COMBINACIÓN DE PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO RÁPIDO Y ANÁLISIS DE MANCHAS DE SANGRE

SECA PARA PRUEBAS EN EL PUNTO DE ATENCIÓN DEL VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA

HUMANA, HEPATITIS B Y HEPATITIS C EN BURKINA FASO, ÁFRICA OCCIDENTAL

Resumen
Las personas a las que se les realizó una prueba de detección del virus de inmunodeficiencia
humana (VIH) mediante pruebas de diagnóstico rápido (TDR) en África siguen sin conocer su estado
para las infecciones por hepatitis B (VHB) y hepatitis C (VHC). Evaluamos una estrategia de
detección en dos pasos en Burkina Faso, utilizando tanto las pruebas de detección de VIH como
las pruebas de detección de manchas de sangre seca (DBS, por sus siglas en inglés) para confirmar
una prueba de detección de VIH y detectar infecciones de VHB y VHC. El asesoramiento sobre el
VIH y las pruebas en el punto de atención se realizaron en un centro voluntario de asesoramiento y
evaluación con el VHB, el estado del VHC y la confirmación del VIH utilizando muestras de DBS,
que se evaluaron en un laboratorio central. Las pruebas serológicas en plasma se utilizaron como
el ensayo estándar de referencia para controlar el rendimiento de los ensayos DBS. Diecinueve de
los 218 participantes incluidos en el estudio dieron positivo para el VIH usando TDR. Un ensayo
ELISA de VIH de cuarta generación e inmunotransferencia en DBS confirmó el estado de
VIH. Veinticuatro de los 25 participantes infectados con VHB resultaron positivos para el antígeno
de superficie de la hepatitis B (HBsAg) utilizando DBS. Una muestra con una concentración baja de
HBsAg en plasma no se detectó en DBS. Cinco participantes que dieron positivo para anticuerpos
contra el VHC se confirmaron positivos con un ensayo de inmunotransferencia usando muestras de
DBS. Los resultados de laboratorio se comunicaron en un plazo de 7 días a los participantes sin
pérdida de seguimiento de los participantes entre la primera y la segunda sesiones de
asesoramiento posteriores a la prueba. En conclusión, la recolección de DBS durante las pruebas
de VIH en el punto de atención permite la detección y confirmación de las infecciones por VHB, VHC
y VIH. El diagnóstico mediante DBS puede ayudar con la implementación de programas nacionales
para el VHB,

Introducción
El diagnóstico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en entornos con
recursos limitados se ha incrementado sustancialmente en los últimos años gracias a la
implementación de programas voluntarios de asesoramiento y pruebas [ 1 , 2], con especial
referencia al uso de pruebas en el punto de atención. Las infecciones por hepatitis B (VHB) y C
(VHC) comparten rutas comunes de transmisión con el VIH, pero debido a las instalaciones de
laboratorio poco desarrolladas y la inaccesibilidad geográfica, el diagnóstico de estas infecciones
sigue siendo problemático para muchas poblaciones del África subsahariana. En consecuencia, la
mayoría de los individuos desconocen su estado de VHB y VHC hasta que se manifiestan estados
avanzados de la enfermedad, como cirrosis hepática o carcinoma hepatocelular. En Burkina Faso,
las tasas de prevalencia de las infecciones por VIH, VHB y VHC se estiman en 1,0 a 1,5% [ 3 ], 12
a 18% y 2 a 7%, respectivamente [ 4 , 5 , 6 ].

