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FACULTAD DE EDUCACIÓN
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
2018
PRÁCTICAS DE LABORATORIO: BIOLOGÍA CELULAR
INTRODUCCIÓN
Por tanto, es importante estar preparado para cada práctica de laboratorio. Para el
buen aprovechamiento de las prácticas se recomienda leer previa y completamente
la guía de cada sesión.
A continuación, se mencionan la lista de materiales habituales, que deberán tenerse
a la mano en todas las prácticas de laboratorio:
10 Fotosíntesis
11 Cromosomas politénicos.
13 Electroforesis
En el laboratorio se trabaja con sustancias que pueden ser tóxicas o nocivas, así
como muestras biológicas, lo que hace recomendable que se lave las manos al
llegar y antes de salir.
En lo posible utilice zapatos cerrados y sin tacón, se trata de trabajar con el mayor
confort y seguridad posibles.
Siempre que realice una práctica debe saber por qué la hace y cómo la hará y para
ello, debe llegar conociendo previamente las sustancias y los elementos que va a
manipular, los riesgos que representan y las medidas que tomará en caso de
accidentes. Adicionalmente, esto ahorrará tiempo y trabajo. Si en algún momento
es víctima o testigo de un accidente, mantenga la calma y avise inmediatamente a
la profesa o a la monitora.
Cuando reciba diversas sustancias asegúrese de que cada recipiente o frasco que
las contiene posee su correspondiente rótulo, no querrá mezclar sustancias
equivocadas y exponerse a una situación singularmente sorpresiva. No utilice nunca
la boca para succionar sustancias líquidas con las pipetas.
Al ser una actividad docente formal ello implica que debe estar atento a las
explicaciones y a los sucesos que ocurren en el laboratorio, además hay que cuidar
los recursos de uso común, evitando llamados de atención por manipular éstos sin
el consentimiento del docente.
Trabaje en grupo, sea activo y cultive su iniciativa, no espere a que sus compañeros
hagan el trabajo por usted, ni cargue con el trabajo de ellos, en ese sentido, es
necesario cultivar el sano hábito de la comunicación y la expresión de sus ideas sin
imposición, escuchando al mismo tiempo las de los demás.
En caso de accidente con alguna de las anteriores sustancias, hay que comunicarlo
inmediatamente al docente encargado. Lavarse inmediatamente con abundante
agua la parte afectada. Si la quemadura fuera en los ojos, acudir al servicio médico
más cercano después de realizar el lavado. Si fuera extensa, llevar al lesionado al
chorro de agua de la regadera inmediatamente y acudir al servicio médico después.
Comportamiento
REGISTRO DE RESULTADOS
Las anotaciones deben ser breves y muy claras. Deben hacerse inmediatamente
después de cada experimento sin confiar en la memoria un momento más de lo
necesario.
Para que los experimentos de laboratorio tengan valor formativo, se aprenda a hacer
observaciones exactas, se estimule la curiosidad y se desarrolle un sentido crítico
basado en los aspectos cuantitativos de la ciencia, es necesario que antes de iniciar
el trabajo en el laboratorio:
Deberá trabajar con un grupo (constituido mínimo por tres personas, máximo por
cuatro) y entregar un informe escrito de la práctica que les corresponde acorde a la
guía de programación (anexo 1) y elaborado de acuerdo con las normas básicas
para escritura de artículos científicos. Adicionalmente, se tendrá que ajustar dicha
práctica, para presentar una propuesta de laboratorio
Como una ayuda para este trabajo, a continuación, se hace una relación breve de
las partes de las cuales consta dicho informe, que pueden ser identificadas
rápidamente en un artículo científico. Es de vital importancia la claridad en los
análisis, pues de este proceso depende que quien lea y evalué el informe (la
profesora u otro jurado lector) comprenda el contenido.
Partes de un artículo científico
TÍTULO
Septiembre 8 de 2003
4. Palabras clave. Permiten la identificación rápida del contenido del trabajo en las
bases de datos bibliográficos que se manejen a través de sistemas informáticos, no
es un glosario y deben ser solo unas cuantas que resulten representativas (ver
ejemplo del punto 2).
10. Anexos. Suelen ser mapas conceptuales, imágenes o tablas que aportan al
artículo pero que tienen una extensión igual o superior a una página.
Por lo anterior se sugiere que la cita sea solicitada previamente (como mínimo
desde el día anterior a las 7:00 p.m.), para que la profesora programe horarios para
los que la deseen. Es necesario indicar si es individual o grupal y cuál es la finalidad.
Evaluación
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Ducolomb, Y., Fierro, R., González, C., Ortiz, R. y Rodríguez, E. (2012). Manual de
prácticas de laboratorio de Biología Celular. México: Universidad Autónoma
Metropolitana.
Materiales habituales
INTRODUCCIÓN
En 1665 Robert Hook observó por primera vez las células en un corte de corcho y
fue él mismo quien les dio esta denominación. Posteriormente, en 1838, Matthias
Schleiden y Theodor Schwann enunciaron la Teoría Celular, basada en el concepto
de que la célula es la unidad básica de los seres vivos. Esta teoría puede resumirse
en tres conceptos principales: 1. La célula es la unidad estructural de los organismos
vivos; 2. Es la unidad funcional de los seres vivos; 3. Todas las células provienen
de otras células preexistentes.
Las estructuras celulares comunes para las células: animal y vegetal son (figura 1 y
2, respectivamente):
9. Citoplasma: Es un gel casi líquido, que durante mucho tiempo fue considerado
como una matriz sin estructura; sin embrago, estudios más recientes han revelado
que posee un sistema de fibras que constituyen un citoesqueleto, en el cual están
suspendidos los organelos y las formaciones intracelulares identificables
microscópicamente. La matriz citoplasmática está compuesta por agua, iones
inorgánicos y moléculas orgánicas pequeñas, macromoléculas y enzimas solubles,
y las proteínas que constituyen el citoesqueleto.
10. Los plastidios. Son parte característica de las células vegetales. Cada plastidio
está rodeado por una membrana doble. Dentro de esa doble membrana tenemos el
estroma que es la substancia acuosa contenida en el plastidio. Los plastidios se
clasifican de acuerdo al tipo de pigmento que contengan.
1. Tamaño Entre 0.5 y 5 µm de Entre 5.0 µm y hasta 75 mm. Entre 10 µm y 100 µm.
diámetro. (Como es el caso del óvulo
de avestruz)
2.Envoltura No posee envoltura Posee una envoltura nuclear Posee envoltura nuclear
Nuclear nuclear, el ADN se definida que contiene el DNA. definida, al igual que la célula
encuentra disperso en el Esta membrana tiene eucariote animal.
citoplasma. muchos poros para dejar
entrar o salir sustancias.
3. Nucleolos No posee nucleolos. Posee nucleolo más denso, Algunas veces posee más de
para la síntesis de uno.
subunidades de ribosomas.
5. Pared Celular Posee una pared celular No posee una pared celular. Posee una pared celular rígida
rígida, protege frente a compuesta de celulosa.
daños e hinchamiento
osmótico.
6. Organelas Ribosomas (partículas -Aparato de Golgi -Aparato de Golgi
formadas por proteínas y
ácidos nucleicos que -Vacuolas pequeñas -Vacuolas grandes
sintetizan proteínas).
-Ribosomas -Ribosomas
-Lisosomas -Lisosomas
-Mitocondrias -Mitocondrias
-Centríolos -Cloroplastos
7.Membrana. Posee una membrana Posee una membrana Posee una membrana
plasmática formada por plasmática, permite entrada o plasmática. Su forma se adapta
una doble capa de lípidos salida de componentes a la rigidez de la pared celular.
y de proteínas. mediante multitud de
transportadores específicos.
Así mismo tiene muchos
receptores de señales. No
está relacionada con la
producción de energía.
A continuación, se encuentran dos imágenes que muestran las partes de las células
animal y vegetal.
1. OBJETIVOS
Con esta práctica se pretende que el estudiante:
2. MATERIALES
3. PROCEDIMIENTO
1. Células vegetales
a. Cebolla.
Tome una cebolla de huevo y divídala en ocho partes. Note que consta de varias
capas o escamas. Cada capa está recubierta, en ambas superficies, por una
membrana transparente formada por células epidérmicas o epiteliales. Separe una
porción pequeña de la membrana externa (que es más coloreada o pigmentada que
la interna), extiéndala sobre un portaobjeto, agregue una gota de solución salina al
0.7% y póngale un cubreobjetos tratando de evitar la formación de burbujas. Dibuje
varias células en 10X y en 40X. ¿Qué forma tienen las células?
