08-10.04.

2019
 "Dacă poți, ajută-mă!"
………
"Cred, Doamne, ajută necredinței mele!".
Genus Pseudomonas
 Ce este infectia nosocomiala?
• Infectia nosocomiala (IN): orice infectie
castigata de un pacient internat sau care
primeste ingrijiri in ambulator, cere devine
manifesta in timpul internarii (> 48 h) sau dupa
externare (ex. la cateva luni dupa insertia unei
proteze).
• Consecinte etice, economice etc.
• Presiunea mass-media
 Factori care favorizeaza infectia cu
Pseudomonas
• Surse de Pseudomonas din mediu (aer, suprafete, ape)
• Surse de Pseudomonas din spital (pacienti infectati,
purtatori, diferite echipamente contaminate)
• Investigatii exploratorii moderne si/sau tratamente care
afecteaza pielea si mucoasele (abord arterial, uretral,
cateterisme, intubatii, bronhoscopii etc.)
• Indivizi expusi la risc, receptivi, internati in spitale: nou
nascuti distrofici, pacienti imunospupresati (citostatice,
radioterapie, casexie, neoplasme, tuberculoza, SIDA,
arsi, politraumatisme, plagi etc.)
• Utilizarea neadecvata a antibioticelor – selectie de tulpini
rezistente; favorizarea autoinfectiei prin suprimarea florei
normale
 De ce apar IN?
1. Nu toate sunt culpa medicala
2. Particularitati ale bacteriilor
3. Receptivitatea gazdei
4. Utilizarea neadecvata a antibioticelor
5. Greseli in aplicarea protocoalelor
terapeutice si/sau a precautiilor
privind prevenirea infectiilor
nosocomiale
Ce microorganisme sunt de obicei
implicate?
• Gram negativi: Pseudomonas, Klebsiella,
Acinetobacter etc. – pana la 60%

• Gram pozitivi: Staphylococcus,

Enterococcus, Streptococcus etc.

• Fungi: Candida albicans etc.

 Tipuri de pacienti

• Cu internari frecvente in ultimele saptamani,

cu boli coexistente, imunosupresati, au
primit mai multe tratamente cu antibiotice;
internati la hematologie, ATI, servicii de
urologie…

Cai de intrare: -elucidate in 2/3 din cazuri:

• Translocare la pacientii aplastici (8%),
• Surse de infectie digestive (10%) ...
• Proteze intravasculare (33,6%)
• Urina (16%)
 Utilizarea antibioticelor
• Nerespectarea ordinii de administrare
a antibioticelor
• Terapie prea lunga
• Doze?
• Nerespectarea tendintelor rezistentei
la antibiotice (reiesite din datele
cumulative de laborator)
 Protocoale si/sau proceduri de
protectie gresite
• Manusi, haine speciale
• Igiena mainilor
 Pseudomonas?
• Una dintre speciile de bacterii Gram negative non-
fermentative (ref. glucoza), strict aerobe, larg raspandite
in natura, datorita cerintelor reduse de crestere; se
gaseste mai ales in ape
• 10% din oameni colonizati (colon);
 Unde se ascunde in spital?
• Prezent in aerosoli, colonizeaza
mediul/obiectele in spitale: flori, lichide,
suprafete etc.
• Ex.: apa, chiar dublu distilata, solutii
terapeutice: heparina, antiseptice si/sau solutii
antimicrobiene (clorhexidina, eozina, polimixina
B, sapun lichid).
• Diferite tipuri de echipamente: echipament
respirator, echipament de aspiratie, echipament
de dializa, endoscoape, termometre, bazine de
inot, cutii de plastic in care se face dezinfectie
de nivel inalt a dispozitivelor medicale fara
respectarea concentratiilor si timpului de actiune
 Pseudomonas aeruginosa
(Bacilul piocianic)

Istorie :
• Schroeter, 1872 – Bacteria “aeruginosum” =
oxid de fier
• Elaboreaza piocianina, un pigment;
–pios (greaca) = puroi,
–cianum = albastru (de fapt albastru ca marea,
albastru verzui);
Puroiul in infectii cu Pseudomonas este albastru-
verzui
 Microscopie
• Forma : bacili subtiri, drepti sau usor curbati,
• Dimensiuni: 0,5-0,8 μm / 1,5-3 μm
• Tinctorialitate: Gram negativi
• Dispozitie: izolati
perechi
lanturi scurte
• Culturi tinere: filamentosi
• Culturi imbatranite, medii selective: forme de involutie (forme
ondulate, bacili in forma de virgula, coci in lanturi scurte etc. )
• Aspecte particulare: nesporulati, necapsulati (variante capsulate in
infectii severe)
 Cultura
• Cresc foarte usor, cu foarte putine surse nutritive; folosesc
foarte multe substante ca substrat (inclusiv solutii de
alcool!!!);
• Cresc pe medii diferite, chiar nefavorabile (selective);

Colonii plate,
Pigmentare: verde, galben
Miros de tei sau Acaccia
Luciu metalic (acizi grasi
eliberati prin liza – fenomen
de interfata cu mediul)
 Pigmenti – difuzibili

• piocianina (albastru-verzui) specific pt. P. aeruginosa (nici o alta specie

nu o produce): solubila in cloroform, apa calda etc.