En África, las pruebas de diagnóstico rápido (TDA) se usan en gran medida para las pruebas de
VIH. Estos tipos de pruebas ofrecen la oportunidad de detectar el VIH, brindar asesoramiento sobre
las implicaciones de la infección o su ausencia y comunicar los resultados de la detección durante
una sola visita. Los RDT se pueden realizar en la sangre capilar, lo que requiere menos
entrenamiento del personal, es menos invasivo e involucra volúmenes de sangre más pequeños
que la extracción de sangre venosa. Sin embargo, las estrategias de cribado basadas en el VIH
RDT tienen algunas limitaciones: (i) poca sensibilidad en las primeras etapas de la infección por VIH
[ 7 ], (ii) valores predictivos positivos subóptimos en países de baja incidencia [ 8]], (iii) doble
reactividad del VIH-1 y el VIH-2 en entornos como África Occidental donde el VIH-2 co-circula, y (iv)
la falta de detección de infecciones por VHB y VHC. La recolección de manchas de sangre seca
(DBS, por sus siglas en inglés) representa una alternativa prometedora para disminuir estas
limitaciones. La recolección de sangre capilar en una tarjeta de filtro se puede realizar con relativa
facilidad en paralelo con las pruebas rápidas de VIH, y se envía con un procesamiento adicional
mínimo, además de un almacenamiento óptimo, a un laboratorio central para realizar pruebas de
detección y confirmación adicionales. Varios estudios han demostrado el uso efectivo de DBS en el
diagnóstico y la vigilancia del VIH [ 9 , 10 , 11 , 12 , 13 ]. DBS ha sido evaluado en países
desarrollados para HBV [ 14] así como para la detección del VHC. Hemos demostrado previamente
que las muestras de DBS son útiles para la detección y confirmación de la infección por VHC [ 15 ].
En este estudio piloto, evaluamos una estrategia de detección basada en el muestreo de DBS en
paralelo con las pruebas de VIH en el punto de atención para confirmar los resultados positivos al
VIH RDT y para establecer el estado de VHB y VHC para las personas que asisten a un
asesoramiento y pruebas voluntarias en Bobo -Dioulasso, Burkina Faso.

Materiales y métodos
Estudio de población y recogida de muestras.
Esta encuesta transversal se llevó a cabo en Bobo-Dioulasso (la segunda ciudad más grande de
Burkina Faso) entre las personas que asistieron al "Centro de Accionamiento de Dépistage e
Información sobre el SIDA" (CADI). Durante las sesiones de asesoramiento previo a la prueba, se
ofrecieron pruebas de VHB y VHC a todos los clientes de CADI como una adición al examen de
detección de VIH. Los participantes que dieron su consentimiento informado por escrito fueron
inscritos y examinados para detectar las tres infecciones. La figura 1describe el procedimiento
operacional para la inscripción en el estudio y las pruebas. Para cada participante, se recogieron
simultáneamente plasma emparejado y DBS. Para la preparación de DBS, se manchó sangre
completa (5 puntos de 50 μL) en tarjetas de papel de filtro (Whatman 903 TM , tarjeta de ahorro de
proteínas; Whatman GmbH, Dassel, Alemania).
Figura 1
Procedimiento operacional para la inscripción y prueba del participante en el estudio. 1 El protocolo
del estudio determinó no inscribir a las personas que no dieron su consentimiento para una
investigación adicional para la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), el virus de
la hepatitis B (VHB) y el virus de la hepatitis C (VHC). Sin embargo, en este estudio piloto, todos los
participantes que asistieron al Centro de Acción del Instituto de Información y SIDA durante el período
del estudio han aceptado someterse a investigaciones adicionales.

Los resultados de las pruebas del punto de atención del VIH se dieron durante las sesiones de
asesoramiento posteriores a la prueba dentro de 1 h. Los participantes fueron invitados a regresar
al CADI una semana más tarde para obtener los resultados de las pruebas de VHB y VHC. Las
personas que dieron positivo por infección por VIH, VHC o VHB fueron derivadas a un centro
hospitalario dedicado a recibir atención y apoyo. Los ensayos de detección y confirmación
realizados en plasma se utilizaron como el estándar de referencia para establecer el estado
serológico del VIH, VHB y VHC obtenidos en DBS.