Luego, agregue una gota de solución de Lugol a un lado del cubreobjetos y al lado
opuesto ponga un pedazo de papel absorbente para facilitar la entrada del colorante
a la muestra. Observe nuevamente en 10X y en 40X. Realice el montaje de una
muestra de cebolla en inmersión de solución salina concentrada, que previamente
preparó la monitora, luego agréguele Lugol.
Ponga una hoja de la planta acuática elodea sobre un portaobjeto, agregue una gota
del agua en la que se encuentra la planta y colóquele un cubreobjetos. Esquematice
varias células en 10X y en 40X. ¿Se ve el núcleo celular?
Observe detenidamente algunas células con el objetivo de 40X. ¿Se nota en ellas
algún movimiento? ¿Si es así, cómo se llaman las estructuras que permiten darse
cuenta de ese movimiento? ¿Qué nombre recibe ese fenómeno? ¿A qué se debe?
c. Papa
Para hacer tinción, use la preparación con Lugol (10 agua: 1 Lugol). ¿Qué
coloración toman los plastidios con la solución de Lugol? ¿Por qué se da dicha
tinción? ¿El lugol será específico para la identificación de almidón o se podrá utilizar
para reconocer cualquier carbohidrato? Haga un esquema de lo que se observa con
el objetivo de 10X y 40X.
d. Tomate
Tome un tomate maduro y quítele con una cuchilla una parte de la cáscara. Con la
misma cuchilla o con un palillo de dientes raspe, en forma horizontal, una pequeña
porción del tejido contiguo (mesocarpio o pulpa), espárzalo sobre un portaobjeto
seco, agréguele una gota de agua y póngale un cubreobjetos. Dibuje varias células
en 10X y en 40X. ¿Hay estructuras diferentes a las observadas en las células
anteriores? Observe unas pequeñas estructuras de color rojo, que son otro tipo de
plastidios. ¿Cómo se llaman? ¿Cuál es su función?
Para hacer la tinción use la preparación con Lugol (4 agua: 1 Lugol). ¿Hay algunas
estructuras que se ven mejor que antes de colorear?
e. Banano
Tome un banano y quítele la cáscara a un trozo, con una cuchilla raspe en forma
horizontal, una pequeña porción del tejido contiguo (mesocarpio o pulpa), espárzalo
sobre un portaobjeto seco, agréguele una gota de agua y póngale un cubreobjetos.
Dibuje varias células en 10X y en 40X. ¿Hay estructuras diferentes a las observadas
en las células anteriores? Observe unas pequeñas estructuras ¿Cómo se llaman?
¿Cuál es su función?
Para hacer la tinción use la preparación con Lugol (4 agua: 1 Lugol). ¿Hay algunas
estructuras que se ven mejor que antes de colorear?
2. Células animales
a. Mucosa bucal
Ponga una gota de agua sobre un portaobjeto. Enjuáguese la boca y con un palillo
de dientes haga un raspado suave sobre la pared interna de las mejillas o carrillos.
Mezcle el raspado con la gota de agua, espárzalo sobre el portaobjeto, póngale un
cubreobjeto y observe con los objetivos de 10X y de 40X. ¿Qué estructuras ve en
estas células?
Use para hacer tinción la preparación con azul de metileno. ¿Qué diferencias
encuentra entre esta observación y la inmediatamente anterior? Dibuje, en 40X,
algunas de las células observadas.
b. Sangre humana
c. Espermatozoides.
D. PREGUNTAS
1. Fuera de las estructuras u organelas que vio en las diferentes células, hay otras
que no se pudieron observar. Explique por qué se dio dicha situación y qué se podría
hacer para observarlas.
2. Enuncie al menos tres diferencias generales entre células animales y células
vegetales.
3. ¿De qué factores puede depender el hecho de que las células tengan distintas
formas? ¿Todas las células tienen núcleo? ¿Habrá células con más de un núcleo?
Explique con ejemplos.
4. ¿En las células de cebolla, elodea, papa y tomate se observa la membrana
celular? Explique las razones y describa lo observado en cada caso.
5. ¿Por qué todas las células vegetales tienen cloroplastos? ¿Qué característica da
la presencia de cloroplastos a las células vegetales? ¿Se puede hacer fotosíntesis
de manera artificial?, realice una consulta al respecto.
6. ¿Por qué ciertos colorantes son específicos para determinadas estructuras
celulares? Cite algunos ejemplos.
7. Teniendo en cuenta el siguiente texto, elabore un modelo para la enseñanza de
las partes de la célula, recuerde describir el proceso de construcción y presentar la
propuesta en la asesoría.
Tomado de: Arzola,N., Muñoz,T., Rodríguez, G. y Camacho, J. (2011). Importancia de los modelos
explicativos en el aprendizaje de la biología. Revista Ciencia Escolar: enseñanza y modelización. 1
(1), 7-16. Recuperado de:
http://modelamientoparabiologia.weebly.com/uploads/1/4/4/8/14480368/pdffff.pdf
Laboratorio de Biología Celular
Preparación práctica 2: Preparación de células
sanguíneas y observación de
leucocitos, núcleo, lisosomas y citoplasma
Observaciones
1. El puente de coloración está ubicado en el lava platos lugar donde se debe hacer la
coloración.
2. Los materiales y recipientes con sangre se depositan en los contenedores y guardianes
rojos.
3. Antes de cada práctica se debe filtrar el Wright.
1. Lancetas
2. Guantes
3. Cubreobjetos y portaobjetos
4. Pañuelos desechables “Kleenex”
Práctica 2. PREPARACIÓN DE CÉLULAS SANGUÍNEAS Y OBSERVACIÓN DE
LEUCOCITOS, NÚCLEO, LISOSOMAS Y CITOPLASMA
INTRODUCCIÓN
Las células sanguíneas tienen como funciones principales el transporte del oxígeno
(O2) y el dióxido de carbono (CO2), así como la defensa del organismo contra
agentes invasores. Se originan a partir de células totipotenciales (figura 1), de las
multipotenciales (figura 2) y las plruipotenciales (figura 3). La principal función de la
sangre la realizan los glóbulos rojos (eritrocitos) debido a la hemoglobina. La
segunda, la realizan los glóbulos blancos (leucocitos), los cuales intervienen
fagocitando bacterias o desencadenando el mecanismo antígeno-anticuerpo.
Los leucocitos son menos numerosos que los eritrocitos, se ha contado 7.500 por
milímetro cúbico, pero suele variar el número, además son abundantes en caso de
infección o por reacciones alérgicas graves. Los tipos de leucocitos con su
distribución porcentual son:
Neutrófilos:
Corresponden al 62% de los leucocitos, poseen núcleo no segmentado cuando aún
está en proceso de maduración y núcleo segmentado con 2 ó 3 lóbulos o hasta 5,
unidos por un filamento. Con colorante Wright se observa en primer lugar un
citoplasma rosado pálido con granulaciones pequeñas rosadas y azules y su núcleo
de color azul oscuro y morado (figura 4B). Estos neutrófilos actúan en enfermedades
infecciosas agudas. En casos patológicos se pueden diagnosticar la “anemia
perniciosa”.
Eosinófilos o Acidófilos:
Corresponden al 2% de glóbulos blancos, presentan un solo núcleo (bilobulado),
con el mismo procedimiento que el anterior, se logran observar. Presentan
citoplasma de color anaranjado intenso y granular, con gránulos grandes de color
naranja, mientras que su núcleo está coloreado de morado oscuro y porciones
rosadas (figura 4C). Estos aumentan en enfermedades alérgicas graves.
Basófilos:
Estos son el 1% de los leucocitos, presentan un núcleo grande redondo o en forma
de haba o lobulados de color morado intenso. El citoplasma ligeramente rosado y
gránulos grandes de color azul oscuro en toda la célula (figura 4D).
Linfocitos:
Estas células representan el 30% de los leucocitos, poseen un citoplasma azul más
intenso y a veces casi nada teñido. Presenta un solo núcleo que se colorea de
morado café sin granos (figura 4E). Tienen como funciones dar origen a otras
células, transporte de sustancias nutritivas, producen cuerpos inmunes.
Monocitos:
Representan el 5%, son de forma variada, ovalados, con seudópodos, etc. Son más
grandes que los neutrófilos. Presentan al colorearse, un citoplasma azul claro sin
granos y un núcleo de varias formas, de color morado oscuro (figura 4F). Estos
monocitos aumentan en enfermedades infecciosas de larga duración. Por medio
de ellos se puede diagnosticar la leucemia monocítica.