• pioverdina, fluoresceina (galben-verzuie). Produs de P. aeruginosa si

alte specii. Insolubila in cloroform; solubila in apa

• eritrine (piorubina), pigment rosu, solubila in apa, insolubila in cloroform;

uneori vizibila doar dupa extractia cu cloroform a piocianinei

• piomelanina (pigment negru), rara

• Pigmentii sunt sintetizati mai bine in anaerobioza; exista si tulpini

acromogene
 Cultura (cont.)
Agar sange : colonii gri, lucioase, luciu metalic;

hemoliza tip β (mai puternica la temperatura

camerei)

Agar Mac Conkey: colonii mici, lactoza negative, incolore

Bulion nutritiv sau apa peptonata (1%): turbiditate

uniforma, val la suprafata mediului, pigment gri
Tip respirator – strict aerob
anaerob doar prin reducerea
nitratilor

Oxidaza pozitivi
 Factori de virulenta
Structuri somatice:

• Capsula polizaharidica

• Pili, flageli,

• LPZ, lipidul A (activitate endotoxinica)

Produse extracelulare: enzime, toxine

• Enzime: neuraminidaza (aderenta la celule), proteaze alcaline,

elastaze, hemolizine (lecitinaza, fosfolipaza C)

• Toxine : exotoxina A; exotoxina E; endotoxine (LPZ); piocianina –

mediaza leziunile tisulare

Obs. Exotoxina A – specifica pentru P. aeruginosa, actioneaza ca

toxina difterica
 Implicarea in patologia umana
• Forme clinice diferite, in functie de virulenta microorganismului si de
raspunsul gazdei:

• Infectii ale pielii (plagi chirurgicale, arsi)

• Infectii de tract urinar: nosocomiale (catetere)
• Infectii al tractului respirator inferior: pneumonie de ventilatie (dupa
asistare respiratorie in timpul interventiei chirurgicale si/sau resuscitare in
ATI, cu transmitere prin intermediul circulatiei sanguine
• Infectii respiratorii cronice (fibroza chistica)
• Endocardite, meningite, otite, infectii oculare
• Septicemie (hemoculturile sunt rar pozitive, calea principala de
transmitere este cea limfatica)
 Imunitate/ Profilaxie
• Naturala: integritatea pielii/mucoaseloe; sistemul complement; celule
fagocitare
• Castigata:
– humorala (Ac antitoxici, Ac antibacterieni): Ig G anti „O”, anti-endotoxinice;
tip specifice
– celulara (limfocite T) Nu se mai produc
vaccinuri
- Vaccinuri piocianice monovalente – terapeutice
comerciale; se pot
- Vaccin piocianic polivalent – profilactic si terapeutic prepara
autovaccinuri
Ne-specifica:
• Curatirea si dezinfectia mediului spitalicesc
• Educarea periodica a personalului
• Evitarea contaminarii
• Antiseptice si dezinfectante – testarea sensibilitatii; utilizare corectă
• Controlul si monitorizarea purtatorilor
 Diagnostic de laborator
• Exclusiv bacteriologic
• etape:
• 1. Prelevare, Transport; pregatirea probelor
• 2. Microscopie: sputa, LCR, lichide de punctie,
aspirate traheale
• 3. Izolare
– Inoculare directa :
• Agar- sange
• Mac Conkey (lactozo-negativ)
• bulion/ apa peptonata 1% - cand se suspecteaza putine
microorganisme, in timpul tratamentului
• TTC (tripheniltetrazolium chloride 1% 24-48h,(inhiba
microorganismele asociate); apoi cetrimid agar (inhiba
Ps. aeruginosa )
 Diagnostic de laborator (cont.)
4. Identificare:
• Microscopie: bacili Gram negativi
• Cultura :
– Agar sange: β- haemolytic, S, R, luciu
metalic, miros aromatic
– Agar simplu sau Mueller –Hinton: piocianina
– Medii speciale pentru pigment:
• King A (sau King P): piocianina
• King B (sau King F): fluoresceina
– Apa peptonata 1% - val la suprafata, uneori
pigment
– TTC 1% - colonii rosu inchis
 Markeri microbiologici pentru
epidemiologie

• Analiza si trasabilitatea:
– Surselor
– Cailor de transmitere
Prin:
- Lizotipie
- Serotipie: 22 serogrupuri
- Tipizare moleculara: PFGE
Pseudomonas aeruginosa –
luciu metalic și hemoliză
Pseudomonas aeruginosa
producator de piocianina
pe geloza simpla
Pseudomonas fluorescens – Mediu King B medium in lumina normală (A)
și în UV (B)
 Pseudomonas aeruginosa pe
agar McConkey – lactoză negativ
 Pseudomonas aeruginosa
ne-fermentativ, oxidază pozitiv
 Rezistența la antibiotice
• Pseudomonas aeruginosa este frecvent rezistent
la multe dintre antibioticele utilizate curent.
• Deși unele tulpini ramân sensibile la gentamicină,
tobramicină, amikacin și colistin, există tulpini
emergente rezistente la toate antibioticele –
panrezistență (inclusiv la Colistin!)
• Au fost experimentate mai multe tipuri de vaccinuri
fracționate, dar nu există vaccinuri disponibile pe
scară largă
• Autovaccinuri se pot prepara în Institutul
Cantacuzino