Detección del VIH en el centro de asesoramiento y pruebas voluntarias

La detección del VIH fue realizada por trabajadores de asesoramiento social en el CADI de acuerdo
con un procedimiento estándar recomendado por las Directrices Nacionales sobre pruebas de VIH
que utilizaron dos TDR en un algoritmo secuencial. Las muestras se analizaron utilizando un primer
RDT (Determine® HIV1 / 2; Inverness Medical, Chiba, Japón). Las muestras que se encontraron
reactivas con este primer RDT se evaluaron adicionalmente mediante un segundo ensayo
inmunocromatográfico como confirmación (SD Bioline® HIV1 / 2 3.0; Standard Diagnostics Inc,
Yongin-Si, Corea del Sur) y para discriminar entre VIH tipo 1, tipo 2 y Infecciones tipo 1 + 2.

Detección y confirmación de VIH en el laboratorio central.

La muestra de sangre seca y las muestras de plasma pareadas de cada participante se analizaron
en el Laboratorio de Virología del Centro Muraz en Bobo-Dioulasso utilizando el
Genscreen TM ULTRA HIV Ag-Ab (Bio-Rad, Marnes-La-Coquette, Francia), que es un cuarto
inmunoensayo de enzimas comerciales (EIA) para la detección simultánea del antígeno p24 del VIH
y los anticuerpos del VIH (VIH Ag / Abs). El límite inferior de detección para p24 Ag con este ensayo
es de 0,65 UI / ml en suero o plasma. Para la prueba de DBS, un disco perforado de 6 mm de
diámetro se eluyó durante la noche en 300 l de solución salina tamponada con fosfato (PBS) para
la prueba EIA del VIH. Los ensayos se realizaron e interpretaron de acuerdo con las instrucciones
del fabricante.

Las muestras positivas de ELISA para VIH se analizaron utilizando un inmunoensayo de línea (Inno-
Lia TMPuntuación VIH I / II; Innogenetics NV, Gent, Bélgica) en un sistema automatizado (Auto-
Lia TM , Innogenetics) para confirmar o no la presencia de anticuerpos contra el VIH y para
diferenciar entre las infecciones por VIH-1, VIH-2 y VIH-1/2. Para DBS en este ensayo confirmatorio,
se eluyó un disco perforado de 6 mm durante la noche en 150 μl de PBS.

Pruebas de HBV
Las muestras de sangre seca y muestras de plasma pareadas de cada participante se analizaron
en el Laboratorio Central utilizando el EIA ETI-MAK-4 HBsAg (DiaSorin SpA, Saluggia, Italia) para
la detección del antígeno de superficie del VHB (HBsAg) y el Monolisa TM Anti-HBc PLUS ( Bio-
Rad) para la detección de anticuerpos anti-VHB (anti-HBc Abs). Para la prueba de DBS, un disco
perforado de 6 mm de diámetro se eluyó durante la noche en 300 μL de PBS para cada prueba de
HBsAg y en 150 μL de PBS para pruebas de Abs anti-HBc.

Los ensayos se realizaron e interpretaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante con ligeras
modificaciones para las muestras de DBS. Para las pruebas de Abs anti-HBc en DBS, la microplaca
se saturó durante la noche con 200 µl de albúmina de suero bovino al 10% en cada pocillo de la
microplaca antes de realizar la prueba. Los valores de absorbancia de corte se calcularon de
acuerdo con la siguiente fórmula: (i) Valor de corte de DBS HBsAg = MAPC / 2 + 0.3 y (ii) Valor de
corte de DBS anti-HBc Abs = MANC / 3 + 2 SD; donde MAPC es la absorbancia media del control
positivo, MANC es la absorbancia media del control negativo y SD es la desviación estándar.
A partir de individuos positivos para HBsAg que exhiben una baja señal a una relación de corte
mediante la prueba ELISA (OD <3), la concentración de HBsAg en plasma se midió utilizando un
ensayo Architect HBsAg QT (Abbott, Chicago, IL).

