Verena Mariana Melanson Kurtzahn

Laboratorio de Microbiología y Parasitología

 Uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismos  observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.

 El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el

Medio de Cultivo.

 El crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.

 La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes

complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del
cuerpo humano.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones:

 Temperatura

 Grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas

 Grado correcto de acidez o alcalinidad

 Nutrientes

 Factores de crecimiento necesarios

 Debe estar exento de todo microorganismo contaminante

 Agar  elemento solidificante empleado para la preparación
de medios de cultivo.

 Hay numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos

de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc.

 Carbohidratos se adicionan para incrementar valor nutritivo del

medio y para detectar reacciones de fermentación que ayuden
a identificarlos.

 El suero y la sangre se añaden para promover el crecimiento.

 Se añaden colorantes que actúan como indicadores para

detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como
inhibidores del crecimiento de algunas bacterias.
1) CARBONO

 Microorganismos se dividen en 2 grupos:

Autótrofos  pueden usar el CO2 como única fuente de carbono y sintetizar a partir
de éste los esqueletos de carbono para sus metabolitos orgánicos

Heterótrofos  Usan como fuente de carbono a los compuestos orgánicos  Glucosa

2) NITRÓGENO

 Constituyente importante de proteínas, ácidos nucleicos y otros compuestos.

 Necesitan una fuente de nitrógeno en el medio de cultivo.

2) OXÍGENO

 Aerobias obligadas o estrictas  necesitan del O2 forzosamente (Pseudomonas)

 Anaerobias obligadas  crecen SÓLO en ausencia de oxígeno ya que es tóxico para

ellas (Clostridium)

 Anaerobias facultativas  Capaces de crecer en condiciones aerobias y anaerobias

(Enterobacterias)

 Microaerófilas  crecen mejor en condiciones de baja tensión de O2 (Helicobacter)

3) TEMPERATURA

 Criófilas  Crecen a 10°C

 Mesófilas  Crecen de 37-40°C

 Termófilas  Crecen a 55°C

 Estado físico  líquidos (caldos) y sólidos (con agar)

 Medios Nutritivos: favorecen el crecimiento de la mayoría de microorganismos

 Medios enriquecidos: además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de
factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes  adición de
sangre, suero, leche, huevo, bilis.  Agar sangre

 Medios selectivos: favorecen el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población

polimicrobiana. Fundamento  facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población
microbiana específica.  Agar Salmonella Shigella (SS)

 Medios inhibidores: sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el

crecimiento de una población microbiana. Son variantes más restrictivas de los medios
selectivos.  Agar MacConkey
 Medios diferenciales: ponen en evidencia características bioquímicas que ayuden a
diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato
metabolizable se utiliza para este fin.  MacConkey permite distinguir los gérmenes que
fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen.

 Medios de identificación: comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para
reconocer la identidad de un microorganismo  elementos necesarios para asegurar el
crecimiento de microorganismos, sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el
indicador que nos muestre el resultado.  agar Kligler, el medio de Simmons.

 Medios de transporte: para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse

inmediatamente  introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del
medio (generalmente en un tubo)  medios de Stuart, Amies, Cary-Blair.
 Medio enriquecido
 Para la investigación de los diversos tipos de hemólisis (α, ß o gamma)
 Se utiliza para el crecimiento de estreptococos
 Agar chocolate: se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base.
Por esta razón contiene hemoglobina  aporta al medio un importante elemento para el
crecimiento: el factor X o hemina termoestable.
 Agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias y
Haemophilus.
 Thayer-Martin: utilizado para el aislamiento del gonococo  agar chocolate enriquecido
+ tres antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora
acompañante
 Aislamiento e identificación de enterobacterias.

 Medio inhibidor de Gram-positivos por su contenido

en cristal violeta.

 Selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares.

 Lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio

diferencial.

 Gérmenes que fermenten lactosa producen una acidificación del medio que hacen
aparecer de color rosa fuerte a las colonias resultantes.

 Las colonias lactosa negativas serán incoloras, apareciendo del mismo color que el
medio subyacente (naranja).
 Cistina Lactosa Electrólito Deficiente

 Para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías

urinarias.

 Bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos por Proteus.

 Lactosa  medio diferencial

 Interpretación  incorporación de otro indicador: el azul de bromotimol  colonias

lactosa positivas aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un
color verdoso, blanco o azulado.
 Aislamiento de Salmonella y Shigella

 Medio de cultivo selectivo y diferencial.

 Selectividad  sales biliares y verde brillante  inhiben desarrollo de bacterias Gram

positivas, de la mayoría de los coliformes y de Proteus.

 Diferencial  fermentación de lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del

tiosulfato de sodio.

 Microorganismos fermentadores de lactosa  acidifican el medio haciendo virar al rojo el

indicador de pH  colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.

 Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien

en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.

 La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a
la formación de sulfuro de hierro.
 Utilizado para realizar pruebas de

susceptibilidad antimicrobiana en
microorganismos aeróbicos por el método de
Bauer-Kirby.

 Susceptibilidad a antibióticos  utilizando un

solo disco impregnado con una alta

concentración de un antimicrobiano  ver si
crecen bacterias o no  Se mide halo
 Contiene una alta concentración (~7.5-10%) de sal

 Selectivo para Estafilococos debido a que el nivel de NaCl es inhibitorio para la

mayoría de las bacterias.
 Contiene manitol y un indicador de pH: rojo de fenol.

 Estafilococos coagulasa-positivos  colonias amarillas con zonas amarillas,

 Estafilococos coagulasa-negativos  colonias rojas o ligeramente rosadas sin

cambio alguno al medio.
 Si un organismo es capaz de fermentar el manitol, un subproducto ácido es creado
que hace que el rojo de fenol cambie a amarillo.
 Staphylococcus aureus (dorado)
 Aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos Gram
negativos
 Medio selectivo y diferencial
 Uso de la eosina y del azul de metileno permite la
diferenciación de las colonias fermentadoras de lactosa
de las no fermentadoras.
 La sacarosa está incluida en el medio para detectar a los
miembros del grupo coliforme que fermentan más
rápidamente la sacarosa que la lactosa.
 E. coli  brillo verde metálico por la rápida fermentación
de la lactosa
 Aislamiento, cultivo y diferenciación de micobacterias.

 Nutrientes de este medio basal, más los aportados por el

agregado de la mezcla de huevos  rico soporte para el
crecimiento de una gran variedad de micobacterias.
 Verde de malaquita inhibe a gran parte de la flora
acompañante.
 Con el agregado de glicerina se estimula el crecimiento
de Mycobacterium tuberculosis
 Medio selectivo para el aislamiento de Salmonella.

 Lactosa y sacarosa son los carbohidratos fermentables.

 Rojo de fenol  indicador de pH que cambia al amarillo verdoso cuando hay

producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares
 Amarillo a pH 6.8 y rojo a pH 8.4.

 Cuando NO se fermentan  color del medio cambia a fucsia

 Verde brillante  actúa como agente selectivo inhibidor del desarrollo de bacterias
grampositivas.
 Técnica de coloración de contraste o diferencial.
 Con base en la reacción de su pared celular a los colorantes:
 Gram-positivas  Violeta  Pared celular con capa gruesa de peptidoglucanos
 Gram-negativas  Rosa/Rojo  Capa MUY delgada + membrana externa (lipoproteínas)
 Morfología: cocos, bacilos, espirilos

1) Cristal Violeta  Tiñe

2) Lugol  Fija
3) Alcohol-Acetona  Decolora (gramnegativas)
4) Safranina  Tiñe de rojo (gramnegativas)  Colorante de contraste
1) Fijar la preparación con calor
2) Cubrir frotis con cristal violeta 1 minuto
3) Escurrir colorante y lavar con agua de la llave, eliminar exceso de agua
4) Cubrir con lugol 1 minuto
5) Escurrir lugol y lavar con agua de la llave, eliminar exceso
6) Cubrir con alcohol-acetona hasta decolorar solo por SEGUNDOS
7) Escurrir o lavar con agua, eliminar exceso
8) Cubrir con Safranina por 30 segundos
9) Lavar con agua de la llave
10) Dejar secar al aire
11) Ver al microscopio