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Test Visual Rápido VIH

Aspectos Técnicos y de Laboratorio


Capacitación:
“Implementación Test Rápido VIH en APS”
Ministerio Octubre, 2018
de Salud

TM Mónica Díaz Aguilera


Laboratorio Clínico
Consultorio Miraflores
Gobierno de Chile
TÉCNICAS UTILIZADAS EN DIAGNÓSTICO DE VIH

PRUEBAS DE TAMIZAJE

• Proporcionan una identificación presuntiva.


• Deben ser altamente sensibles.
• Se utilizan a nivel primario.
• Generalmente son métodos indirectos. Inmunoensayos que detectan
anticuerpos anti-VIH (3era Gen) o anticuerpos anti-VIH + Antígeno VIH (4ta
Gen).
• Es importante que permita la detección de la infección producida por
distintos grupos de VIH-1 y VIH-2.
• Las muestras reactivas se deben confirmar siempre con un ensayo de
especificidad superior, para descartar falsos positivos.
TÉCNICAS UTILIZADAS EN DIAGNÓSTICO DE VIH

PRUEBAS CONFIRMATORIAS / SUPLEMENTARIAS

• Permiten confirmar si los resultados reactivos de las pruebas de tamizaje


corresponden a anticuerpos y/o antígenos específicos del VIH.
• Deben ser altamente específicas.
• Permiten descartar los falsos positivos de los tamizajes.
• Se utilizan a nivel de Laboratorio de Referencia (ISP).
• Se utilizan de acuerdo a algoritmo que incluye Métodos Indirectos
(imnunoensayos que detectan Ac o Ag/Ac VIH) y Directos (Ag p 24, ADN
proviral, ARN viral en plasma).
CONFIRMACIÓN DEL DIAGNÓSTICO DE VIH
Laboratorio Nacional de Referencia VIH/SIDA

Algoritmo de
Confirmación VIH

Combinación

Métodos Métodos
serológicos moleculares
(Ac, Ag, Ag/Ac) (NAT)

Aplicadas de acuerdo a una secuencia preestablecida dependiendo


de las reactividades obtenidas por cada muestra en los diferentes
ensayos.
Métodos de tamizaje VIH:
Potenciales causas de falsos positivos
• Presencia de autoanticuerpos: Multíparas, politransfundidos,
enfermedades reumatoideas, lupus eritematoso, fibrosis quística,
transplantados renales, presencia de autoanticuerpos anti-HLA-DR.
• Reacciones cruzadas: Infecciones por otros virus, vacunaciones previas,
pacientes con enfermedades hepáticas crónicas, fibrosis quística.
• Transferencia pasiva de anticuerpos: Hijos de madres VIH positivas.
• Problemas atribuibles a la calidad de la muestra: Contaminación
bacteriana, numerosos ciclos de congelación/descongelación, hemólisis,
suero lipídico o con fibrina, almacenamiento a temperatura suboptima.
• Problemas atribuibles a la calidad de los reactivos o equipos: Baja
especificidad, defectos de fabricación (atribuibles a fallas en control de
calidad de lotes específicos), errores en ajuste de parámetros de los equipos
durante la puesta en marcha.
• Errores humanos: Cambio de muestra, error en rotulación de tubos,
contaminación por arrastre durante el procesamiento, error en
interpretación de resultados o transcripción de datos.
Métodos de tamizaje VIH:
Potenciales causas de falsos negativos
• Periodo de ventana previo a la seroconversión: Considerar que en ensayos de
4º gen también se ha descrito un segundo periodo de ventana por disminución de
Ag p24 previo a la seroconversión. Respuesta inmune tardía por tratamiento
inmunosupresor, tratamiento antirretroviral en etapa primaria de la infección,
controladores elite, pacientes con coinfecciones con VIH más VHA, VHB, VHC,
HPV, Herpes y otros virus.
• Infecciones con variantes de VIH divergentes: Infecciones por cepas de VIH
que no presentan reacción cruzada con los antígenos de la prueba.
• Serorreversión: Por inmunosupresión profunda en etapa de SIDA terminal.
• Problemas atribuibles a la calidad de la muestra: Degradación por
almacenamiento a tº suboptima, ciclos de congelación/descongelación.
• Problemas atribuibles a la calidad de los reactivos o equipos: Baja
sensibilidad, defectos de fabricación (fallas en control de calidad de lotes), errores
en ajuste de parámetros durante la puesta en marcha, tº suboptima de transporte
o almacenamiento de reactivos, uso de reactivos vencidos.
• Errores humanos: Cambio de muestra, errores de rotulación de tubos, en
interpretación de resultados o transcripción de datos, errores técnicos en el
procesamiento.
Métodos de tamizaje
• Plataformas: Automatizadas, semiautomatizadas, manuales, pruebas
visuales/rápidas.
• Detección de la reactividad: Reacción enzimáticas, colorimétrica,
quimioluminiscencia, fluorescencia, etc
TÉCNICAS DE TAMIZAJE VIH
TEST VISUALES / RAPIDOS
CARACTERISTICAS TEST RÁPIDOS PARA VIH