Pruebas y confirmación de VHC

La muestra de sangre seca y muestras de plasma pareadas de cada participante se analizaron en
el Laboratorio central utilizando el ensayo ULTRA Ab-Ag Monolisa TM HCV (Bio-Rad), que es un
método comercial de EIA para detectar el antígeno del VHC y el Abs anti-VHC. Para la prueba de
DBS, un disco perforado de 6 mm de diámetro se eluyó durante la noche en 300 μL de conjugado
listo para usar 1 (proporcionado por el fabricante del kit Bio-Rad). Los ensayos se realizaron e
interpretaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Las muestras positivas para ELISA para VHC en plasma y DBS se evaluaron adicionalmente
mediante el ensayo Inno-Lia TM HCV Score (Innogenetics). Para DBS en este ensayo confirmatorio
de VHC, se eluyó un disco perforado de 6 mm durante la noche en 150 µl de PBS.

Para confirmar la infección por VHC, todas las muestras de plasma positivo del primer ELISA
también se analizaron utilizando otro EIA de VHC (ensayo COBAS® Anti-VHC; Roche Diagnostics
GmbH, Mannheim, Alemania) y se remitieron para PCR (COBAS® AmpliPrep / COBAS® TaqMan
®, Prueba de VHC; Roche Diagnostics) cuando el ensayo de inmunotransferencia no fue
concluyente.

Análisis estadístico
Los análisis se realizaron en S tata / SE 11.0 (Statcorp, College Station, TX, EE. UU.). Las
estadísticas descriptivas se computaron como medias o proporciones. Las distribuciones de las
variables continuas se representaron para evaluar la normalidad y ajustarlas a las funciones
matemáticas adecuadas para obtener una distribución normal. Comparamos las densidades ópticas
medias (OD) de DBS versus plasma mediante la prueba de suma de rangos de Wilcoxon no
paramétrica.

Calculamos la sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo y el valor predictivo negativo

de DBS versus plasma para cada uno de los ensayos de laboratorio (HBsAg, anti-HBc, HCV y VIH)
como proporciones simples y obtuvimos sus correspondientes IC del 95%. El acuerdo entre los
resultados de DBS y el del plasma se evaluó utilizando un coeficiente kappa y se obtuvo su IC del
95%.

Resultados
Características de los participantes del estudio.
Desde el 21 de junio hasta el 1 de julio de 2011, un total de 218 personas consecutivas que
recibieron asesoramiento y aceptaron hacerse la prueba del VIH en el CADI, aceptaron participar
en el estudio. La edad media de los participantes del estudio fue de 29.8 ± 11.0 años. Las mujeres
representaron 62.8% con una proporción de sexos (M / F) de 0.6.

Las pruebas de VIH, VHB y VHC en plasma sirvieron como el estándar de referencia para establecer
el estado serológico de cada participante para las infecciones de VIH, VHB y VHC. De 218
muestras, 23 (10.6%) dieron positivo para el VIH usando el ELISA Ag-Ab de cuarta
generación. Cuatro muestras positivas para EIA (1,8%) dieron resultados indeterminados mediante
el ensayo de inmunotransferencia (con solo la presencia de una banda gp41) y se consideraron
negativos después de la evaluación de p24 Ag, VIH Abs (utilizando el ensayo Roche Cobas® HIV
Combi PT) y VIH-ARN PCR (datos no mostrados).

Veinticinco (11.5%) muestras de plasma fueron positivas para HBsAg y 140 (64.2%) fueron positivas
para Abs anti-HBc ( Tabla 1 ).
 TABLA 1Antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), anticuerpos contra el virus de la
hepatitis B (HBc), virus de la hepatitis C (VHC) y virus de inmunodeficiencia humana (VIH)
tasas de prevalencia y rendimiento de la Mancha de Sangre Seca (DBS) en comparación con
plasma para Detección de VHB, VHC y VIH entre pacientes que asisten a consultorios
voluntarios y pruebas en clínicas en Bobo-Dioulasso, Burkina Faso

Prevalenciaa Sensibilidad Especificidad PPV VAN Kappa

Marcador

IC IC IC IC
del del del del IC del Coef IC del
% 95% % 95% % 95% % 95% % 95% f 95%

HBsAg 11.5 7.7– 96.0 77.7– 100.0 97.6– 100.0 82.8– 99.5 96.7– 0.98 0.91–
16.4 99.8 100.0 100.0 100.0 1.00