C D
F
E
1. OBJETIVO
Mediante el uso del microscopio, identificar las diferentes formas que pueden tener
las células sanguíneas y algunas de sus organelas.
2. MATERIALES
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Lanceta estéril
• Microscopio
• Goteros
• Gradillas o puentes de coloración
3. REACTIVOS
• Colorante Wright
• Agua destilada
• Aceite de inmersión
4. PROCEDIMIENTO
1. Con una lanceta estéril “pínchese” un dedo para sacar una gota de sangre.
Colóquela en el extremo de un portaobjetos, haga una extensión de la sangre
(siguiendo las instrucciones de su profesor) y deje secar al aire.
3. Una vez terminado este tiempo, lave con agua hasta que desaparezca la
coloración. Seque, observe al microscopio (objetivos 10X, 40X y 100X) y haga los
esquemas correspondientes a las formas de las células identificadas.
El papel del ejército, formado por leucocitos a los que los civiles llamaban glóbulos
blancos por su uniforme, era fundamental. Ellos eran el bastión para la defensa del
territorio. Los leucocitos siempre habían nacido en las regiones llamadas médula
espinal o las de tejido linfático. Históricamente, a los leucocitos más pequeños de
estatura, aquellos a los que llamábamos linfocitos, se le destinaba siempre a la
lucha contra la inmigración ilegal. Ellos, los linfocitos, eran los que eliminaban del
territorio a los enemigos infiltrados en nuestro país y que eran detectados por las
patrullas de inmigración, las células dendríticas.
Como todos los cuerpos de élite los linfocitos estaban especializados en diferentes
tareas. Los que se habían quedado en educación básica y no habían ido a la
universidad eran la unidad B. Los linfocitos B vivían en sus cuarteles en los tejidos
linfáticos hasta que se precisaba su actuación.
Pero había linfocitos que acudían a la universidad para especializarse en alguna
tarea vital para nuestra supervivencia y eran los mandos de nuestro ejército. La
universidad estaba cerca del corazón y se llamaba Timo, así que a los linfocitos
universitarios los llamábamos linfocitos-T.
Si las patrullas de
células dendríticas
identificaban algo
en el territorio que
no era conocido, lo
detenían y acudían
al cuartel del
ganglio linfático a
presentárselo al
capitán linfocito T
(siempre con
corbata)
especializado en
ese tipo de
intrusos. Este lo
interrogaba y
decidía si había
que atacar la zona
donde el intruso
había sido
encontrado y, en
ese caso, llamaba a los soldados linfocitos B para pasar al ataque con armas
químicas o que decidieran si llamar a los refuerzos.
También ganó las elecciones el sindicato CD-8, los agresivos entre los linfocitos-T,
que había conseguido más miembros; mientras que el CD-4, los reguladores, perdía
muchos de los suyos.
Así las cosas, un capitán del CD-8
confundió a un técnico en
comunicaciones, llamado Mielina, con
un invasor agresivo; el cuerpo CD-4,
muy menguado, no consiguió que se
impusiera la prudencia y los linfocitos B
fueron llamados a atacar a Mielina en
medio de un ambiente de disensión
entre los capitanes del ejército que hizo
que los linfocitos B estuvieran muuuuuy
agresivos, más de lo normal.
Tras varios años de caos interno, la ayuda vino de fuera. Otros países nos
suministraron tropas para controlar el comportamiento de los linfocitos T y B y la
situación se pudo normalizar. Estas tropas, que llamaban inmunomoduladores,
inmunosupresores, anticuerpos monoclonales … y consiguieron traer de nuevo la
normalidad a nuestra tierra, pero pagando el precio de tener que tenerlos “en casa”
todo el tiempo.
INTRODUCCIÓN
Cada minuto se secreta unos 0,5 ml de saliva, excepto durante el sueño, donde la
secreción es escasa. La saliva tiene un papel importante en el mantenimiento de los
tejidos bucales, ya que ejerce un efecto de limpieza y arrastre de sustancias
alimenticias y de gérmenes patógenos que contribuirían en ese caso a la aparición
de caries dentales e infecciones, así como al deterioro de los tejidos. Además,
contiene iones tiocianato (conocido también como ión sulfocianuro, SCN-), enzimas
proteolíticas y anticuerpos proteicos que destruyen las bacterias bucales.
Aunque parezca muy extraño, nuestra saliva contiene el ión SCN -. Por supuesto
que se encuentra en concentraciones muy bajas, porque en cantidades grandes las
sales de SCN- son peligrosas cuando se las ingiere. A pesar de encontrarse en
cantidades muy pequeñas, es fácilmente detectable usando ion férrico (Fe3+),
porque se produce una coloración roja característica.
La función del ión tiocianato en la saliva es ayudar a proteger los dientes del ataque
por bacterias. Con ayuda de la enzima lactoperoxidasa, también presente en la
saliva, reacciona con el peróxido de hidrógeno (H2O2), producido por bacterias en
la boca, dando hipotiocianato.
Enzima lactoperoxidasa
SCN- + H2O2 OSCN- + H2O
Ion tiocianato Peróxido de hidrógeno Hipotiocianato Agua
Este último ión, a diferencia del tiocianato, puede penetrar la célula de las bacterias,
disminuyendo su velocidad de crecimiento. Se puede comprobar que la
concentración de SCN- en saliva puede ser tres veces mayor en fumadores con
respecto a no fumadores. También aumenta con la edad.
1. OBJETIVO:
2. MATERIALES
• Probetas
• Erlenmeyers
• Papel de filtro
• Tubos de ensayo
• Beakers
• Pipetas
3. REACTIVOS
• Chicle sin azúcar
• Ácido acético (CH3COOH)
• Saliva
• Acetona (C3H6O)
• Agua destilada
• Ácido clorhídrico (HCl), concentración 3 N y 1 N
• Hidróxido de sodio (NaOH), concentración 3 N y 2,5 N
• Reactivo de Benedict
• Carbonato sódico (Na2CO3), concentración 0,1N
• Sulfato cúprico (CuSO4), concentración 0,05 N
• Cloruro férrico (FeCl3), concentración 0,1 N
4. PROCEDIMIENTO
A. Lávese la boca con agua (H2O), mastique el chicle sin azúcar y colecte la mayor
cantidad de saliva "estimulada" en un matraz graduado de 50 mL.
B. Agregue 3 gotas de ácido acético (CH3COOH) de concentración 1N por cada 15
mL de saliva y mezcle las dos sustancias.
C. Coloque en un erlenmeyer, 4 veces el volumen de acetona (C3H6O) por el
recolectado de saliva y agréguela lentamente con agitación permanente. Tape el
frasco y déjelo reposar por 15 minutos.
D. Bote la mayor parte del sobrenadante y filtre la parte final de la mezcla que
contiene el precipitado.
E. Lave el precipitado 4 veces con 3 mL. de acetona (C3H6O).
F. Retire el papel de filtro y déjelo secar.
G. Divida el material obtenido (la mucina) en cinco partes.
B. Coloque otro 1/5 parte, de mucina en otro tubo de ensayo (márquelo como tubo
2B) y disuélvala en 2 ml carbonato sódico (Na2CO3) de concentración 0,1 N.
¿Se observan diferencias entre los dos tubos? Si las hay explique, ¿por qué se dan
dichas diferencias o similitudes?
3. Presencia de proteínas en la mucina
C. En un tubo de ensayo (tubo 3C), disuelva 1/5 parte sobrante de la mucina en 1ml
de hidróxido de sodio (NaOH) con concentración 2,5 N, agregue 3 gotas de una
solución 0,05% de sulfato cúprico (CuSO4) y tripsina.
1. ¿Por qué la saliva tiene una función vital en la integridad de los tejidos orales?
2. Explique cómo funciona el sistema amortiguador de pH en la saliva.
3. ¿Qué compuestos se identificaron en la saliva y mediante qué reacciones se
evidenció su presencia?
4. ¿De qué manera afecta masticar chicle después de comer?
5. ¿Qué enfermedades están asociadas al consumo de cigarrillo?
6. ¿Cómo se afectan los dientes por fumar? Busque explicación desde bases
químicas.
7. ¿Qué sustancias químicas tóxicas contiene un cigarrillo?
8. ¿Qué efectos tiene el cigarrillo sobre el metabolismo de la glucosa y los lípidos?
9. Con argumentación científica, busque convencer a un fumador de abandonar su
mal hábito.
10. Compare los daños que causan los cigarrillos de nicotina y los cigarrillos de
marihuana. Saque conclusiones.
