UNIVERSIDAD DE CUENCA

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

TECNOLOGÍA MÉDICA
CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO

ALUMNOS:
Nixon Hidalgo
Sofia Jiménez

PRACTICA 11:
Coloración Tricromica y de Hematoxilina Férrica

Materia
Técnicas Parasitológicas

CATEDRÁTICO:
Lic. Mauricio Baculima

Periodo
Segundo semestre 2019
INTRODUCCIÓN

En la parasitología es importante aplicar diferentes técnicas para la detección de

diferentes formas de parásitos, una de ellas es la coloración tricrómica y
hematoxilina férrica. Estas coloraciones nos sirven para visualizar especialmente
parásitos protozoos, es importante saber este tipo de técnicas ya que así
ampliamos nuestro conocimiento y también podríamos utilizarlas en nuestra vida
profesional para la visualización de este tipo de parásitos.
OBJETIVO GENERAL

 Describir las características principales de cada técnica para luego

aplicarla a la práctica con muestras de heces con parásitos protozoos.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Describir cuáles son las ventajas y desventajas de cada técnica para

relacionarla con la importancia y la utilidad de cada una de ellas.

 Investigar el fundamento y el procedimiento de las técnicas para el
desarrollo de la práctica.
TINCIÓNES TRICRÓMICAS
Las tinciones tricromicas, son tinciones especiales que se utilizan para poder
diferenciar entre fibras musculares y fibras de colágeno tipo I, para ello se utilizan
tres colorantes; dos citoplasmáticos y uno nuclear. Este método fue inventado
por Mallory en 1900 para colorear tejidos conectivos, su fórmula contenía; azul
de metileno, Orange G, ácido oxálico, fucsina acida y ácido fosfomolibdico, más
tarde en 1912 su método fue modificado por Masson reemplazando el ácido
fosfomolibdico por ácido fosfotungstico, elimina el ácido oxálico y utiliza azul de
anilina en vez de azul de metileno.

IMPORTANCIA Y UTILIDAD
Esta técnica es de fácil preparación y de larga duración, se utiliza para preparar
frotis de heces para la observación de estructuras morfológicas de quistes y
trofozoítos al producir contrastes muy marcados que facilitan su observación.
Este método es la modificación de Wheatley de la tinción tricromica de Gomori
que se utiliza para cortes histológicos.
Existen varios tipos de tinciones tricromicas entre las cuales tenemos:

 Tinción de Masson
 Tinción de Mallory
 Tinción de Gomori
 Tinción de Van Geison
 Orceína

La coloración de Gomori y Masson son las más utilizadas por la facilidad de

realización y la confiabilidad de sus resultados y la coloración de Van Gieson
como la más efectiva para la identificación de fibras de colágeno.

FUNDAMENTO DEL METODO

La tinción depende de varios factores:

Permeabilidad: Los elementos acidófilos como el colágeno tienen diferentes

grados de permeabilidad al paso del colorante que va a depender del grado de
dispersión de la disolución, la agregación iónica del colorante en la misma y el
tamaño de la molécula. Cada colorante genera un gradiente de penetración
diferente al interactuar con la estructura, siendo esta la responsable de las
diferentes coloraciones que puedan tomar. Los colorantes utilizados para las
tinciones tricromicas se clasifican en:
  Colorantes nucleares: Laca de hematoxilina férrica
 Colorantes citoplasmáticos: naranja G, ácido pícrico, ponceau de
xilidina naranja de metilo, escarlata Biebrich, azofloxina.
 Colorantes del tejido conectivo: Derivados del anillo trifenilmetano:
fucsina ácida, azul de anilina, verde luz SF.

Afinidad: Los aminoácidos que componen la cadena polipeptídica, contienen

grupos catiónicos presentes en sus estructuras por ejemplo el colágeno reticulina
las cuales van a tener afinidad por colorantes ácidos cargados negativamente.

PH del medio: El medio acido tiñe con más afinidad las fibras colágenas
específicamente en torno a 1.5 de la escala de pH.

Poder de mordiente: El uso de alcohol acidificado como agente decolorante

mejora los detalles morfológicos de las estructuras parasitarias, es decir va a
permitir diferenciar la unión especifica entre el colorante y la estructura, entre las
diferentes sustancias mordientes tenemos los siguientes: fosfotúngstico,
molíbdico, crómico, pícrico, sublimado de oro, sulfato de aluminio.
Se debe tener en cuenta el fijador utilizado en la muestra para el método de
Masson y Gomori se utiliza el fijador de bouin, para el de Mallory, dicromato y el
de Van Gieson cualquier fijador.

Para el diagnostico parasitario, los elementos que se encuentran en la

materia fecal se tiñen de la siguiente manera:

Verde (verde azulado): citoplasma de trofozoítos, citoplasma de leucocitos,

quistes, células tisulares, hongos y protozoarios decolorados en exceso.