Anti- 64.2 57.5 99.3 95.5– 98.7 92.1– 99.3 95.5– 98.7 92.1– 0.98 0.91–
HBc – 100.0 99.9 100.0 99.9 1.00
70.6

VHC 2.3 0.7– 100.0 46.3– 100.0 97.8– 100.0 46.3– 100.0 97.8– 1.00 0.93–
5.3 100.0 100.0 100.0 100.0 1.00

El VIH 8,7 5.3– 100.0 79.1– 100.0 97.6– 100.0 79.1– 100.0 97.6– 1.00 0.93–
13.3 100.0 100.0 100.0 100.0 1.00

VPP, valor predictivo positivo; VAN, valor predictivo negativo.

Se estimó una prevalencia utilizando los resultados de plasma.

Se encontraron siete muestras de plasma positivas para Abs anti-VHC. La inmunotransferencia

confirmó la detección de anticuerpos anti-VHC en plasma en cinco casos, pero fue negativa para
dos muestras de plasma que tenían una baja señal de detección de VHC con relación de corte (OD
0,800 y 0,972, respectivamente, en comparación con el valor de corte establecido en 0,439). Estas
dos muestras se consideraron como negativas para el VHC debido a que la detección de ARN del
VHC y un segundo EIA de Abs del VHC fueron negativos. Dos participantes fueron coinfectados por
el VIH y el VHB, y uno por el VHB y el VHC.

Prueba rápida de VIH

Diecinueve de los 218 participantes (8,7%) dieron positivo en la prueba de VIH utilizando la primera
prueba de detección (TDA) (Determine® VIH1 / 2) y se confirmó que todos estos resultados eran
positivos en la segunda prueba de la prueba (SD Bioline® VIH1 / 2 3.0). Uno de los participantes
VIH positivos fue positivo tanto para el VIH-1 como para el VIH-2 Abs utilizando el último RDT.

Uso de DBS para detección de VIH y confirmación de inmunotransferencia

Las pruebas de VIH en muestras de DBS utilizando Genscreen TM ULTRA HIV Ag-Ab y la
inmunotransferencia confirmaron todas las infecciones por VIH detectadas por RDT. Como se
ilustra en la Fig. 2a , se observó una clara diferencia en los resultados de ELISA entre muestras de
DBS VIH positivas y VIH negativas (media más SD de la OD 3.443 ± 0.430 y 0.131 ± 0.030,
respectivamente; p <0.0001).
Figura 2
Distribución de la densidad óptica (OD) de la mancha de sangre seca (OD) con estado de virus de
inmunodeficiencia humana (VIH) (a), estado de virus de la hepatitis C (VHC) (b), estado de antígeno de
superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg) (c) y anti- estado del núcleo del virus de la hepatitis B
(HBc) (d). El VIH, el VHC, el HBsAg y el estado anti-HBc se determinaron mediante la realización de
inmunoensayos enzimáticos y pruebas de confirmación en plasma. Para cada casilla, la línea media
del rectángulo representa la mediana de DBS OD, la línea inferior del rectángulo indica el percentil 25
(p25) de DBS OD y la línea superior del rectángulo indica el percentil 75 (p75) de DBS OD. El umbral
de cada ensayo está representado por la línea de puntos. Los valores de umbral se establecieron
según lo recomendado por el fabricante para el VIH y el VHC (0.207 y 0.439,

Se obtuvieron bandas claramente visibles mediante inmunotransferencia de DBS ( Fig. 3a ) y fueron

