Examen para determinar la concentración de organismos en un ambiente, aplicado especialmente a
recuento de algas y protozoos. Puede realizarse sobre muestra directa, concentrada o diluida.
Para expresar resultados se usan diferentes unidades. Las más comunes son:

a) Nº organismos por mL o por L

b) Unidad estándar de área (UEA) por mL

Elementos necesarios: microscopio con objetivos calibrados; ocular de Whipple, u otro ocular reticulado,
cámara de Sedgwick-Rafter, de Nebauer, otras.

a) Determinación del Nº de Organismos por mL

 Procedimiento: Introducir la muestra, previamente homogeneizada en la cámara de

recuento y cubrir con la lámina cubreobjeto, evitando la presencia de burbujas de aire.
Dejar reposar unos minutos. Colocar la cámara sobre la platina del microscopio. Verificar
la presencia del reticulado en el ocular. Escoger el objetivo adecuado (generalmente 10x
o 20x), enfocar y proceder a contar el número de organismos por campo.

 Se entiende por campo el área ocupada por el cuadrado del reticulado (Whipple u otro)
Dependiendo de la densidad de los organismos en la muestra, se cuenta como mínimo
10 campos al azar

MICROBIOLOGIA SANITARIA II 5
b) Determinación de las Unidades Estándar de Área por mL

Una de las formas para estimar la densidad de algas en el agua es la determinación de una
unidad convencional conocida como "Unidad Estándar de Área", que incluye la superficie
ocupada por los microorganismos en el campo del microscopio. Dicha área equivale a la
ocupada por un cuadrado de 20 x 20 micrones por lado, o sea 400 micrones cuadrados.

1 UEA = 400

Procedimiento: Introducir 1 ml de muestra previamente homogeneizada en una cámara de

Sedgwick Rafter, cubrir con la lámina cubreobjeto, evitando dejar atrapadas burbujas de aire.

Dejar reposar unos minutos, y colocar en la platina del microscopio.

Verificar que el objetivo del microscopio cuente con el reticulado de Whipple. Escoger el objetivo
adecuado (generalmente 10x o 20x), enfocar y proceder a contar como unidades los cuadrados
(1x100 del reticulado de Whipple) ocupados totalmente por las algas y como fracción de unidad, los
cuadrados parcialmente llenos.

MICROBIOLOGIA SANITARIA II 6
PROCEDIMIENTO
MÉTODO DE FRANJAS:
Es el conteo más fácil que se pueda hacer con el portaobjeto, utilizando un aumento de 100x
(objetivo de 10x y ocular de 10x) y 400x (objetivo de 40x y ocular de 10x).

Procedimiento:

1. Se introduce la muestra de alga previamente homogenizada, con el gotero se deja caer una
gota en el portaobjeto y cubrir con la lamina de cubreobjeto y evitando la burbujas de aire.

2. Determinar el volumen de una gota de la muestra utilizando el mismo gotero (número de

gotas en 10 ml).

3. Determinar el número de campos en cada lado del cubreobjeto (con objetivo de 10x y
40x).

Campos del microscopio

Nº de campo Nº de microorganismos
1 ….
2 …
… ….
∑Total de campos ∑ total de microorganismos

Promedio:
Suma del Nº total de m.o
Suma del Nº total de campos

4. Determinación del número de microorganismos por campo (con objetivo de 10x y 40x).

5. Determinación del número de campos en todo el cubre objeto

Nº de campos en = (Nº de campos en cada lado del cubreobjetos)2

todo el cubre objeto

6. Determinación de la concentración de microorganismo.

Concentración de m.o. = promedio x Nº de campo en todo el cubre objeto

Volumen de gota

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MÉTODO DE CELDA SEDGMITH-RAFTER:

Procedimiento:

1. En la celda de segdmith-rafter, el cubreobjeto se gira 45ª y en cada área vacía se llena con
cantidades iguales de 1 ml. de la muestra utilizando para esto la pipeta.

Muestra

50 %

50 %

2. Una vez llenado se gira el cubre objeto hasta taparlo. No se debe haber burbujas.

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3. Determinar el Nº de campos a lo ancho de la celda (con objetivo de 10x y 40x).