• Pruebas sencillas.
• Las muestras se procesan individualmente.
• Su lectura es visual (no requiere instrumentos o equipos).
• La lectura es subjetiva (Fuente de error: el operador).
• Habitualmente se usa en:
– Situaciones de urgencia.
– Laboratorios que procesan bajo número de muestras.
– Para facilitar el acceso al diagnóstico en poblaciones menos
accesibles socialmente, personas que habitan zonas geográficamente
remotas, operativos o campañas de diagnóstico en poblaciones clave.
CARACTERISTICAS TEST RÁPIDOS PARA VIH

• Tipo de muestra utilizada: Suero, plasma o sangre. (ISP ha


verificado los test para matriz suero, plasma y sangre
completa).
• Detectan la presencia de anticuerpos Anti VIH-1 y/o Anti VIH-2.
• También permite detectar la presencia de Ag p24 del VIH-1 y/o
el grupo O de VIH-1.
• Los resultados se obtienen en general en menos de 40 min.
• Personal requiere de capacitación para la interpretación del
resultado (lectura subjetiva de las bandas).
• Pueden tener diferentes sistemas de revelado de la reacción
Ag-Ac (ej. Substrato coloreado/Oro coloidal)
• Temperatura de almacenamiento de reactivos amplia (2-30°C).
CARACTERISTICAS TEST RÁPIDOS PARA VIH

• Distintos formatos y distintos diseños según el flujo de la


muestra y/o reactivos en los dispositivos.

• Presentación del test: tiras, tarjetas, cassette o peine.

• Tipo de ensayos:
– Aglutinación
– Inmunoconcentración
– Inmunocromatografía
TIRA

PEINE

CASSETTE
CARACTERISTICAS TEST RÁPIDOS PARA VIH

• Cada dispositivo posee un control de la prueba que permite


verificar si:
– Se agregó un volumen de muestra apropiado.
– La hidratación y migración de los reactivos fue adecuada.
– La membrana tiene buena permeabilidad.

• Se visualiza con una línea rosa/purpura (generalmente) que


aparece en el área CONTROL.
Criterios de recomendación ISP:
- Sensibilidad: 100%
- Especificidad: ≥ 98%

• Aplica a:
– Bancos (servicios) de Sangre (Circular 4F/53, 1995 y
4F/552, 1996)
– Laboratorios Clínicos (Circular Nº20, 2014).
– Centros de APS u otros establecimientos que utilicen
Pruebas Visuales/Rápidas directamente en muestra de
sangre digital o venosa (Normativa en proceso).
Listado Ensayos visuales/rápidos para VIH verificados en sangre
por ISP
Fecha de Sensibilidad
Nombre de ensayo Técnica Fabricante
Verificación /Especificidad
ABON HIH 1/2/0 Tri- Inmunocromatografía ABON Biopharm Dic./2017 100%/100%
line
VIKIA HIV 1/2 Inmunocromatografía Biomerieux S.A. Dic./2017 100%/100%

HIV 1/2 STAT-PAK Inmunocromatografía Chembio Diagnostic Dic./2017 100%/99.24%


Systems. Inc.
UNI-GOLDTM HIV Inmunocromatografía Trinity Biotech PLC Julio/2018 100%/100%

GENIETM FAST HIV Inmunocromatografía Bio - Rad Julio/ 2018 100%/99.09%


1/2
RAPID RESPONSE, Inmunocromatografía BTNX Inc. Julio/ 2018 100%/100%
HIV Ag/Ab