similares a la inmunotransferencia de plasma en términos de intensidad y el número de bandas
visibles. La inmunotransferencia tanto en DBS como en plasma para el único resultado que resultó
ser doblemente positivo para VIH-1 y VIH-2 por VIH RDT (SD Bioline®), no se pudo confirmar
porque no se observó tinción en las bandas de VIH-2 (gp 105 y gp 36).
Fig. 3
Confirmación de anticuerpos contra el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) (a) y anticuerpos
contra el virus de la hepatitis C (VHC) (b) mediante inmunotransferencia recombinante en manchas de
sangre seca (DBS) y muestras de plasma. La puntuación INNO-LIA TM HIV I / II y INNO-LIA TMLa
puntuación del VHC se utilizó respectivamente para comparar la reactividad del anticuerpo contra el
VIH y las proteínas del VHC en plasma y DBS. Se muestran los resultados de cinco participantes
representativos para cada marcador. PLA, muestra de plasma; DBS, muestra de mancha de sangre
seca; VIH +, muestras positivas para la detección de anticuerpos anti-VIH mediante ELISA e
inmunotransferencia; VIHind, muestras positivas para detección de anticuerpos anti-VIH mediante
ELISA e indeterminadas por inmunotransferencia; VIH: muestras negativas para la detección de
anticuerpos anti-VIH mediante ELISA; VHC +, muestras positivas para detección de anticuerpos anti-
VHC mediante ELISA.

Detección y confirmación de VHC en DBS

Todas las muestras de plasma positivas para el VHC fueron positivas mediante pruebas de DBS
(cinco muestras, 2,3%) y todas las muestras con VHC negativas también se clasificaron con
precisión mediante la prueba de DBS (213 muestras, 97,3%) ( Fig. 2b ). El estado positivo del VHC
por DBS se confirmó mediante inmunotransferencia y fue similar al plasma en términos de
intensidad y número de bandas visibles ( Fig. 3b ).

Detección de infección por VHB y estado anti-HBc en DBS

En comparación con el plasma, 24/218 (11.0%) muestras de DBS se clasificaron apropiadamente
como positivas para HBsAg y 193/218 (88.5%) como negativas. La relación señal a corte fue ≥3 en
la mayoría de los casos, excepto por tres muestras DBS ( Fig. 2c ). La cuantificación de HBsAg en
plasma indicó que estos tres participantes tenían concentraciones bajas de HBsAg (0,53, 2,58 y
2,86 log 10 UI / ml). Una muestra que resultó positiva para HBsAg en plasma fue negativa al usar
DBS (OD 0.268 en DBS versus 1.406 en plasma pareado); sin embargo, el nivel de HBsAg en
plasma fue especialmente bajo en esta muestra (0.59 log 10 UI / mL, datos no mostrados).
Para anti-HBc Abs, 139 (63.8%) DBS y muestras de plasma pareadas fueron positivas y 77 (35.2%)
fueron negativas. Se detectaron anti-HBc Abs en muestras de DBS para todos los participantes
positivos para HBsAg. Sin embargo, los décimos centiles de OD para muestras anti-HBc Ab
positivas y 90 centiles de OD para muestras anti-HBc Ab tienden a solaparse, lo que permite una
clasificación errónea del 9.2% (20/218) de muestras ( Fig. 2d ) . Un resultado falso negativo (0.5%)
(DBS OD = 0.072 versus 0.484 para plasma) y un resultado falso positivo (0.5%) (DBS OD = 0.652
versus 0.059 en plasma) fueron observados (datos no mostrados) cuando se compararon con valor
de corte anti-HBc Abs estimado en 0.075 en DBS.

Costo y rendimiento analítico de los ensayos DBS para pruebas de VHB, VHC y VIH
La sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo, el valor predictivo negativo y el
coeficiente kappa de los ensayos de DBS en comparación con los ensayos de plasma para la
detección de HBsAg, anti-HBc, HCV y VIH se resumen en la Tabla 1 . El costo de los consumibles
para las pruebas combinadas de VIH, VHC y VHB basadas en la extracción de sangre capilar en la
tarjeta de papel de filtro, incluidos los RDT del VIH, el análisis de VIH Ag-Ab, el análisis de HBsAg,
el análisis de anti-HBc Abs y el análisis de anti-HCV Ab fue estimado en Є12.00 (Є1.24 para la
lanceta y la tarjeta de papel de filtro, Є1.56 para otros consumibles, Є1 para los RDT de VIH, Є8.20
para reactivos de los cuatro ELISA con Є4.48 para reactivo ELISA de HCV) . El costo de las pruebas
de confirmación de VIH y VHC por inmunotransferencia se estimaron en Є30 cada una.

