Ácido Nucleicos (KB): Electroforesis:

Ácido Nucleicos en agarosa (Polisacárido), separar fragmentos de alto peso molecular.

Péptidos y proteínas (kDa): Electroforesis en gel de poliacrilamida (Acrimalida/Bisacrilamida)

Polimerización catalizada.

TEMED: Iniciador de la reacción de polimerización

CATALIZADOR: Persulfato de amonio

Electroforesis en gel de poliacrilamida: Gel resolutivo.

Secuenciamiento de ADN.

Líquido: Neurotóxico.

Sólido: No tóxico.

Las moléculas migran a campo eléctrico, de negativo a positivo:

Movilidad electroforética (µ) : masa (m) / carga (e-)

Proteínas a determinado tamaño, igual carga.

A.- Detergente iónico

Uso de detergentes iónicos, para igualar la carga de proteínas: Detergente iónico (SDS), carga
negativa presencia de grupos fosfato.

Puentes de disulfuro:

B.- Reducción:

B-Meraptoetanol

Ditiotreitol
SDS-PAGE

Mayor resolución y nitidez:

Sistemas:

Continuos: . Líneas gruesas

Discontinuos: Gel concentrador (Ph 6.8) + Gel separador (Ph 8.8). Líneas delgadas.

LAEMMLI (1970)

Gel de apilamiento (Stacking), 5% acrilamida

Gel de resolución (10-15%)

Agua destilada + mezcla (acrilamida (30%) + bisacrilamida (0.8%))

Buffer Tris 1M

BUFFER DE CORRIDA (Tampón de electroforesis):

Buffer TRIS (Ph 8.3)

SDS

Glicina (Pi 6.4) Ión retrasado