ALERETMHIV COMBO Inmunocromatografía Alere Medical co. Julio /2018 100%/100%


Ltd.
Test Rápido: Rapid Response HIV Ag/Ab Test
RAPID RESPONSE
Característica
HIV Ag/Ab Test
Fabricante BTNX Inc. Canada
Tipo de Ensayo Inmunocromatografía
Presentación Cassette
Número de test por kit 40
Detecta VIH-1
VIH-2
Grupo O VIH-1
Antígeno p24
HIV-1
Antígeno VIH (gp120-41 y gp36)
recombinante
Anticuerpos Anti VIH-1 p24
monoclonales
Incluye controles NO
Muestra Suero, plasma o
sangre
INTERPRETACIÓN RESULTADOS
TEST RÁPIDO VIH
INTERPRETACIÓN RESULTADOS
TEST RÁPIDO VIH

No Reactivo:
Si solo aparece la línea control (C), el test indica que no hay
detección de anticuerpos anti HIV (Ab) y/o antígeno (Ag) en
la muestra

Reactivo:
Si en adición a la aparición de la línea (C), hay aparición de
la línea Ab y/o línea Ag, pues demuestra su presencia en la
muestra.

Invalido:
Si no hay aparición de la línea (C), el ensayo es invalido.
Independiente de la aparición o no de las líneas de test Ab
y/o Ag. (Repetir con un nuevo cassette e informar).
INTERPRETACIÓN RESULTADOS
TEST RÁPIDO VIH

No Reactivo Reactivo Invalido


Si el resultado del test rápido es reactiva o
dudosa, tomar muestra de sangre con
anticoagulante EDTA para enviar al ISP

• Se debe tomar una muestra venosa en un volumen de 6,0 ml con


anticoagulante EDTA rotulada con el código de identificación VIH.

• Una vez obtenida, la muestra de sangre debe ser enviada al ISP con
unidades refrigerantes, idealmente el mismo día, de manera de asegurar
su adecuada conservación durante el transporte y recepción en el ISP
dentro de las 48 horas desde la extracción.

• Enviar junto a Formulario de envío de muestras para Confirmación VIH


(página ISP y en SURVIH).
CONTROL DE CALIDAD DE
PRUEBAS VISUALES/RAPIDAS
GARANTIA DE CALIDAD DE PRUEBAS
RÁPIDAS DE VIH

Al igual que para metodologías instrumentales y pruebas


rápidas realizadas por laboratorios clínicos en matriz
suero/plasma, se debe…

1. Utilizar reactivos/dispositivos que cuenten con certificado


de la verificación de desempeño realizada por ISP en la matriz
a utilizar y que cumplan los criterios de recomendación
vigentes relacionadas con sensibilidad y especificidad.

Actualmente el Instituto de Salud Pública ha realizado estudio de verificación


en sangre de siete (7) ensayos de test visuales/rápido. Todos ellos,
recomendando para su uso.
Listado Ensayos visuales/rápidos para VIH verificados en sangre
por ISP
Fecha de Sensibilidad
Nombre de ensayo Técnica Fabricante
Verificación /Especificidad
ABON HIH 1/2/0 Tri- Inmunocromatografía ABON Biopharm Dic./2017 100%/100%
line
VIKIA HIV 1/2 Inmunocromatografía Biomerieux S.A. Dic./2017 100%/100%

HIV 1/2 STAT-PAK Inmunocromatografía Chembio Diagnostic Dic./2017 100%/99.24%


Systems. Inc.
UNI-GOLDTM HIV Inmunocromatografía Trinity Biotech PLC Julio/2018 100%/100%

GENIETM FAST HIV Inmunocromatografía Bio - Rad Julio/ 2018 100%/99.09%


1/2
RAPID RESPONSE, Inmunocromatografía BTNX Inc. Julio/ 2018 100%/100%
HIV Ag/Ab

ALERETMHIV COMBO Inmunocromatografía Alere Medical co. Julio /2018 100%/100%


Ltd.
Gobierno de Chile / Ministerio de Salud
GARANTIA DE CALIDAD DE PRUEBAS
RÁPIDAS DE VIH

2. Participar en el Programa de Evaluación Externo de Calidad


(PEEC).

El Control de Calidad Externo (CCE) permite comparar los resultados


obtenidos por los participantes que utilizan el mismo o diferente
método, para verificar si existe homogeneidad en los resultados al
analizar las mismas muestras (evalúa la exactitud analítica).