INTRODUCCIÓN
CONDICIONES CONDICIONES
ISOTÓNICAS HIPERTÓNICAS
MEMBRANA
PLASMÁTICA
CONDICIONES
HIPOTÓNICAS
B
CELULA
ANIMAL
FIGURA 1A. Proceso de ósmosis. 1B. Efectos de los medios de concentración en eritrocitos
La ósmosis entre dos soluciones continúa hasta cuando se alcanza igual
concentración de solutos en ambos lados de la membrana. La presión necesaria
para alcanzar este estado se conoce como presión osmótica y a mayor
concentración de una solución, mayor será la presión osmótica. En las células
animales, aunque poseen un mecanismo de osmorregulación, si se presenta una
diferencia muy alta de concentraciones puede observarse un proceso de
rompimiento celular debido al hinchamiento de la célula por la excesiva acumulación
de agua dentro de ella. Este fenómeno se conoce como hemólisis, cuando le
sucede a los glóbulos rojos (Fig. 1A y 1B).
PLASMÓLISIS
TURGENCIA
1. OBJETIVOS
4. MÉTODOLOGÍA
o Método A
Recuerde que para hallar el volumen que requiere para cada solución, debe hacer
el cálculo teniendo en cuenta que la solución madre se preparó al 30% y se requiere
preparar de cada solución 5mL. Use la fórmula: C1xV1 = C2xV2
3. Deje reposar por 10 minutos mezclando por inversión de vez en cuando.
PREGUNTAS
1. Clasifique cada una de las soluciones en las que fueron inmersos los eritrocitos
(tanto en las de NaCl como las de Glucosa) acorde a su concentración (hipotónicas,
isotónicas e hipertónicas).
2. ¿Cómo se explica cada uno de los resultados obtenidos, teniendo en cuenta el
tipo de solución?
3. ¿Qué son las células “fantasma”? ¿Cómo se producen?
4. Explique el comportamiento de los eritrocitos teniendo en cuenta las presiones
osmótica y de turgencia.
5. Analice y resuelva: Con base en el siguiente esquema y asumiendo que se tiene
un sistema de células con las siguientes características a nivel de concentración de
solutos, conteste las siguientes preguntas:
__________________________________________________
Sustente su respuesta.
5.2 Si se coloca este mismo sistema en un medio hipotónico ¿Cuál de ellas tendría
mayor presión de turgencia? Justifique brevemente.
PARTE II. ÓSMOSIS EN CÉLULAS VEGETALES (OPCIONAL)
Materiales
3 vasos de precipitados de 50 ml
Bisturí
Portaobjetos y cubreobjetos
3 clips
Cinta de enmascarar
Papa mediana por equipo
Reactivos
100 ml de solución de cloruro de sodio al 1%
100 ml de solución de cloruro de sodio al 20%
Agua destilada
Safranina o azul de metileno.
Equipos
Balanza electrónica
Microscopio óptico
3. Extiende un clip e introdúcelo por uno de los extremos de la papa cuidando que
atraviese la papa en línea recta hasta que salga por el otro extremo.
4. Sumerge los tres cilindros de papa con los clips atravesados, en los vasos de
precipitados 1, 2 y 3. Deja transcurrir 10 minutos.
5. Después de este tiempo extrae los pedazos de papa de los vasos de precipitados,
retira el clip y el exceso de agua y pésalos uno por uno en la balanza electrónica.
PREGUNTAS
INTRODUCCIÓN
La bicapa lipídica tiene un papel fisicoquímico dual, pues sirve por una parte como
un solvente de las proteínas de la membrana y por otra actúa como una barrera a
la permeabilidad. Mientras que las moléculas hidrofóbicas, que son solubles en
lípidos (como el etanol) pueden pasar fácilmente la membrana, moléculas pequeñas
como el oxígeno (O2), dióxido de carbono (CO2), Nitrógeno (N2), pueden difundir
entre los fosfolípidos de membrana, pero moléculas hidrofílicas pequeñas como
agua, nutrientes como la glucosa e iones como Na+, K+, protones H+) no pueden
pasar directamente a través de los fosfolípidos de la membrana plasmática. Estos
compuestos deben pasar a través de proteínas de transporte específico situadas en
la membrana.
Cambios de temperatura
Fluidez de la membrana
Antes de explicar lo que es una fluidez de membrana, debemos tener en cuenta qué
es una membrana. La membrana es una estructura laminar formada por lípidos (con
cabeza hidrofilia y cola hidrofóbica) y proteínas que engloba a las células, define
sus límites y contribuye a mantener el equilibrio entre el interior (medio intracelular)
y el exterior (medio extracelular) de éstas. Ahora, después de haber leído lo que es
una membrana, podremos entender lo que es una fluidez de membrana.
- Y por último los fosfolípidos aportan mayor fluidez, ya que mientras más ácidos
grasos (cortos y saturados) formen parte de éstos, mayor será la fluidez de la
membrana.
1. OBJETIVO
2. MATERIALES
4. PROCEDIMIENTO
2. Lave los trozos en agua corriente durante 3 minutos para eliminar el pigmento de
las células seleccionadas y deje los trozos en agua.
4. Coloque un trozo seco en el tubo marcado con 0 °C, tápelo y anote en el tubo el
número del equipo. Déjelo en la nevera durante 90 minutos, anote la hora.
6. Caliente agua en baño maría hasta 70 °C. Tome un trozo de remolacha con una
pinza y agítelo sin soltarlo en el tubo marcado 70 °C y tápelo.
7. Repita el paso anterior con el otro trozo usando agua caliente a 50 °C.
Saque los trozos de remolacha y “lea” cada tubo dándole un valor de 10 a la cantidad
de pigmento difundido en el tubo de 70 °C, indique los valores arbitrarios para la
cantidad de pigmento de los demás tubos, o llévelo a un fotocolorímetro y mida la
concentración del pigmento.
ESCALA ARBITRARIA
Efecto de los solventes orgánicos:
Al final retire el trozo de remolacha y usando la misma escala anterior haga las
lecturas.
PARA EL INFORME
Para presentar el informe debe tenerse en cuenta las siguientes tablas de datos:
Efecto de la temperatura:
PREGUNTAS
1. ¿Qué efectos causa el cambio de temperatura en la membrana de las células
vegetales (de la remolacha)?
2. ¿Qué características presentan los solventes orgánicos que permiten explicar
su permeabilidad, no permeabilidad a través de la membrana celular? ¿Qué daños
pueden ocasionar a la célula? (especialmente a la membrana celular).
3. Consulte sobre el pigmento de la remolacha y explique qué sucede con este
pigmento en cada caso de la experiencia.
Laboratorio de Biología Celular
Preparación práctica 6: Transporte de iones a través
de la membrana celular
Elaborada por: Katerin Valencia Posada y Astrid
Eliana Cuartas Cuartas
Reactivos Equipos y materiales
Peryodato de sodio o de potasio (NaIO4 o Centrífuga
KIO4) 5mM
Metabisulfito de sodio o potasio (NaS2O5 o
Falcon 15ml (1 por mesa)
K2S2O5) 5mM
Ferrocianato de sodio o potasio
Tubos de ensayo (8 por mesa)
(Na3Fe(CN)6 o (K3Fe(CN)6) 5mM
Tritón
Solución salina 0.9%
Hepes 5mM pH 7
Solución Concentración Cantidad Preparación
Peryodato 5mM 100ml Pesar 0,11g de Peryodato de sodio y
de sodio diluirlo en 100ml de agua destilada
Metabisulfito 5mM 100ml Pesar 0,008g de Metabisulfito de sodio y
de sodio diluirlo en 100ml de agua destilada.
5mM 100ml Tomar 0,2g y diluirlos en 100ml de agua
Ferrocianato
destilada, almacenarlo en un falcon
de potasio
cubierto con papel aluminio
Solucion 0,9% 100ml tomar 0,9g de NaCl y diluirlo en 100ml
salina de agua destilada
5mM 100ml Pesar 0,12g de Hepes y diluirlo en 100ml
Hepes
de agua destilada
Observaciones
1. Poner en un recipiente grande agua con hipoclorito de sodio concentrado para
depositar los tubos, materiales con sangre y descartar sobrenadante. Para luego
lavarlos y no descartarlos.