Campos del microscopio

Nº de campo Nº de microorganismos
1 ….
2 …
… ….
∑Total de campos ∑ total de microorganismos

4. Determinar el Nº de microorganismo por campo (con objetivo de 10x y 40x).

Promedio:
Suma del Nº total de m.o
Suma del Nº total de campos

5. Determinación del Nº de campo (entrada de celda).

Nº de campos en = (Nº de campo a lo ancho) x (Nº de campo a lo largo celda)

toda la celda

6. Determinación de la concentración de microorganismo.

Concentración de m.o = promedio x Nº de campo entrada de celda

Volumen (ml)

MATERIALES

 Muestras de algas
 Celda Sedgmith-rafter
 Cubre objeto
 Microscopio óptico
 Pipeta

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CALCULOS Y RESULTADOS
DATOS 1 Objetivo: 10X (microscopio 33)

N° Campo N° m.o
1 39
2 30
3 35
4 37
5 36
6 34
7 33
8 27
9 25
10 24
11 28
12 30
13 32

TAB.1: RESULTADOS DEL PRIMER

METODO
1) Determinación del N° de campos y el N° microorganismos por campo.

Número de campos en cada lado: 13

Número de microorganismos: 399
𝑁° 𝑀. 𝑂. 399
𝑥̅ = = = 30.69
𝑁° 𝐶𝑎𝑚𝑝𝑜𝑠 13

2) Determinación del N° de campos en toda la celda SEDGWICK-RAFTER.

- Número de campos en el ancho (20 mm) de la celda: 13

50
- Número de campos en el largo (50 mm) de la celda: 13 𝑥 20
= 32.5
- Número de campos totales: (N° campos ancho) x (N° campos largo) = 422.5

3) Determinación de la concentración de microorganismos.

- Número total de microorganismos:

𝑁° 𝑚. 𝑜. = 𝑥̅ × 𝑁°𝐶𝑎𝑚𝑝𝑜𝑠
𝑁° 𝑚. 𝑜. = 30.69 × 422.5 = 𝟏𝟐𝟗𝟔𝟔. 𝟓𝟐𝟓

- Concentración de m.o.:
𝑁° 𝑚. 𝑜. 𝟏𝟐𝟗𝟔𝟔. 𝟓𝟐𝟓
𝐶𝑜𝑛𝑐. = = = 𝟏𝟐𝟗𝟔𝟔. 𝟓𝟐𝟓 𝒎. 𝒐.
𝑉𝑜𝑙𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎 1

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DATOS 2 Objetivo: 10X (microscopio 33)

N° Campo N° m.o
1 20
2 23
3 15
4 28
5 15
6 20
7 21
8 30
9 25
10 22
11 14
12 30
13 23

TAB.2: RESULTADOS DEL SEGUNDO PROCEDIMIENTO

1) Determinación del N° de campos y el N° microorganismos por campo.

Número de campos en cada lado: 13

Número de microorganismos: 286

𝑁° 𝑀. 𝑂. 286
𝑥̅ = = = 𝟐𝟐
𝑁° 𝐶𝑎𝑚𝑝𝑜𝑠 13
2) Determinación del N° de campos en toda la celda SEDGWICK-RAFTER.

- Número de campos en el ancho (20 mm) de la celda: 13

50
- Número de campos en el largo (50 mm) de la celda: 13 𝑥 20
= 32.5
- Número de campos totales: (N° campos ancho) x (N° campos largo) = 422.5

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 3) Determinación de la concentración de microorganismos.

