CINETICA ENZIMATICA

Andrés Pérez
Código: 6142361
Bioquímica Gr. 1

Curva de progreso

Tiempo Sustrato Producto Tangente

[A] [P]
0 100 0 -0,1236
5 90 10 10,1999
10 81 19 20,5234
15 72,9 27,1 30,8469
20 65,6 34,4 41,1704
25 59 41 51,4939
30 53,1 46,9 61,8174
35 47,8 52,2 72,1409
40 43 57 82,4644
45 38,7 61,3 92,7879
60 34,9 65,1 123,7584

CURVA DE PROGRESO
140

120 y = 2.0647x - 0.1236

100

80
[A] o [P]

60

40

20

0
0 10 20 30 40 50 60 70
-20
Tiempo (s)
 I. Determinación de parámetros cinéticos mediante diferentes modelos

[A] V0 1/[A] 1/Vo [A]/Vo Vo/[A]

0 0 0 0 0 0
10,0000 28,6000 0,1000 0,0350 0,3497 2,8600
20,0000 44,4000 0,0500 0,0225 0,4505 2,2200
30,0000 54,5000 0,0333 0,0183 0,5505 1,8167
40,0000 61,5000 0,0250 0,0163 0,6504 1,5375
50,0000 66,7000 0,0200 0,0150 0,7496 1,3340
60,0000 70,6000 0,0167 0,0142 0,8499 1,1767
70,0000 73,7000 0,0143 0,0136 0,9498 1,0529
80,0000 76,2000 0,0125 0,0131 1,0499 0,9525
90,0000 78,3000 0,0111 0,0128 1,1494 0,8700
100,0000 80,0000 0,0100 0,0125 1,2500 0,8000

Modelo Michaelis-Mentel

Este modelo adopta la hipótesis de estado estacionario, según el cual la

concentración del complejo enzima-sustrato es pequeña y constante a lo largo de
la reacción, por lo tanto, la velocidad de formación del complejo es igual a la de su
disociación.

VMax 80
VMax/2 40
Km 17,215

100
MODELO HENRI (MICHAELIS)

80

60
Vo

40

20

0
0 20 40 60
[A] 80 100 120
Modelo Lineweaver-Burk

Se emplea como herramienta grafica para calcular los parámetros cinéticos de una
enzima, se emplea una linealizacion para determinar los diferentes parámetros.

𝟏 𝑲𝑴 𝟏 𝟏
= ∗ +
𝑽𝟎 𝑽𝑴𝒂𝒙 [𝑨] 𝑽𝑴𝒂𝒙

Al momento de hacer la linealizacion se emplean los términos de la ecuación de la

recta y=mx + b para obtener los diferentes parámetros Vmax y Km

Donde:
𝒌𝒎
𝒎=
𝑽𝒎𝒂𝒙 1 1
0.01 = = 𝑉𝑚𝑎𝑥 =
𝑣𝑚𝑎𝑥 0.01
𝑘𝑚 = 100
0.2498 =
𝑉𝑚𝑎𝑥
𝐾𝑚 = 0.2498 ∗ 100 = 24.98
𝟏
𝒃=
𝑽𝒎𝒂𝒙

Km 24,98
Vmax 100

MODELO LINEWEAVER- BURK

0.0400
0.0350
0.0300
0.0250
0.0200
0.0150 y = 0,2498x + 0,01
0.0100 R² = 1
0.0050
0.0000
0.0000 0.0200 0.0400 0.0600 0.0800 0.1000 0.1200

Modelo de Hanes

En este modelo las constantes se determinan teniendo en cuenta la ecuación de la

recta.
 [𝑨] 𝟏 𝑲𝑴
= 𝑨+
𝑽𝒐 𝑽𝑴𝒂𝒙 𝑽𝑴𝒂𝒙

Al momento de hacer la linealizacion se emplean los términos de la ecuación de la

recta y=mx + b para obtener los diferentes parámetros Vmax y Km

Donde:

𝟏
𝒎=
𝑽𝑴𝒂𝒙
𝑲𝒎
𝒃=
1 𝑽𝒎𝒂𝒙
0,01 =
𝑉𝑀𝑎𝑥
𝐾𝑚 = 100 ∗ 0.2502 = 25.02
1
𝑉𝑚𝑎𝑥 = = 100
0.01

Vmax 100
Km 25,02

SISTEMA HANES
1.4000

1.2000

1.0000

0.8000

0.6000
y = 0.01x + 0.2502
0.4000

0.2000

0.0000
0.0000 20.0000 40.0000 60.0000 80.0000 100.0000 120.0000

Modelo de Hofstee

En este modelo las constantes se determinan teniendo en cuenta la ecuación de la

recta.
 𝑽𝒐
𝑽𝒐 = − 𝑲 𝑴 + 𝑽𝑴𝒂𝒙
[𝑨]