Pérdida en el seguimiento de los participantes entre la primera y la segunda sesiones de

asesoramiento posteriores a la prueba

Todos los 218 participantes incluidos en este estudio regresaron para el seguimiento en el CADI
para recibir resultados sobre su estado de infección de VHC y VHB, así como asesoramiento una
vez por semana después de la inscripción.

Discusión
Este estudio de campo realizado en África occidental demostró que las muestras de DBS se pueden
usar con éxito en una estrategia de dos pasos basada en algoritmos simples y ensayos comerciales
para confirmar las RDT del VIH y para completar la detección de infecciones por VHB y VHC.
La extracción de sangre en DBS se puede realizar con relativa facilidad en paralelo con las pruebas
rápidas de VIH usando un pinchazo en adultos y niños mayores o un pinchazo en el neonato y en
bebés. En este estudio, se usó DBS para confirmar los resultados de RDT del VIH utilizando ELISA
de cuarta generación e inmunotransferencia. El valor predictivo positivo de las TDR se ha estimado
recientemente en un 98,0% (96,4 a 99,1%) en entornos con una baja prevalencia del VIH [ 8 ]. Por
lo tanto, en países de baja incidencia como Burkina Faso, donde se estima que la prevalencia del
VIH está entre 1.0 y 1.5% [ 3 ], los resultados falsos positivos constituyen una proporción
significativa de los resultados positivos encontrados en las pruebas de detección del VIH. Estudios
previos realizados en mujeres embarazadas africanas que utilizaron TDAH por VIH informaron que>
1% de los resultados eran indeterminados [16 , 17 ]. La inyección de sangre venosa en tarjetas de
filtro DBS para realizar pruebas de confirmación puede ser especialmente interesante en estos
casos.

En los países donde prevalece la infección por VIH-2, las muestras positivas deben analizarse
mediante ensayos confirmatorios que pueden diferenciar el VIH-1 de los VIH-2 Abs [ 18]. En nuestro
estudio, un participante dio positivo en las pruebas de VIH-1 y VIH-2 por medio del ensayo SD
Bioline. Este resultado quedó sin confirmar por la inmunotransferencia, lo que sugiere una posible
reacción cruzada no específica con Abs anti-HIV-1 en la RDT. La inmunotransferencia mediante
ensayos como el ensayo Inno-Lia HIV-1 / HIV-2 también puede proporcionar información sobre
infecciones recientes (hasta tres bandas) o sobre enfermedades avanzadas (pérdida de p24 Ag). Al
comparar las bandas emparejadas obtenidas de DBS y plasma, los resultados mostraron una buena
concordancia. Esto apoya el uso de DBS en los laboratorios de referencia para el control de calidad
de los resultados del VIH obtenidos en las pruebas en el lugar de atención realizadas en centros
voluntarios de asesoramiento y pruebas, y para la discriminación entre las infecciones por VIH-1 y
VIH-2 antes del inicio de la terapia antirretroviral .19 ] también puede mejorar el diagnóstico de
infección primaria por VIH. La evidencia apoya el hecho de que la infección primaria por VIH en
realidad se pasa por alto con frecuencia durante la fase de seroconversión por parte de las RDT del
VIH [ 20 ] incluso cuando se usa una RDT combinada p24 / Abs [ 7 ]. La tasa de prevalencia del VIH
en nuestro estudio es similar a la observada en 2010 y 2011 en el CADI (8,5% y 6,5%,
respectivamente, datos personales). Sin embargo, no es representativo de la prevalencia estimada
a nivel nacional en Burkina Faso (alrededor del 1%) [ 3 ], lo que sugiere que los participantes que
se someten a asesoramiento y pruebas voluntarias tienden a tener un mayor riesgo de infección por
VIH.