1. Los estudiantes deben traer camisa, aguja y vacutainer con citrato de sodio
PRACTICA No.6. TRANSPORTE DE IONES A TRAVES DE LA MEMBRANA
CELULAR
INTRODUCCIÓN
Las células deben conservar un ambiente interno adecuado a fin de llevar a cabo
las reacciones químicas necesarias para sostener la vida. Esto es posible porque
todas las células están separadas físicamente del ambiente que las rodea por una
membrana plasmática que las limita y las define como una unidad distintiva. La
amplia red de membranas internas de las células eucariotas forma compartimientos
adicionales con características singulares para actividades muy especializadas.
Las moléculas pueden cruzar dicha barrera ya sea por mecanismos de difusión
simple o mediante mecanismos especiales. Por difusión simple (mecanismo de
transporte pasivo) pueden atravesar la membrana sustancias liposolubles,
moléculas pequeñas que no presentan carga (CO 2 y O2) y algunos iones. La
difusión siempre se presentará a favor del gradiente de concentración o eléctrico y,
por lo tanto, no requiere de energía por parte de la célula. Cuando se trata de
moléculas de mayor tamaño (aminoácidos, glucosa, nucleótidos, etc.) y ciertos
iones que no se difunden libremente a través de la membrana, se requiere de la
participación de proteínas de la membrana. A esta forma de transporte se le conoce
como mediado y puede producirse sin gasto de energía (transporte facilitado) y con
gasto de energía (transporte activo) si se presenta en contra de un gradiente (Fig.1).
Las proteínas que forman canales no se unen al soluto, sino que forman poros
hidrofílicos que atraviesan la membrana permitiendo exclusivamente el pasaje de
iones (canales iónicos); el tipo de ion se selecciona de acuerdo al tamaño y a la
carga. Los canales iónicos se encuentran generalmente cerrados con una especie
de "compuerta", que impide el pasaje de iones por el poro. Los canales pueden
abrirse por un intervalo de tiempo breve como respuesta a distintos tipos de
estímulos, permitiendo el pasaje de un ion específico a través de la membrana.
Las proteínas canal y muchas proteínas "carrier" sólo pueden trasladar sustancias
a través de la membrana en forma pasiva. Este pasaje mediado por proteínas se
conoce como difusión facilitada. La glucosa, por ejemplo, es una molécula hidrofílica
que entra en la mayoría de las células por difusión facilitada. Dado que la glucosa
se degrada rápidamente cuando entra en una célula, se mantiene un marcado
gradiente de concentración entre el interior y el exterior. Sin embargo, cuando en el
medio circundante hay un número muy grande de moléculas de glucosa, la
velocidad de entrada no se incrementa más allá de un cierto punto; alcanza un pico
y luego permanece estacionaria en ese nivel. Este límite a la velocidad de entrada
es el resultado del número limitado de moléculas de la proteína de transporte
específica de la glucosa que existen en la membrana celular.
El pasaje de iones a través de canales iónicos es más rápido que a través de las
proteínas "carrier", ya que no requiere la unión del ion con la proteína del poro.
Durante el intervalo de tiempo en que el canal se encuentra abierto, los iones
difunden rápidamente a favor de su gradiente electroquímico. Esta característica de
los canales iónicos es fundamental en la transmisión de señales eléctricas -impulso
nervioso- en el sistema nervioso.
Tanto la difusión facilitada como la difusión simple son impulsadas por un gradiente
de potencial químico. Las moléculas sin carga son transportadas simplemente a
favor del gradiente, desde una región de mayor concentración a una de
concentración menor. Pero, si el soluto transportado tiene carga neta (iones) su
transporte no sólo depende de su gradiente de concentración sino también de la
diferencia de potencial eléctrico a través de la membrana (diferencia de carga
eléctrica a ambos lados de la membrana debida a la distribución desigual de iones).
La fuerza total que mueve el soluto en este caso es la resultante de la combinación
de ambos gradientes: el eléctrico y el químico. El gradiente resultante se
denomina gradiente electroquímico. Casi todas las membranas plasmáticas tienen
una diferencia de potencial eléctrico, llamado potencial de membrana, en el que el
lado citoplasmático de la membrana es negativo respecto al lado externo.
Existen otras proteínas "carrier" que pueden trasladar moléculas contra gradiente,
proceso conocido como transporte activo. En el transporte activo, las moléculas o
iones se mueven contra el gradiente electroquímico, proceso análogo al de empujar
una roca cuesta arriba y que requiere energía. El transporte activo es mediado
siempre por proteínas "carrier"; así, las proteínas "carrier" están asociadas tanto al
transporte pasivo (difusión facilitada) como al transporte activo, mientras que en los
canales iónicos el transporte es únicamente pasivo.
Los glóbulos rojos de la sangre no poseen núcleo ni organelas internas, por esta
razón la membrana plasmática es su única membrana y pueden ser aislados sin
contaminación de otras membranas internas. La hemoglobina que no se encuentra
en la membrana y constituye su principal proteína.
Colesterol
MATERIALES
• Tubos de ensayo
• Erlenmeyers
• Centrífuga clínica
• Pipetas de 1 mL
• Medidor de pH microscopio
• Cubreobjetos
• Portaobjetos
REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
a. Pase 5 mL de
sangre del
vacutainer a un
tubo Falcon y
centrifugue por 10
minutos a 3500
rpm.
b. Extraiga el
sobrenadante
(plasma) y deje
sólo el precipitado
(eritrocitos).
c. Complete un volumen de 5 mL (con el precipitado), de solución salina al 0.9%
d. Centrifugue de nuevo a 3500 rpm durante 10 minutos y extraiga el sobrenadante.
e. Agregar 5 mL de solución isotónica Hepes (Buffer 5 mM, pH=6.4) y resuspender.
f. Para cada tubo de ensayo se usarán 0.5 mL de la solución de eritrocitos.
1. Tomar 7 tubos de ensayo y proceder como se indica en el cuadro siguiente:
SUSTANCIA EN ML 1 2 3 4 5 6 7
Eritrocitos 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Ion Peryodato 0.5
Ion Metabisulfito 0.5
Ion Ferrocianato 0.5
Agua Destilada
0.5
(control)
Agua Destilada 0.5 0.5 0.5
Ion Peryodato 0.5
Ion Metabisulfito 0.5
Ion Ferrocianato 0.5
Se extraen unas células animales que poseen dos tipos de proteínas canales
transportadoras de iones. De estas proteínas, se sabe lo siguiente:
JUSTIFICACIÓN JUSTIFICACIÓN
INTRODUCCIÓN
Las diversas células que recubren las paredes del estómago, también producen
mucus y enzimas como la pepsina, la cual inicia el desdoblamiento de las proteínas.
Sin embargo, las principales fases de la digestión tienen lugar en el intestino
delgado. El páncreas y el hígado, glándulas anexas, también juegan un importante
papel en la digestión.
El páncreas es una fuente importante de enzimas digestivas tal como el quimio
tripsinógeno que es vertido en el intestino delgado. El hígado produce bilis, que se
acumula en la vesícula biliar y después se vierte en el intestino. Esta sustancia
emulsiona las grasas haciéndolas más expuestas para ser atacables por las
enzimas (ver tabla 1).
Los insectos poseen sistemas tan complejos como otros organismos superiores. Al
igual que estos, los insectos necesitan metabolizar el alimento que consumen y
reproducirse para preservar su especie. Por su parte, el aparato digestivo de los
insectos es como un tubo. Generalmente, es un tubo enrollado que se extiende
desde la boca al ano. Se divide en tres regiones: el estomodeo, el menestrón y el
proctodeo.
La boca de los insectos varía dependiendo del orden al que pertenezca cada uno
(ver figura 3.1). Cada una de sus partes son denominados piezas bucales. Sin
embargo, hay cuatro elementos que conforman la estructura primitiva de todo
insecto, que son los siguientes: labro, mandíbulas, maxilas y labio.
Muchos insectos poseen glándulas salivales que por no segregar siempre saliva
son llamadas glándulas labiales. Estás glándulas se ubican debajo de la parte
anterior de la boca de los insectos.
FIGURA 3. Boca de los insectos. 3.1 Tipos de aparato bucal de insectos. Tomado
de: http://insectosbio.blogspot.com/2013/05/aparato-bucal-de-los-insectos.html y
3.2 glándulas salivares de abeja. Tomado de:
https://www.pinterest.es/pin/435652963934848555/
Cucarachas
En esta práctica se trabajará con la cucaracha, que hace parte del orden de los
insectos hemimetábolos paurometábolos de cuerpo aplanado y que miden entre
3 cm a 7,5 cm. Se conocen más de 4.500 especies de cucarachas en cerca de 500
géneros. Los primeros fósiles parecidos a blatodeos datan del periodo Carbonífero,
hace 354–295 millones de años.
