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Universidad del Mar Campus Puerto Escondido Licenciatura en Biología Cuantificación colorimétrica de concentraciones

Universidad del Mar

Campus Puerto Escondido

Licenciatura en Biología

Cuantificación colorimétrica de concentraciones (reporte de practica)

Presenta:

H. Iván García Pinacho.

Técnicas Instrumentales

Docente:

M. en C. Silvia Hortensia Arellano García

Puerto Escondido, San Pedro Mixtepec, Oaxaca. a de 20 de Agosto del 2017

Introducción

La colorimetría es utilizada para medir la longitud de onda y la intensidad de la radiación electromagnética en la región visible del espectro, es usada extensivamente para la identificación y la determinación de las concentraciones de sustancias y soluciones que absorben la luz, utilizando como base teórica la ley de LambertBeer, que relaciona la concentración de una molécula en disolución y la absorbancia (Christian, 2009), lo anterior se resume en la ecuación = , donde c se expresa en mol/L, b es la anchura de la celda que contiene la disolución de la sustancia expresada en cm, es la absortividad molar, propiedad característica de cada sustancia que se atribuye a la cantidad de radiación que absorbe a una longitud de onda determinada por unidad de concentración, teniendo entonces como unidades L mol -1 cm -1 . A partir de la ecuación mencionada, podemos calcular la concentración de una disolución cuya absorbancia es conocida, otro método es generar una recta de calibración en la cual por medio de concentraciones y absorbancias conocidas de la misma disolución a diferentes concentraciones se puede interpolar o extrapolar la concentración de muestras problema (Mathews & Van Holde,

1998).

Durante la práctica, se determinó la concentración de cobre presente en muestras problema, por medio de una recta de calibrado utilizando la técnica de colorimetría, formando el complejo con amoniaco es decir, Cu(NH3) 2+ 4 . Es importante mencionar que la absorbancia máxima de dicho complejo, mezclando 5mL de amoniaco con 8.5mL de Solución de CuSO 4 0.1M se encuentra entre los 550 y 650nm, como se muestra en la gráfica 1.

entre los 550 y 650nm, como se muestra en la gráfica 1. Objetivos 2+ . Grafica

Objetivos

2+ .

Grafica 1. Espectro de absorbancia del complejo (3) 4

Determinar la concentración de muestras problema utilizando la técnica de colorimetría.

Comprender la utilidad de la técnica de colorimetría.

Material y reactivos

Material

Reactivos

Un vaso de precipitados de

 

50mL

8 vasos de precipitados de

100mL

9 matraces volumétricos de

50mL

10 celdas para espectrofotómetro

Una pipeta graduada de 5mL

Una pipeta graduada de 10mL

50 mL de Solución de CuSO 4

0.1M*

*Existente (CuSO 4 1M)

Amoniaco

Perilla

Charola para pesar

Balanza analítica

Espectrofotómetro

8 pipetas Pasteur

Método

1. La disolución patrón de CuSO 4 es requerida con una concentración de 0.1M, el reactivo disponible poseía una concentración 1M, por lo cual se requirió hacer una disolución con las características requeridas. Tomando en cuenta que el peso molar del CuSO 4 es 249.68g, lo cual equivale a una concentración de 1M es decir 249.68 g/L se puede establecer despejando M f de la ecuación: V i x M i = V f x M f , que 0.1M equivale a 24.96 g/L. Para 50 mL de solución, utilizando el mismo razonamiento, usamos una regla de tres teniendo como resultado que se necesitan, 1.24gr de reactivo para preparar la solución 0.1M de CuSO 4. Conociendo esta cantidad, el reactivo es pesado en balanza analítica y posteriormente se mezcla hasta aforar con agua destilada.

2. A partir de la disolución patrón se preparan diluciones del complejo Cu(NH3) 2+ 4 . Se mezclan 5 mL de amoniaco con 1.0, 2.5, 3.5, 5.0, 6.0, 7.5, 8.5 y 10 mL respectivamente de la disolución de CuSO 4 0.1M, enrazando en un matraz aforado de 50mL con agua destilada, posteriormente se depositan en un vaso de precipitados rotulado previamente.

3. La solución blanco se prepara agregando en un matraz aforado de 50mL, 5mL de amoniaco y se enraza con agua destilada, posteriormente se calibra el colorímetro.

4. Para medir la absorbancia, con ayuda de una pipeta Pasteur se llena una celda para espectrofotómetro por cada disolución, la longitud de onda elegida es de 605nm.

Resultados

La absorbancia y concentración de las ocho disoluciones preparadas (Tabla 1) se utilizan para generar una curva patrón (Grafica 1), la cual se utiliza como referencia para determinar la concentración de las muestras problemas.