Usando pruebas comerciales de EIA, nuestro estudio muestra que los ensayos en DBS pudieron
detectar con éxito el HBsAg en los participantes infectados por el VHB. Como se esperaba, el límite
inferior de detección de anticuerpos y antígenos es mayor usando DBS que en plasma [ 21 ] y en
este estudio se encontró que un individuo con baja concentración de HBsAg es negativo para
HBsAg en DBS pero positivo en plasma. Los datos sobre las concentraciones de HBsAg en
participantes con infección crónica por VHB demuestran que el nivel de HBsAg por debajo de 100
UI / ml es inusual [ 22 , 23 , 24 ], lo que sugiere que la DBS puede ser suficiente para la detección
de HBsAg en la gran mayoría de los casos.

En general, las DO de muestras de DBS de participantes reactivos para VIH, HCV Abs o HBsAg no
se superponen con las OD de muestras de DBS de individuos negativos. Por el contrario, la
detección de Abs anti-HBc fue menos obvia con la proporción más baja de OD anti-HBc Abs positivo
/ negativo. Villar et al. [ 21 ] informó recientemente una sensibilidad relativamente baja (90.5%) para
la detección de anticuerpos anti-HBc utilizando DBS. Esto puede explicarse parcialmente por el
desempeño intrínseco subóptimo de los inmunoensayos competitivos dirigidos a detectar Abs anti-
HBc [ 25]. Con respecto al tamaño de la población en nuestro estudio, el número total de muestras
positivas fue bajo para el VIH y el VHB y menos para el VHC, lo que puede afectar la precisión del
rendimiento de los análisis observado en nuestro estudio. Sin embargo, el buen desempeño
analítico de los ensayos de DBS obtenidos en nuestro estudio es similar a los reportados
previamente para la detección del VHC [ 15 ] y VHB [ 21 , 26 ] con DBS.

Las pruebas de detección de VIH, VHB y VHC con muestras de DBS pueden no ser necesariamente
menos costosas que la serología clásica, pero en los países en vías de desarrollo las pruebas de
DBS pueden ser mucho más factibles en comparación con la serología clásica que requiere la toma
de muestras de sangre venosa, que requiere apoyo infraestructural (energía eléctrica, centrífuga,
etc.), y requisitos de almacenamiento y transporte (cadena de refrigeración, caja de hielo, hielo
seco, consumo de espacio, etc.). Además del asesoramiento voluntario y los centros de pruebas,
nuestro algoritmo puede ser útil en clínicas prenatales al agregar la prueba de VHB y VHC a las
pruebas de ADN o ARN del VIH realizadas en recién nacidos, y particularmente útil para la prueba
de detección de HBsAg en mujeres embarazadas para optimizar la prevención de la madre a la
madre. Transmisión infantil a través de la vacunación temprana de neonatos.

Los costos asociados con la terapia antiviral para las infecciones crónicas por VHB y VHC, así como
la falta de instalaciones de laboratorio para el diagnóstico y la vigilancia son algunas de las
principales limitaciones para el tratamiento de la hepatitis viral crónica en entornos con recursos
limitados. Como consecuencia, el carcinoma hepatocelular es uno de los tres tumores más
comúnmente descritos en el África subsahariana [ 27 ].

Esta encuesta realizada en condiciones de campo de un entorno con recursos limitados demuestra
la viabilidad de evaluar y confirmar el estado del VHB, el VHC y el VIH mediante una estrategia de
dos pasos para combinar las pruebas RDT más la prueba DBS. Las pruebas virales en DBS
presentan un beneficio particular para muchos países en desarrollo en África subsahariana, como
Burkina Faso, donde las condiciones ambientales y logísticas no siempre son favorables para el
transporte y almacenamiento oportuno de muestras, como plasma o suero, que deben obtenerse
mediante Punción venosa. El DBS se puede recopilar en áreas rurales remotas, enviarse a
temperatura ambiente a un laboratorio central de referencia y los resultados pueden comunicarse
mediante mensajes de texto de teléfonos móviles como se informó recientemente [ 28 , 29]. El
diagnóstico de DBS también puede ayudar a evaluar la implementación de un programa nacional
para la detección y atención de VHB y VHC en países de ingresos medios y bajos.