La cabeza pequeña suele estar protegida por un pronoto en forma de escudo. Sus
antenas son filiformes, sus ojos compuestos son pequeños, las patas largas,
aplanadas y espinosas, y las piezas bucales masticadoras. Tiene dos pares de alas,
de ellos las alas del par posterior que son grandes y membranosas están cubiertas
y protegidas por las alas anteriores que son más pequeñas y están esclerotizadas.
Presentan un par de cercos laterales en el extremo del abdomen.
La capacidad de soportar mejor las radiaciones que los humanos, se puede explicar
en términos de ciclo celular. Las células son más vulnerables a los efectos de la
radiación cuando se están dividiendo. Las células de la cucaracha se dividen sólo
una vez cuando se encuentran en cada ciclo de muda, lo cual pasa semanalmente
en cucarachas jóvenes. Las células del animal tardan 48 horas para completar un
ciclo, lo que dejaría bastante tiempo a la radiación para afectarlas, pero no todas las
cucarachas lo harían al mismo tiempo. Eso significa que habría no afectadas por la
radiación y que por lo tanto sobrevivirían, al menos inicialmente.
Sacarosa ([α] D = + 66, 5º) + H₂O → D-glucosa ([α] D = + 52, 5º) + D-fructosa ([α] D
= -92º)
Las enzimas amilasas son empleadas en la fabricación de pan para romper glúcidos
complejos como el almidón, presente en la harina, en azúcares simples.
La levadura puede entonces alimentarse de esos azúcares simples y convertirlos
en productos de fermentación alcohólica, entre ellos el gas carbónico. Este proceso
da sabor al pan y leva la masa. Las células del grano de trigo, así como la harina
que de él se deriva contienen amilasas, pero en la masa estas enzimas necesitan
mucho tiempo para liberar cantidades significativas de azúcares a partir del almidón.
Este es el motivo de los habituales largos tiempos de fermentación (muy
especialmente en ciertas masas). Las técnicas modernas de elaboración de masas
incluyen la presencia de amilasas, aportadas por la harina de malta e incluso
amilasas fúngicas, para facilitar y acelerar estos procesos.
La lipasa es una enzima que se usa en el organismo para disgregar las grasas de
los alimentos de manera que se puedan absorber. Su función principal es catalizar
la hidrólisis de triacilglicerol a glicerol y ácidos grasos libres. Las lipasas se
encuentran en gran variedad de seres vivos.
Hay que destacar que la producción de jugo gástrico está controlada por dos
mecanismos:
Las Proteasas son enzimas que rompen los enlaces peptídicos de las proteínas.
Usan una molécula de agua para hacerlo y por lo tanto se clasifican
como hidrolasas. Es una enzima secretada por el páncreas que participa en la
degradación de las proteínas o peptonas, resultantes de la acción de la pepsina
gástrica. La proteasa se secreta en forma de proenzima y es activada por el jugo
intestinal. Se administra junto con las otras proenzimas pancreáticas
(amilasa, lipasa) cuando existe disminución de las secreciones pancreáticas.
Las personas que tienen deficiencia son más susceptibles a las infecciones
por hongos, bacterias y virus, ya que el cuerpo no tiene esa primera línea para
romperlos. La falta de proteasas también puede dar lugar a problemas tales como
enfermedades de deficiencia de calcio e hipoglucemia. Las proteínas son
necesarias para llevar calcio al torrente sanguíneo, y si el cuerpo lo procesa
incorrectamente, no recibirá la cantidad adecuada para prevenir enfermedades
como la osteoporosis o la artritis. Dado que la proteína también se convierte
en glucosa, si no se convierte correctamente, el nivel de azúcar en la sangre del
cuerpo se reducirá a niveles peligrosos. Para las personas que son deficientes en
proteasas, la terapia de enzimas está disponible para ayudar a mantener niveles
saludables.
Papaya: Se trata de una fuente muy potente de la enzima papaína de proteasa, así
como una enzima similar llamada chmyopapain. Estas enzimas tienen un
mecanismo anti-inflamatorio y también puede desempeñar un papel en la
cicatrización de quemaduras.
Piña: La piña es una fuente excelente del compuesto de bromelina que contiene
proteasa y se cree que ayuda en la digestión, así como en la reducción de la
coagulación sanguínea y la inflamación. Además, la bromelina puede tener la
capacidad de reducir el crecimiento de ciertos tipos de tumores. La bromelina se
extrae con frecuencia desde el núcleo o tallo de la piña para su uso en suplementos.
Kiwi: El kiwi contiene actinidina, una enzima proteolítica con actividad similar a la
papaína. La actinidina representa la mitad del contenido de proteínas solubles del
kiwi. En algunos casos, la actinidina puede ser un alérgeno y es a veces relacionada
con una reacción de hipersensibilidad pocos minutos después de comer kiwi. El
zumo de fruta de kiwi se utiliza a veces como un ablandador de carne, debido en
parte a la actividad proteolítica de la actinidina.
1. OBJETIVOS
2. MATERIALES
Un animal (cucaracha, grillo, etc.)
Equipo de disección
Toallas de papel y algodón
Tubos de ensayo
Cajas de Petri
Pipetas y goteros
Trozos de película fotográfica velada
Cinta de enmascarar
Mortero y mango en congelador
Gradilla
Baños de maría a 37 °C y 100 °C.
REACTIVOS
Solución de NaCl al 0.87%
Solución de sacarosa al 5%
Solución de glucosa al 5%.
Solución de NaOH al 0.005 N
Éter o Cloroformo
Solución de almidón al 1% recién hervido
Fenolftaleína
Lugol
Reactivo de Benedict
Aceite de oliva
MÉTODO
Se duerme el animal con éter o acetona y con la ayuda del equipo de disección se
extrae el aparato digestivo, dividiéndolo luego en 4 partes: Buche, proventrículo,
intestino medio e intestino posterior, con la debida indicación del profesor (a) o
monitor (a).
Proventrículo
Sacar 2 mL del tubo TD para llevarlo al baño de maría a 100 °C y dejar por 10
minutos en agua hirviendo.
Se toman 6 tubos previamente identificados con cada una de las fracciones del
sistema digestivo, las dos últimas se identificarán como controles: negativo y
positivo, respectivamente.
Se toman 6 tubos previamente identificados con cada una de las fracciones del
sistema digestivo, las dos últimas se identificarán como controles: negativo y
positivo, respectivamente.
Observar y concluir.
A los 5 primeros tubos, se les agrega los reactivos en el siguiente orden estricto:
1 mL de agua destilada
3 gotas de aceite de oliva
2 gotas de fenolftaleína
Solución de NaOH al 0.005 N hasta obtener color rosado claro
0.5 mL del extracto correspondiente
Incubar a 37 °C por 10 minutos.
Luego, se titulan todos los tubos contando la cantidad de NaOH (0.005 N) que se
gastan por cada tubo, para llegar de nuevo al color rosado claro. A mayor volumen
gastado de NaOH, mayor actividad de las lipasas. Analice los resultados.
3. PREGUNTAS
• El Na2HPO4 toma tiempo disolverlo, pero después de una agitación vigorosa disuelve.
• El azul de metileno es muy importante para visualizar los resultados por lo tanto no
puede ser muy claro ni muy oscuro, la clave es tomar 10 gotas de azul al 1% y
adicionarle 50ml de agua además no es necesario cubrir el recipiente con papel
aluminio debido a que NO ES FOTOSENSIBLE.
INTRODUCCIÓN
A continuación, comienza el proceso por medio del cual se utiliza el oxígeno y que
se conoce como respiración celular. Se realiza en una serie de etapas catalizadas
por enzimas que están directamente asociadas con la producción de ATP. La
cadena de intermediarios está dispuesta en forma tal que cada vez que los átomos
de hidrógeno pasan de un intermediario a otro, se libera una pequeña cantidad de
energía que es acumulada en una molécula de ATP. La cadena se conoce como
cadena de electrones y el proceso como fosforilación oxidativa.
De esta manera, la glucólisis se define como una serie de reacciones que extraen
energía de la glucosa al romperla en dos moléculas de tres carbonos llamadas
piruvato. La glucólisis es una vía metabólica ancestral —o sea, que su evolución
ocurrió hace mucho tiempo— y se encuentra en la gran mayoría de los organismos
vivos hoy en día.
Al final de la glucólisis nos quedan dos moléculas de ATP, dos de NADH y dos de
piruvato. Si hay oxígeno presente, el piruvato se puede degradar (oxidar) hasta
dióxido de carbono en la respiración celular y así obtener más moléculas de ATP. Y
en ausencia de oxígeno sigue la ruta de la fermentación.
