EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS EN MATERIAL VEGETAL

OBJETIVOS
1- Extraer los constituyentes lipídicos de materiales de origen vegetal por una
técnica de química verde.
2- Separar y caracterizar por cromatografía de capa delgada (CCD) los diferentes
constituyentes lipídicos extraídos.
3- Realizar ensayos químicos generales para la caracterización de lípidos.
4- Preparar los ésteres metílicos de los respectivos ácidos grasos extraídos para
análisis por cromatografía de gases.

INTRODUCCIÓN

La determinación de ácidos grasos en aceites vegetales consiste en la extracción del aceite

de las semillas que se deseen analizar, por extracción con un solvente apolar y su posterior
análisis por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG/EM) o con
detector FID, es importante mencionar que previo al análisis por CG el extracto graso debe
ser esterificado, para poder identificar los ácidos grasos en su forma de metilésteres.

MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES
Equipo de extracción de ultrasonido REACTIVOS
Pipetas de 5 y 10 mL Material vegetal con alto contenido de
Tubos de ensayo grasa (10 g)
Gradilla Solución de Br2 al 2% en CCl4
Beaker de 50, 100 y 250 mL Acetona
Erlenmeyer de 125 mL n-Hexano
Cromatoplacas de sílica gel Acetato de etilo
Tubo de ensayo con tapa rosca Éter etílico
Vidrio reloj Revelador de vainillina en H2SO4/etanol
Embudo de tallo largo Solución de KOH 2 M en metanol
Papel de filtro Viales para cromatógrafo de gases

PROCEDIMIENTO

Extracción del aceite

Pesar 5 g de material vegetal previamente rallado o molido en un erlenmeyer de 125 mL y

agregar 50 mL de hexano. Llevar el erlenmeyer al equipo de extracción por ultrasonido y
extraer por 30 minutos. Filtrar el extracto obtenido y evaporar el solvente.

Pruebas químicas y análisis por CCD

Tomar una pequeña cantidad del extracto obtenido y redisolverlo en hexano, realizar prueba
de insaturación con Br2/CCl4 y pruebas de solubilidad en: agua, acetona, metanol,
cloroformo y éter.

Analizar los extractos lipídicos por cromatografía de capa delgada utilizando como eluente:
hexano/acetato de etilo (9:1) y revelar con luz UV y los reveladores disponibles.
Esterificación de los ácidos grasos

Pesar 500 mg de muestra en un tubo de vidrio con tapa rosca. Agregar 1 mL de hidróxido
de potasio en metanol 2 M y 10 mL de éter etílico. Agitar 2 min en vortex y dejar reposar 1
hora o hasta observar claramente la separación de fases. Transferir la capa superior a un
vial para cromatografía.

Análisis por cromatografía de gases

Las condiciones del equipo de cromatografía de gases para análisis de metilésteres son las
siguientes:

Volumen inyección: 1 μL
Temperatura puerto inyección: 225°C
Modo de inyección: split
Split ratio: 50
Columna RTX-OPPesticides 2 (RESTEK)
Temperatura horno columna: 100°C durante 4 min aumento a 3°C/min hasta 240°C durante
15 min
Tiempo total de corrida: 65,67 min
Detector: FID
Temperatura detector: 330°C

Identificación de metilesteres de C4 a C24.

Comparar los resultados obtenidos en los diferentes ensayos para las diferentes muestras
vegetales.