La concentración de las soluciones es desconocida inicialmente, pero se conoce la concentración de la solución patrón (0.1 M), al igual que el volumen utilizado de solución patrón en cada una de las disoluciones, teniendo en cuenta esto, utilizamos la ecuación: V i x M i = V f x M f , en donde despejaremos M f , obteniendo de esta manera las concentraciones.

Disolución

V amoniaco

V CuSO 4

2+

Cu(NH3) 4

Absorbancia

(mL)

(mL)

(M)

medida

Patrón 1

5

1

0.002

0.103

Patrón 2

5

2.5

0.005

0.354

Patrón 3

5

3.5

0.007

0.473

Patrón 4

5

5

0.01

0.488

Patrón 5

5

6

0.012

0.525

Patrón 6

5

7.5

0.015

0.651

Patrón 7

5

8.5

0.017

0.710

Patrón 8

5

10

0.2

0.766

Problema 1

5

-

 

? 0.313

Problema 2

5

-

 

? 0.403

Tabla 1. Datos obtenidos de absorbancia y concentración de las soluciones

0.9 0.8 0.7 0.766 0.71 0.6 0.651 0.5 0.525 0.488 0.4 0.473 0.3 0.354 0.2
0.9
0.8
0.7
0.766
0.71
0.6
0.651
0.5
0.525
0.488
0.4
0.473
0.3
0.354
0.2
0.1
y =
33.03x + 0.1454
R² = 0.921
0.103
0
0
0.005
0.01
0.015
0.02
0.025
Absorbancia (UA)

Concentracion (M)

Grafica 1. Recta de calibración con los datos obtenidos

A partir de la recta de calibración se interpola la concentración de las muestras problema, tomando el valor de la absorbancia medida como referencia, lo cual se muestra en la grafica 2, la concentración de las muestras problema, son desglosadas en tabla 2.

0.9 0.8 0.7 0.766 0.71 0.6 0.651 0.473 0.5 0.525 0.488 0.4 0.403 problema 2
0.9
0.8
0.7
0.766
0.71
0.6
0.651
0.473
0.5
0.525
0.488
0.4
0.403
problema 2
0.3
0.354
y = 31.946x
+ 0.1639
0.2
0.313
problema 1
R² = 0.924
0.1
0.103
0
0
0.005
0.01
0.015
0.02
0.025
Absorbancia (UA)

Concentracion (M)

Grafica 2. Interpolación de concentraciones problema

0.004

0.0065

Disolución

V amoniaco

V CuSO 4

2+

Cu(NH3) 4

Absorbancia

(mL)

(mL)

(M)

medida

Problema 1

5

2

0.00436

0.313

Problema 2

5

3.25

0.00556

0.403

Tabla 2 concentración de soluciones problema

Discusión

A partir de los datos obtenidos por espectrofotómetro se genera la gráfica 1 en la cual se expresa la relación entre la concentración y absorbancia de las disoluciones patrón, esta sirve para interpolar los valores de concentración de las muestras problema (Tabla 2). Los datos de concentración de las muestras problema son coherentes con respecto a la absorbancia que presentan, según la regresión lineal los datos obtenidos presentan un R 2 = 0,924 lo cual indica una asociación lineal entre las variables y demuestra que son directamente proporcionales, esta relación sucede ya que las diluciones son del mismo soluto y las muestras son analizadas utilizando la misma longitud de onda. El volumen de CuSO 4 de las muestras problema es despejado a partir de la ecuación V i x M i = V f x M f , despejando V f , obteniéndose asi los valores reflejados en la tabla 2, que contiene los resultados finales.

Los resultados obtenidos son semejantes a los esperados, calculados a partir de la ley de Lambert- Beer. Utilizando la siguiente expresión = y a partir de una de los datos de una de las

disoluciones patrón se despeja el coeficiente de extinción molar es decir = , obteniendo que

= 70.8, entonces se puede calcular la concentracion de las disoluciones problema ya que en un

principio se conocían los datos de absorbancia, dicho de otra forma = , obteniendo entonces

para la muestra 1 una concentracion esperada de 0.00442 M y para la muestra 2 una concentracion de 0.0056, que son idénticos a la obtenida en la regresión lineal.

Conclusión

La concentración de las muestras problema es obtenida a partir de la curva de calibración, basada en la absorbancia y concentración de las disoluciones patrón. Es comprobada la ley de Lambert- Beer, con datos experimentales. La técnica y su utilidad queda comprendida al igual que sus múltiples usos.

Bibliografía

Christian, G. D., 2009. Capítulo 16, Métodos Espectroquímicos. En: Química Analítica. Mexico: McGraw-Hill Interamericana, pp. 457-521.

Mathews, C. K. & Van Holde, K. E., 1998. Bioquímica. segunda ed. Madrid: Mc-Graw Hill Interamericana de España, S. A. U