Preparación y tinción de

muestrasPreparació i tinció de
mostresPreparing and staining
samples
Posted on 8 mayo, 2013 por Adrián Contreras Garrido
Para poder observar un grupo de bacterias, normalmente se prepara una muestra en un
porta que será colocado en el microscopio. La preparación de la muestra empieza por la
fijación de la muestra al porta y termina con la coloración de los organismos.
Fijación: proceso por el cual se preservan y se fijan en una posición los microrganismos de la
forma más parecida posible a la de las células vivas. Este proceso es necesario para la posterior
tinción de la muestra. Fundamentalmente, existen dos tipos diferentes de fijación.
La fijación por calor se utiliza de forma rutinaria para observar procariotas. Normalmente una
película de células (un frotis) se calienta suavemente pasando el portaobjetos por una llama. La
fijación por calor preserva la morfología global pero no las ultraestructuras.
La fijación química se utiliza para proteger las subestructuras celulares finas y la morfología
de los microrganismos más grandes. Los fijadores químicos penetran en la célula y reaccionan
con los componentes celulares, normalmente se unen a proteínas y lípidos para inactivarlos,
insolubilizarlos e inmovilizarlos. Las mezclas comunes de fijadores contienen sustancias como
etanol, ácido acético, cloruro de mercurio, formaldehído y glutaraldehído.
En este video de YouTube una señora nos explica cómo hacer un frotis desde un cultivo en
tubo y, posteriormente, una fijación por calor
Colorantes y tinción simple: Los numerosos tipos de colorantes utilizados para teñir
microorganismos tienen dos características en común: contienen grupos cromóforos, grupos
con dobles enlaces conjugados que dan al colorante su color, y pueden unirse a las células por
medio de enlaces iónicos covalentes o hidrófobos. La mayoría de colorantes se utilizan para
teñir directamente el objeto de interés pero algunos colorantes como la tinta china y la nigrosina
se utilizan en tinciones negativas, en las que lo que se tiñe no es la célula si no el fondo, las
células aparecen como objetos brillantes en un fondo oscuro.
Los colorantes que se unen a las células por interacciones iónicas son los más utilizados. El pH
puede modificar la eficacia de tinción de estos colorantes ya que la naturaleza y cantidad de
cargas en los componentes celulares varía con el pH.
Pero… ¿Cómo se hace una tinción? En este video de YouTube nos lo explican bastante bien
aunque, como viene siendo habitual, en inglés:

Per poder observar un grup de bacteris, normalment es prepara una mostra en un porta que serà
col · locat al microscopi. La preparació de la mostra comença per la fixació de la mostra al
porta i acaba amb la coloració dels organismes.
Fixació.
Procés pel qual es preserven i es fixen en una posició els microorganismes de la manera més
semblant possible a la de les cèl · lules vives. Aquest procés és necessari per a la posterior
tinció de la mostra. Fonamentalment, hi ha dos tipus diferents de fixació: la fixació per calor y
la fixació química.
En aquet vídeo se nos explica cómo hacer un frotis desde un cultivo en tubo y, posteriormente,
una fijación por calor.
Colorants y tinció simple
Els nombrosos tipus de colorants utilitzats per tenyir microorganismes tenen dues
característiques en comú: contenen grups cromòfors, grups amb dobles enllaços conjugats que
donen al colorant el seu color, i poden unir-se a les cèl · lules per mitjà d’enllaços iònics
covalents o hidròfobs. La majoria de colorants s’utilitzen per tenyir directament l’objecte
d’interès però alguns colorants com la tinta xinesa i la nigrosina s’utilitzen en tincions
negatives, en les que el que es tenyeix no és la cèl · lula sino el fons, les cèl · lules apareixen
com objectes brillants en un fons fosc.
Els colorants que s’uneixen a les cèl · lules per interaccions iòniques són els més utilitzats. El
pH pot modificar l’eficàcia de tinció d’aquests colorants ja que la naturalesa i quantitat de
càrregues en els components cel · lulars varia amb el pH.
Però… Com es fa una tinció? En aquet video ens ho expliquen prou bé encara que, com és
habitual, en anglès
.
To observe a sample of microorganism, they usually prepare the sample in a slide, which will
be place in the microscopy. The preparation of the sample starts fixing it in the slide and ends
with the stain of the microorganism.
Fixation
In this process structures and cells will be preserved and fixed in a permanent position in the
closest shape to the living cell. This step is necessary to the stained of the sample. There are
two different types of fixation: Heat fixation and chemist fixation
This video shows how make a heat fixation and smear from a tube culture.
Biological Stains and simple staining
There are many different biological stains but they have two common characteristics: All
contain chromophore groups, this groups contains conjugated double bonds that give their
specific colour; and can join to the cells by ionic or hydrophobic bonds. Most of these dyes are
used to stain the microorganisms but some of they, like chinese dye and nigrosina are used on
negative stain, which involves stain the background not the microorganism. The cells appear
like bright objects in a dark background.
The dyes that link cells by ionic interactions are the most used. The efficiency of the dyes can
be modify by pH. That is because the number and type of the cellular charges can be also
modify by the pH.
But… ¿How we make a stain? In this video you can see and explanation of this method.