El NADH no puede solo estar por ahí en la célula, acumulándose. Eso es porque
las células solo tienen un cierto número de moléculas de NAD+, que va y regresa
entre sus estados oxidado NAD+ y reducido NADH:
Principalmente, hay dos formar de lograr esto. Cuando hay oxígeno presente,
el NADH puede donar sus electrones a la cadena de transporte de electrones y así
regenerar NAD+ para usar en la glucólisis. (Se produce un poco de ATP). En
ausencia de oxígeno, las células pueden usar otras vías más simples para
regenerar NAD+. En dichas vías, el NADH dona sus electrones a una molécula
aceptora en una reacción que no genera ATP, pero regenera NAD+ y la glucólisis
puede continuar. Este proceso se llama fermentación.
Las células musculares llevan a cabo la fermentación láctica, pero solo cuando
tienen muy poco oxígeno como para continuar la respiración aeróbica, como cuando
haces ejercicio muy intenso. Alguna vez se pensó que la acumulación de lactato en
los músculos era responsable del dolor causado por el ejercicio, pero
investigaciones recientes sugieren que tal vez esa no sea la razón.
1. OBJETIVOS
2. MATERIALES
• Tubos de ensayo.
• Beakers.
• Centrífuga clínica.
• Pipetas y gasa.
• Equipo de disección.
• Hielo y baño María.
• Músculo de cerdo y corazón
3. REACTIVOS
• Solución salina al 0.9%.
• Carbón activado.
• Cianuro de Potasio (KCN) al 0.5%.
• Azul de Metileno al 1/5000.
• Agua destilada.
• Aceite mineral.
• Fenildiamina al 0.2%.
• Buffer Fosfato pH 7.4 a 0.1 N
• Succinato de Sodio 0.1 N.
• Malonato de Sodio 0.1 N.
4. PROCESO
Colocar el corazón en hielo y remover el tejido muscular de la pierna del animal para
la preparación de la enzima y la coenzima de la deshidrogenasa láctica.
1. Preparación de la Enzima
2. Preparación de la Coenzima
Luego de enfriarse, filtre con gasa y centrifugue durante unos 5 minutos a 3500 rpm.
Retirar el sobrenadante y rotular como “COENZIMA”. Guardar en hielo.
Agite los tubos con frecuencia y anote cualquier cambio de color. Explique la razón
para el comportamiento de cada tubo.
3. Preparación del Complejo enzimático
Lave bien el tejido del corazón con solución salina al 0.9% y con una tijera córtelo
en pequeños trocitos.
Agite los tubos con frecuencia y anote cualquier cambio de color. Explique la razón
para el comportamiento de cada tubo.
Mezcle por inversión, deje reposar los tubos y anote el tiempo necesario para la
decoloración del azul de metileno. Explique los resultados en cada tubo.
c. Inhibición Competitiva de la Deshidrogenasa Succínica por el Malonato:
Prepare 3 tubos de ensayo con las siguientes sustancias. Recuerde que la enzima
es la última en ser agregada.
Mezcle por inversión. Anote el tiempo requerido para la decoloración del azul de
metileno. Explique los resultados obtenidos en cada tubo.
RECUERDE
5. PREGUNTAS
Observaciones
1. Cortar tirillas de papel milimetrado y colocar una en cada mesa.
2. Fijarse si la levadura esta vencida para pedir a los estudiantes que traigan
3. en caso de que el baño maría este malo calentar agua hasta 37°C y repartirla
en beakers grandes a cada grupo para que introduzcan los tubos de ensayo con
solución.
1. MARCO TEÓRICO
De todos los organismos vivientes solo unas pocas especies son estrictamente
anaeróbicas, esto es, que solamente pueden vivir en ausencia de oxígeno. La
mayoría son microorganismos, en particular aquellas especies propias del ambiente
que tienen poco oxigeno o que carecen de él, es decir, en suelos, aguas profundas
o en el lodo marino. Entre ellos algunos son patógenos (organismos que producen
enfermedades). Un ejemplo de las bacterias del suelo Clostridium welchii, causa
de la gangrena gaseosa en infecciones de heridas. Sucede, sin embargo, que hay
gran cantidad de organismos que pueden vivir en ausencia y en presencia de
oxígeno. Entre ellos se incluyen no solo microorganismos, sino también muchos
animales superiores y plantas. Incluso ciertos tejidos del organismo pueden
funcionar anaeróbica o aeróbicamente.
Las células que pueden vivir bajo ambas condiciones, reciben el nombre de células
facultativas. El aspecto significativo de ellas es que cuando el oxígeno está ausente
de su medio ambiente, puede extraer energía de la glucosa, mediante el mismo tipo
de mecanismo de fermentación anaeróbica que utilizan las aeróbicas estrictas,
mientras que en presencia de oxigeno prefieren oxidar completamente los alimentos
hasta la formación de agua y gas carbónico mediante dicho elemento.
Glucosa + levadura ----- alcohol + gas carbónico + calor + productos secundarios + ATP
2. OBJETIVOS
• Observar los efectos, en una situación simulada, del glicólisis que en realidad se
efectúa en los seres vivos.
• Verificar la inhibición ocasionada en la ruta metabólica del glicólisis por el NaF.
• Determinar, por medio de la literatura, la clase y el modo de inhibición de los
fluoruros, lo mismo que el sitio de acción dentro de la ruta glucolítica.
3. MATERIALES
• Tubos de ensayo.
• Beakers de 300 mL.
• Baño de maría.
• Tapones.
• Papel milimetrado.
4. REACTIVOS
5. MÉTODO
Tubo A: Llene una tercera parte con suspensión de levadura, luego agregue agua
destilada hasta llenarlo totalmente.
Tubo B: Llene una tercera parte con suspensión de levadura y agregue solución de
glucosa hasta llenarlo totalmente.
Este tubo se hará también con otros carbohidratos como: fructosa, galactosa,
sacarosa, lactosa y maltosa, así que márquelos como B1, B2, B3, …
Tubo C: Llene una tercera parte con suspensión de levadura, agregue otra tercera
parte con solución de glucosa y termine de llenarlo con solución de fluoruro de sodio
(NaF).
Debe llevar los tubos debidamente marcados y dentro del beaker al baño de maría
a 37 °C y examinarlos cada diez minutos hasta completar 60 (6 lecturas). Anote
cada 10 minutos los resultados en el cuadro.
A (Agua) - control
B (Glucosa) – acción acorde al tipo de
sacárido
C (glucosa + NaF) – acción del inhibidor
6. PREGUNTAS
Observaciones
Para empezar, es necesario reconocer que todos los seres vivos dependen en
último término de la fotosíntesis. Este proceso ocurre gracias a la luz radiante del
sol, la fotosíntesis ocurre no sólo en las familiares plantas verdes, sino en multitud
de microorganismos acuáticos. Estos organismos fotosintéticos utilizan cada año
cerca de 550 billones de toneladas de anhídrido carbónico (CO2) y 25 billones de
toneladas de H20 en el proceso de fotosíntesis. Cerca del 90% de la actividad
fotosintética ocurre en el mar.
Sin embargo, el proceso no es tan simple y ocurre en varios pasos. Esto ocurre en
el cloroplasto. El primero de ellos la “captura” de la luz por la clorofila y utilización
de esta energía para romper el anhídrido carbónico y formar los carbohidratos. La
velocidad de la primera etapa, llamada reacción lumínica, aumenta con la intensidad
luminosa (dentro de ciertos límites), pero no con la temperatura. En la segunda
etapa, llamada reacción en la oscuridad, la velocidad aumenta con la temperatura
(dentro de ciertos límites), pero no con la intensidad luminosa.
Luz solar. Proviene del Sol y la planta la puede captar por sus hojas. En ellas tiene
un pigmento de color verde llamado clorofila, que se encuentra en el interior de los
cloroplastos (las células vegetales son las únicas que poseen cloroplastos). La
clorofila se encuentra esencialmente en hojas y tallos tiernos.
Pigmentos vegetales
Entre todos los caracteres más externos de los vegetales, el más notable y
característico es probablemente el color. Algunos de los pigmentos que lo
condicionan están estrechamente ligados a sus actividades fisiológicas. Es posible
encontrar en el reino vegetal todos los matices y combinaciones de colores del
espectro, pero existe un predominio general de los colores primarios: verde,
amarillo, rojo, azul.
MATERIALES
REACTIVOS
• Medio de preparación:
Tris 20 mM.