El PEEC ISP realiza anualmente 2 evaluaciones para el tamizaje de VIH,


en el que se evalúan diversos aspectos técnicos y administrativos de
servicios de Sangre y Laboratorios Clínicos, independiente del método
utilizado (aplica para ensayos instrumentales automatizados y ensayos
de lectura visual).

Todos los Laboratorios Supervisores de Centros de Atención Primaria


que realicen tamizaje de VIH deben participar en PEEC ISP para la
técnica de tamizaje VIH utilizada.
GARANTIA DE CALIDAD DE PRUEBAS
RÁPIDAS DE VIH

3. Utilizar controles de calidad internos (CCI) negativos y


positivos, independientes del fabricante para verificar el
desempeño del ensayo.

El CCI permite monitorear la imprecisión que genera el error aleatorio


en los procesos de medición, para garantizar la confiabilidad de los
resultados en términos de precisión, reproducibilidad y la
estandarización de las condiciones de medición.

Los controles de VIH se deben realizar para:


- Control de Calidad del Test Visual Rápido VIH.
- Autorización de lote.
- Control de Calidad Interno.
• Control de Calidad del Test Visual Rápido VIH

– Son todas las acciones que se realizan en el marco del Sistema de


Gestión de la Calidad en el Laboratorio Clínico, para asegurar que los
resultados entregados al usuario sean confiables.

– Objetivo: Asegurar que todos los pasos inherentes a la realización del


test sean realizados de forma correcta.

– Ejemplo:
• Establecer Protocolos de ejecución de la técnica.
• Planificación de supervisión y capacitación al personal que realiza
los procedimientos.
• Evaluación Externa e Interna (medidas preventivas y correctivas).
• Monitorización de No Conformidades.

Gobierno de Chile / Ministerio de Salud 27


• Autorización de Lote

– Lo realiza el laboratorio supervisor.


– Se realiza a cada lote y a cada partida recibida de un mismo lote.
– Permite la autorización para la distribución de las cajas a su red de
Centros de APS.
– Si el resultado es satisfactorio, se debe rotular todas las cajas con
una etiqueta de AUTORIZACIÓN DE LOTE.

• Control de Calidad Interno (CCI)

– Establecido por el o los laboratorios clínicos referente o supervisor.


– Permite asegurar a calidad de los test visual/rápido de VIH.
– Establecer e implementar el mecanismo de registros escritos de
resultados de CCI, fidedignos y trazables en el tiempo.
– Implica la utilización de:
• Control Interno Negativo
• Control Interno Positivo
GARANTIA DE CALIDAD DE PRUEBAS
RÁPIDAS DE VIH

4. Mantener registros de todas las etapas del proceso, para la


trazabilidad de las muestras y resultados de las pruebas.

El Centro de APS y el Laboratorio Supervisor deben mantener registro


de todas las etapas del proceso que les correspondan (desde la toma de
muestra a la entrega de resultados al paciente/consultante).

Deben permitir la trazabilidad de las muestras y resultados de las


pruebas.

El laboratorio clínico de referencia debe mantener registro pertinente al


proceso que desarrolla.
• Los registros necesarios, deben ser como mínimo:

– Registro de las personas testeadas y los resultados obtenidos del


test visual rápido VIH, así como la entrega de resultado, indicando
personal responsable en cada etapa del proceso.

– Registro en SURVIH y en la Ficha Clínica o en sistema local dispuesto


con este objetivo

– Registro del uso de test visual rápido (numero de lote, cantidad de


unidades incluidas en el lote, fecha de recepción, fecha de apertura
y de término de cada caja, fecha de vencimiento), así como también
de las condiciones de almacenamiento de éste (t°, humedad, etc)

– Registro del Control de Calidad Interno de los test y lote.

– Registro de los consentimientos informados.


– Registro o copia de los informes de resultados confirmados
positivos por el ISP, copia del informe y del registro de entrega de
resultado al paciente por un periodo de tiempo de acuerdo a
normativa (Decreto N°41 del año 2012).

– Registro del personal de salud capacitado.

– Registro de detección de No Conformidades y la aplicación de


acciones correctivas y/o preventivas descritas en los procedimientos
operativos estandarizados (POE).
Test Visual Rápido VIH
Aspectos Técnicos y de Laboratorio
Capacitación:
“Implementación Test Rápido VIH en APS”
Ministerio Octubre, 2018
de Salud

TM Mónica Díaz Aguilera


Laboratorio Clínico
Consultorio Miraflores
Gobierno de Chile

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