- Número total de microorganismos:

𝑁° 𝑚. 𝑜. = 𝑥̅ × 𝑁°𝐶𝑎𝑚𝑝𝑜𝑠
𝑁° 𝑚. 𝑜. = 22 × 422.5 = 9295

- Concentración de m.o.:
𝑁° 𝑚. 𝑜. 9295
𝐶𝑜𝑛𝑐. = = = 9295 𝒎. 𝒐./𝒎𝒍
𝑉𝑜𝑙𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎 1

Comparando Resultados, tenemos:

Objetivo 10X

Datos 1 Datos 2

N° de campos a lo ancho de LA CELDA 13 13

N° de campos a lo largo de la Celda 32.5 32.5

N° de campos en el total de la Celda 399 422.5

Promedio de M.O. por campo 30.69 22

Concentración de M.O./ml 12966.525 9295

TAB.3: COMPARACION DE RESULTADOS DE AMBOS PROCEDIMIENTOS

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4) Determinación del volumen de una gota en ml

78 gotas < > 5 ml

1 gota < > x ml

x.(78 gotas) = 5ml.(1gota)

x= 0.064 ml

22mm

22mm

En el volumen de una gota de la muestra es de 0.064 ml

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DISCUSIÓN DE RESULTADOS
 Se encontraron un numero igual de campos a lo largo de la celdas

 El numero de campos en la primera celda fue menor que en la segunda celda.

 La concentración de microorganismos de la primera celda es mucho mayor que en

el de la segunda celda

 Numero de campos total de las celdas fue mayor en el primer caso.

CONCLUSIONES

 Según los resultados obtenidos en el método de la celda Sedgwick-Rafter, podemos

decir que la muestra de agua analizada estaba muy concentrada.

 Determinar la concentración de microorganismo en una determinada muestra de

agua nos ayuda a realizar interpretaciones y análisis de los parámetros de calidad
del agua, así como para evitar o determinar fallas en los sistemas de abastecimiento
y tratamiento de aguas.

 Se puede concluir que mediante el método de la franja se obtiene una mayor

precisión (menor error) ya que el otro método si se demora mucho presenta
sedimentación lo que hace tener un mayor margen de error.

RECOMENDACIONES
 Al agregar el líquido a la celda o al colocar el cubreobjetos sobre la gota de agua
debe evitar que se formen burbujas de aire que distorsionan la adecuada
determinación de la concentración de microorganismos.
 El microscopio utilizado debe estar en buenas condiciones ya que se debe observar
nítidamente los microorganismos para poder contarlos.
 Antes de agregar la muestra es recomendable que se agite para homogenizar el
líquido y así obtener mejores resultados.
 Para calcular el número de campos se debe tener mucho cuidado con las tangentes
y el punto de cambio a otro campo.
 No demorar mucho para evitar la evaporación de la muestra por efecto de la luz
reflejada que incide sobre la celda.

 Utilizar el contador para realizar el experimento y evitar confusiones en los datos

obtenidos.

 Tener en cuenta la profundidad a la que se toma la muestra con la pipeta o el gotero

durante el proceso.

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OBSERVACIONES

 Dependiendo de la toma de la muestra se obtendrá resultados ya sea captada

cerca de la superficie, cerca de las paredes o en el fondo.

 Se debe agitar la muestra antes de captarla mediante los instrumentos para

que la concentración de microorganismos sea uniforme.

 En el caso del método de la franja no se debe tener un uso excesivo de la

lámpara porque esta genera calor y hace que la muestra se evapore.

 En el caso del método de la celda no se debe dejar burbujas en la misma

porque varía la concentración de los microorganismos en las diferentes zonas.

 En el método de la celda se debe agitar la muestra dentro de ella para tener

una concentración mas uniforme por todas las zonas de la celda.

BIBLIOGRAFIA
 Apuntes de procedimiento en laboratorio de medición de microorganismos –
calibración del micrómetro ocular Ing. Jorge Tello Cebreros.

 Hidrobiología sanitaria: Samuel Branco Murgel.

 Mervin C. Palmer - Editorial Interamericana años 1962 – páginas 8 y 9

 http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtual/Tesis/Basic/Marchand_P_E/discusi on.htm

 Hidrobiología aplicada a la ingeniería Sanitaria…..Samuel Murger Branco

 Mervin C. Palmer - Editorial Interamericana años 1962 – páginas 8 y 9

 http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtual/Tesis/Basic/Marchand_P_E/discusion.htm

 Técnicas de muestreo de Plancton y Perfiton-Técnicas para el recuento de plancton.

http://repositorio.ine.gob.mx/ae/ae_003156.pdf

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ANEXOS

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