Violeta (azulado o rojizo): Citoplasma de trofozoítos y en ocasiones quistes de

E. coli, glóbulos rojos y bacterias ingeridas dentro de los trofozoítos.

Rojo: Bacterias dentro de los trofoítos, glóbulos rojos, levaduras, hongos y en

ocasiones, núcleos de leucocitos y células tisulares, cromatina nuclear y cuerpos
cromatoidales de trofozoítos y quistes. Los quistes de E. coli se tiñen más
oscuros que los de E. histolytica y E. Dispar. Los huevos y larvas se tiñen de
color rojo.
PROCEDIMIENTOS
Técnica de coloración tricrómica
Reactivos necesarios:
Fijador: puede ser el de Schaudinn o PVA
PREPARACION

 En un frasco limpio añádase 10 ml de ácido acético glacial a 6g de cromo tropo

2R, 3g de verde claro SF y 7g de ácido fosfotungstico.
 Mézclese agitando y déjese reposar la mezcla durante 30 minutos.
 Añádase 1000ml de agua destilada y mézclese bien: el colorante debe
presentar un color violeta oscuro.
 Guárdese en un rasco con tapón de vidrio, el colorante se mantiene estable y
se usa sin diluir.

ALCOHOL ACIDIFICADO

 Ácido acético glacial 4,5 ml.

 Alcohol etílico al 90 % 995ml.
 Mezclar y conservar en el mismo recipiente.

METODO DE TINCION

 Sumérjase las preparaciones, fijadas con Schaudinn o con PVA, en

alcohol al 70 % durante dos minutos.
 Añádase solución yodada de Lugol diluida a etanol al 70 % hasta obtener
un color de té cargado: manténgase los portaobjetos en la solución
durante cinco minutos.
 Lávese dos veces los portaobjetos con alcohol al 70 %.
 Tíñase las preparaciones con colorante tricromico sin diluir durante 30
minutos.
 Retire las preparaciones, séquese bien y colóquense en alcohol
acidificado al 90 % (Prepárese añadiendo 4,5 ml de ácido acético glacial
a 1 litro de etanol al 90%), durante 2-3 segundos sumérjase las
preparaciones en alcohol al 95 % para enjuagarlas y deshidrátense luego
en etanol al 100% y xileno, o en la mezcla carbol-xileno.
 Móntese con resina o aceite de inmersión y recúbrase la preparación con
un cubre objetos.
HEMATOXILINA FÉRRICA
Importancia y utilidad
Método clásico para colorear e identificar estadios de protozoos patógenos y
comensales comunes en heces del humano, sobre todo cuando sólo hay
trofozoítos o cuando hay infecciones mixtas.
Método confiable para identificación de estadíos de Dientamoeba fragilis.
Aunque la identificación de infecciones por Entamoeba histolytica necesita de
pruebas moleculares, este método es útil en países en desarrollo para la
confirmación de trofozoítos hematófagos de heces disentéricas, de exudados,
líquidos, esputo, aspirados, raspado de úlcera de piel.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS:
Las ventajas y desventajas de este método van a depender de:

1. Costo-efectividad.
2. Adiestramiento de personal.

Es un método caro porque exige reactivos de primera clase, sobre todo el fijador
y los deshidratantes (alcohol, xileno); requiere un tiempo de preparación y
coloración de las muestras (mínimo 2 horas) y exige un personal de laboratorio
con conocimiento sólido sobre principios celulares y morfología diferencial de los
organismos. Sin embargo, para la especiación de protozoos es la más adecuada,
la preparación puede guardarse para control, referencia, confirmación por
terceras personas y material de estudio.
FUNDAMENTO:

Con esta coloración el material de base y los microorganismos se tiñen de azul

grisáceo negro con estructuras nucleares y cuerpos de inclusión más oscuros
que el citoplasma. La coloración permite la diferenciación de protozoarios,
células humanas, cristales de Charcot Leyden, levaduras y no es recomendada
para huevos o larvas de helmintos, ni para ooquiste de I. belli, C. parvun y
Cyclospora.
Procedimiento:

Recomendaciones:

Los dos componentes se almacenan por separado y se unen cuando se va a

realizar la tinción. Se añade 100 ml de la solución A otros 100 ml de la solución
B, y se mezcla la solución resultante. El tiempo de tinción depende de la técnica
y tejido usado.

Tras la tinción con la solución de hematoxilina, y tras lavar en agua corriente

abundantemente (30 min), se pueden incubar las secciones en hidrógeno
carbonato de sodio (bicarbonato de sodio) al 01 % en agua destilada para que
los núcleos adquieran un color azulado. El tiempo para conseguir el color
deseado depende de la coloración que queramos conseguir, lo cual se puede
controlar mediante la observación de las secciones al microscopio.