Al momento de hacer la linealizacion se emplean los términos de la ecuación de la

recta y=mx + b para obtener los diferentes parámetros Vmax y -Km

Donde:

𝒃 = 𝑽𝒎𝒂𝒙 𝒎 = −𝑲𝒎

100.01 = 𝑉𝑚𝑎𝑥 25.007 = 𝐾𝑚

SISTEMA HOFSTEE
90.0000
80.0000 y = -25.007x + 100.01
70.0000 R² = 1
60.0000
50.0000
40.0000
30.0000
20.0000
10.0000
0.0000
0.0000 0.5000 1.0000 1.5000 2.0000 2.5000 3.0000 3.5000

Vmax 100,01
Km 25,007

Modelo Eisenthal y Cornish-Bowden

En este modelo se estima Km y Vmax mediante la mediana de los estimativos.

-A Vo
0 0
-10 28,6
-20 44,4
-30 54,5
-40 61,5
-50 66,7
-60 70,6
-70 73,7
 -80 76,2
-90 78,3
-100 80
Vm 100
Ka 26

SISTEMA EISENTHAL Y CORNISH-BOWDEN

200
180
160
140
120
100
Vo

80
60
40
20
0
-110-100-90 -80 -70 -60 -50 -40 -30 -20 -10 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
-20
[A]

- Los resultados obtenidos mediante los diferentes modelos son

Modelo Km Vmax
Michaelis-Mentel 18 80
Lineweaver-Burk 24.98 100
Hanes 25.02 100
Hofstee 25.007 100.01
Eisenthal y Cornish- 26 100
Bowden
II. Inhibidores

[A] Vo
0 0
10 28,6
20 44,4
30 54,5
40 61,5
50 66,7
60 70,6
70 73,7
80 76,2
90 78,3
100 80

INHIBIDORES
140

120

100

80

60

40

20

0
-120 -100 -80 -60 -40 -20 0 20 40
-20

- Clase de inhibidor

[A] mM V0 V10 V20 V30

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
1,0 100,0 66,7 50,0 40,0
2,0 133,3 88,9 66,7 53,3
3,0 150,0 100,0 75,0 60,0
4,0 160,0 106,7 80,0 64,0
5,0 166,7 111,1 83,3 66,7
6,0 171,4 114,3 85,7 68,6
7,0 175,0 116,7 87,5 70,0
8,0 177,8 118,5 88,9 71,1
9,0 180,0 120,0 90,0 72,0
 10,0 181,8 121,2 90,9 72,7

1 / [A] 1/V0 1/V10 1/V20 1/V30

0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000
1,00000 0,01000 0,01499 0,02000 0,02500
0,50000 0,00750 0,01125 0,01499 0,01876
0,33333 0,00667 0,01000 0,01333 0,01667
0,25000 0,00625 0,00937 0,01250 0,01563
0,20000 0,00600 0,00900 0,01200 0,01499
0,16667 0,00583 0,00875 0,01167 0,01458
0,14286 0,00571 0,00857 0,01143 0,01429
0,12500 0,00562 0,00844 0,01125 0,01406
0,11111 0,00556 0,00833 0,01111 0,01389
0,10000 0,00550 0,00825 0,01100 0,01376

CLASE INHIBIDOR
0.03000

0.02500
y = 0.0125x + 0.0125

0.02000
y = 0.01x + 0.01

0.01500
y = 0.0075x + 0.0075

0.01000
y = 0.005x + 0.005

0.00500

0.00000
-1.00000 -0.50000 0.00000 0.50000 1.00000 1.50000

- Kii y Kis

Pendiente Intersección
[I]
(m) (b)
0 0,005 0,005
10 0,0075 0,0075
20 0,01 0,01
30 0,0125 0,0125
 KII
0.014

y = 0.0003x + 0.005
0.012

0.01

0.008

0.006

0.004

0.002

0
-30 -20 -10 0 10 20 30 40

KIS
0.014
y = 0.0003x + 0.005
0.012

0.01

0.008

0.006

0.004

0.002

0
-30 -20 -10 0 10 20 30 40