KCI 40 mM.
Sucrosa o sacarosa 4 mM
pH 7.8.
• Medio de lavado:
KC 140 mM.
MgCl2 2 mM.
Sucrosa o sacarosa 4 mM.
pH 7.8.
• Pyocianina.
• HCL 1.0 mM.
• NaOH 1.0 mM.
• Bicarbonato de sodio (NaHCO3) (al 2, 4, 6, 8 y 10%)
• Gaseosa Bretaña (al 2, 4, 6, 8 y 10%)
• DCFIF: 2-6 Diclorofenol indofenol
PROCEDIMIENTO
1. Método para aislar cloroplastos
Repetir el proceso, pero separando los tubos de ensayo con las diluciones de soda
y bicarbonato de sodio que mayor producción de burbujas haya obtenido del
procedimiento anterior que hizo con la solución de cloroplastos.
Tabla No. 1 Conteo de burbujas en plantas acuáticas a diferentes intensidades
lumínicas.
INTENSIDAD 1 2 3 4 5 6 7 8 Promedio
LUMÍNICA de
Vatios – W burbujas
25 W
40 W
60 W
10 W
120 W
LUZ DÍA
Filtre el preparado para separar las partes sólidas del alcohol teñido y ponga 10 mL
del preparado en un tubo de ensayo A y 10 mL en otro llamado B.
Corte una tira de 2 cm de ancho de papel de filtro. Ponga 2 gotas del preparado de
clorofila a unos pocos milímetros de la orilla de la tira que recortó.
Llene un beacker con etanol hasta que toque ligeramente la tira de papel dejada
hacia adentro sin tocar la muestra de clorofila. Coloque con cuidado el papel de filtro
de manera que quede como se muestra en la figura 3.
¿Qué ocurrió con la gota del preparado de clorofila? Este procedimiento se llama
cromatografía y consiste en la separación de compuestos de una mezcla tomando
en cuenta algunas características físicas o químicas de las sustancias a separar.
¿En qué orden están las manchas de color y a qué compuestos corresponden?
Microscopios
Estereoscopios
Jeringas de insulina
Colorante
acetorceína
Observaciones
1. Se deben pedir las larvas con una semana de anticipación en el laboratorio de Jorge,
justo enseguida del 327.
INTRODUCCIÓN
Los cromosomas son estructuras filamentosas de tamaños y formas variables
observables durante la división celular eucarióticas. Están constituidas de
cromatina (ácidos nucleicos y proteínas), y el número por núcleo es característico
de cada especie; así por ejemplo en el hombre hay 46, en el sapo 22, en el tomate
24, la rata 42, en la mosca 8, etc. Los cromosomas politénicos y plumosos son
considerados como gigantes.
Además del cambio en el tamaño, los cromosomas politénicos presentan otras dos
características. En primer lugar, los cromosomas homólogos están asociados entre
sí en toda su extensión. Esta condición, denominada apareamiento somático es
propia de la mitosis de la mayoría de los Dípteros. La otra característica peculiar es
que los cromosomas muestran un patrón particular de bandeo transversal que
consiste en zonas más oscuras, llamadas bandas, que alternan con zonas claras,
llamadas interbandas. Cuando se observan al microscopio óptico se identifican
como bandas oscuras y claras transversales alternantes.
Aunque la mayoría de las bandas son continuas a través del cromosoma, otras
aparecen como una serie de puntos. Éste
bandeo es reproducible de núcleo a núcleo,
formando un patrón constante de tal manera
que los cromosomas pueden ser identificados
y mapeados en toda su longitud. Hay
aproximadamente 5000 bandas y 5000
interbandas en total en el genoma
de Drosophila melanogaster.
FIGURA 2. Drosophila Melanogaster
2. REACTIVOS
• Solución salina al 0.8%.
• Colorante acetorceína.
3. MATERIALES
• Larvas del género Drosophila.
• Portaobjetos.
• Cubreobjetos.
• Dos agujas finas.
• Gotero.
• Papel absorbente.
4. MÉTODO
En un portaobjetos se coloca una larva a la que
previamente se le ha agregado una gota de
solución salina.
5. PREGUNTAS
5.6 A partir del siguiente esquema, analice los cambios de la Drosophila de larva a
adulto.
Agua destilada
Agregar 75 mL de NaCl
Se pesan 35, 06 g de NaCl y 6M y mezclarla con 24 mL
NaCl 6 M se disuelven en 100 mL de de una solución de EDTA
Buffer de agua destilada. al 0,5M pH 8. Luego
lisis II Pesar 3,78 g de EDTA y ajustar la mezcla a un pH
disolverlo en 24 mL de agua de 8 y completar con agua
EDTA 24mM
destilada. Llevar la solución a destilada hasta 1 L.
pH 8
un pH de 8, para que se pueda
disolver en el agua.
Agua destilada
Mezclar 10 mL de buffer
Mezcla Buffer de lisis II
de lisis II con 5 mL de
de lisis Tomar 61,2 g de Perclorato y
Perclorato de Perclorato y 700 μL de una
llevarlo hasta 100 mL con agua solución de SDS.
sodio 5M
destilada
SDS 20% Pesar 20 g de SDS y diluirlo en
100 mL de agua destilada
Observaciones
1. Almacenar el Buffer de lisis I en un frasco de vidrio oscuro o ámbar en la nevera.
2. Tanto la mezcla de lisis como el buffer de lisis II se almacenan en la nevera en tubos
de Falcon y recipiente de vidrio respectivamente.
Por grupos deben traer vacutainer con EDTA, camisa y aguja. Cada estudiante debe traer
guantes.
PRÁCTICA No. 12 EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE SANGRE
PERIFÉRICA POR EL MÉTODO DE SALTING OUT
MARCO TEÓRICO
Los ácidos nucleicos son polímetros de nucleótidos, los cuales constan de una base
nitrogenada, una pentosa y un grupo fosfato. El tipo de pentosa determina que el
ácido nucleico sea ADN o ARN. En el ADN la pentosa es la 2-desoxirribosa,
mientras que en el ARN es la ribosa. La ausencia de un grupo hidroxilo en el
carbono 2' de la pentosa da al ADN una gran resistencia a la hidrólisis alcalina,
contrariamente al ARN, que a pH básico y a 37 º C se rompe los nucleótidos en
pocos minutos.
Método Salting Out: En este método se utiliza un buffer para destruir las
membranas nucleares, liberando a la solución los ácidos nucleicos.
MATERIALES Y EQUIPOS
• Jeringas de 5 cc
• Vacutainer con EDTA
• Viales de 1.5 mL
• Micropipetas de 10, 20, 200 y 100 μL
• Vórtex
• Centrífuga
• Pipetas Pasteur
• Guantes Quirúrgicos
• Marcadores Indelebles de Punta Fina
REACTIVOS
Preparación de Buffer:
o Buffer de Lisis I
o Buffer de Lisis II
o TE (Tris-EDTA) pH 7.4
Nota: Usted debe hacer los cálculos respectivos para trabajar con 2 mL de sangre.
1. PROCEDIMIENTO
• Mezclar por inversión hasta ver la aparición de una madeja blanca que
corresponde, en su mayor parte, a la sal de ADN llamada Desoxirribonucleato
de sodio.
• Transferir a un Vial (tubo pequeño) nuevo y estéril de 1.5 mL, la madeja de ADN
utilizando una micropipeta de 1000 μL, descartar el exceso de líquido y lavarla
adicionando 1 mL de Etanol al 75%.
PREGUNTAS
1. ¿Qué papel desempeñan cada uno de los reactivos en esta práctica? (los buffers
de Lisis I y II, el SDS, el Tritón X-100, el Isopropanol frío, el Perclorato de Sodio, el
NaCl y el Etanol)
2. ¿Por qué se utiliza como anticoagulante el EDTA y no la Heparina?
3. Mencione y explique otros métodos para la extracción del ADN.
4. ¿Qué técnicas o metodologías se conocen para medir la cantidad de ADN que
5. posee una célula?
6. ¿En qué consiste las técnicas de “Southern blot” y “Northern blot”?
BIBLIOGRAFÍA
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York: Gerland publishing. Inc.
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Metropolitana.
Horton, H. R., Moran, L.A., Ochs, R.S. Rawn, J.D. y Scrimgeour, K.G. (1995).
Bioquímica. Primera Edición. México: Prentice Hall-Hispanoamericana, S.A
Susuki, D.T., Griffiths, A., Miller, J. y Lewotin, R. (1992). Genética. Cuarta Edición.
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