Protocolo para dosagem de proteínas – MÉTODO BRADFORD

 Curva Padrão

Concentração Volume de
final de Albumina Volume de Volume
H20
albumina (Albumina 1 reagente final
(µ g/ml) mg/ml)
0 - 10 µ l 190 µ l 200 µ l
5 1µ l 9 µ l 190 µ l 200 µ l
10 2µ l 8 µ l 190 µ l 200 µ l
20 4µ l 6 µ l 190 µ l 200 µ l
40 8µ l 2 µ l 190 µ l 200 µ l
50 10 µ l - 190 µ l 200 µ l

 Preparação das amostras: colocar 10 µ l de amostra em 190 µ l de reagente (não precisa

diluir!).

 Dosagem: após aplicar as amostras e fazer a curva padrão esperar 5 minutos (no
máximo 40 minutos) e ler no leitor de placas com o comprimento de onda de 595 nm.

 Para preparar o reagente de Bradford

DAY 1 litro
Comassie blue G250 100 mg
Ac Ortofosfórico 100 ml
Etanol 50 ml

• Colocar os reagentes nesta ordem.

• Completar o volume com água destilada.
• Agitar até dissolver totalmente overnigh.
• Filtrar em papel de filtro no dia seguinte.
• Manter no escuro (embrulhar a garrafa com papel alumínio).