BIOLOGÍA CELULAR

TEMA: MICROSCOPIA

El ojo humano no logra distinguir objetos de menos de 50 micras de diámetro ni consigue resolver dos líneas separadas
por menos de 100 micras (es decir, las ve como una sola línea).

Para observar elementos tan pequeños es necesario disponer de lentes de aumento. Estas lentes se conocen desde
tiempos de Arquímedes, pero la óptica como disciplina se comenzó a desarrollar en el siglo XIII con el monje franciscano
Roger Bacon.

Anton Van Leeuwenhoek (Holanda, 1632-1723), un pulidor de lentes aficionado, logró fabricar lentes lo suficientemente
poderosas como para observar bacterias, hongos y protozoos, a los que llamó "animálculos".

El primer microscopio compuesto fue desarrollado por Robert Hooke.

A partir de éste, los avances tecnológicos
permitieron llegar a los modernos microscopios de nuestro tiempo, los que existen de varios tipos y
son usados con diferentes fines.

TIPOS DE MICROSCOPIOS

MICROSCOPIOS ÓPTICOS

MICROSCOPIO COMPUESTO

El microscopio compuesto es un instrumento óptico que tiene un doble aumento. El primer aumento lo realiza el
objetivo, el cual produce una imagen real y define la resolución del sistema. El segundo aumento lo efectúa
el ocular, que produce una imagen virtual aumentada de la imagen real formada por el objetivo. La imagen
observada es aumentada e invertida. El microscopio compuesto está constituido por un sistema mecánico que sostiene
un sistema óptico formado de diferentes lentes.

Microscopio de campo claro: es el microscopio óptico compuesto utilizado en la mayoría de los laboratorios. Para
formar una imagen a partir de un corte histológico usa luz visible, por esto la muestra debe ser lo bastante fina como
para que los haces de luz puedan atravesarla. También se usan métodos de tinción, según las necesidades, con el fin de
aumentar los detalles en la imagen.

Microscopio de fluorescencia: permite la observación de estructuras fluorescentes, ya sea naturales o artificiales.

Microscopio de barrido confocal: se usa para estudiar la estructura de sustancias biológicas. Combina partes de un
microscopio de campo claro con equipo fluorescente y un sistema de barrido que emplea un rayo láser. A través de una
computadora se reconstruye la imagen tomada por planos, a una imagen tridimensional.

Microscopio de luz ultravioleta: sus resultados se registran fotográficamente ya que la luz U.V. no es visible y daña la
retina. Se utiliza en la detección de ácidos nucleicos, que absorben esta luz.

Microscopio de luz polarizada: es una modificación del microscopio de campo claro. Debido al fenómeno de
birrefringencia se pueden observar sustancias cristalinas y moléculas fibrosas.

MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS

Microscopio electrónico de transmisión (MET): utiliza un haz de electrones para producir la imagen. Permite la
observación de detalles a escala macromolecular.
Microscopio electrónico de barrido (MEB): en este caso el haz de electrones no atraviesa la muestra, sino que choca
contra su superficie. Permite una gran magnificación de las imágenes.

M.E.B.

EL MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO

Es el más uitlizado en los laboratorios. Consta de dos distemas:

Sistema Mecánico

 Pie
 Vástago o columna o brazo
 Tornillos de ajuste macrométrico
 tornillo Micrométrico
 Tubo
 Platina
 Subplatina

Sistema Óptico

 De Observación Ocular
 Objetivo
 De iluminación condensador
 Espejo
 Fuente de luz
SISTEMA MECÁNICO

Este sistema sostiene al sistema óptico y aloja los elementos necesarios para la iluminación y enfoque del preparado.

Pie: brinda apoyo y estabilidad al aparato.

Vástago: soporta la platina, tubo y tornillos de ajuste macro y micrométrico.

Tornillo de Ajuste: provocan el desplazamiento del tubo o la platina en sentido vertical, lo que permite el enfoque.

Tubo: en su extremo superior se halla el ocular, y en el inferior el objetivo. Se trata de un cilindro metálico cuyo interior
se encuentra pintado de negro, lo que evita la reflexión de la luz. Normalmente tiene una longitud de 170 mm.

Platina: es una plataforma horizontal sobre la cual se coloca y sujeta el preparado a observar, tiene un orificio central
que permite el paso de la luz y un venier que posibilita la relocalización de los detalles de interés.

Subplatina: sostiene al condenador y se ubica por debajo de la platina.

SISTEMA ÓPTICO

Se compone de un sistema óptico de observación y un sistema óptico de iluminación; el primero consta de:

Objetivo: está formado por un sistema de pequeñas lentes ubicadas muy cercanas una de la otra, la que se halla en el
extremo distal del objetivo se denomina lente frontal. Los objetivos pueden ser objetivos a seco (no hay ninguna
sustancia interpuesta entre la lente frontal y el preparado), u objetivos de inmersión (entre la lente frontal y el preparado
se coloca una sustancia cuyo índice de refracción es muy similar al del vidrio).

Ocular: es un tubo cilíndrico con un diafragma fijo en el centro y una lente en cada extremo, la superior se denomina
lente ocular y la inferior lente colectora.

El sistema óptico de iluminación consta de:

Condensador: concentra el haz de luz sobre el plano del objeto que se encuentra en la platina. Debajo de él se
encuentra el diafragma iris que regula la cantidad de luz que llega al condensador.

Fuente de Luz: es una lámpara que está ubicada en la parte inferior del aparato, en caso de no poseerla debe ubicarse
una fuente de luz externa (lámpara incandescente común) aproximadamente a 30 cm. del espejo.

CARACTERISTICAS DE LOS OBJETIVOS:

 ESCALA DE REPRODUCCIÓN: relación lineal que existe entre el tamaño del objeto y su imagen, por ejemplo, 4:1,
40:1, 65:1, etc.

 PODER DEFINIDOR: es la capacidad del objetivo de formar imágenes de contornos nítidos.

 LÍMITE DE RESOLUCIÓN: es la menor distancia que debe existir entre dos objetos para que puedan visualizarse por
separado.

 PODER DE RESOLUCIÓN: es la capacidad de mostrar la imagen en sus detalles más finos. Está en relación inversa con
el límite de resolución.

 PODER DE PENETRACIÓN: es la propiedad de permitir la observación simultánea de varios planos del preparado. Es
inversamente proporcional a la escala de reproducción o aumento.

 AUMENTO TOTAL: Debemos notar que el ocular también tiene un aumento, por lo tanto el aumento total de la
imagen que observamos es el producto entre el aumento del objetivo y el del ocular. Ejemplo: si tenemos colocado el
objetivo cuya escala de reproducción es 40:1 y nuestro ocular tiene un aumento de 10x, entonces el aumento total será
40 x 10 = 400.

USO CORRECTO DEL MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO

1. Lo primero es conseguir una buena fuente de iluminación. Si la misma está incorporada al microscopio, enfocamos con
el objetivo de menor aumento, cerramos el diafragma de campo y movemos el condensador hacia arriba y hacia abajo
hasta que el contorno del diafragma se vea nítido. El diafragma se centra con los tornillos que lo sujetan a la subplatina.
Luego se quita el ocular y se verifica que la luz esté centrada. A medida que se abre el diafragma su contorno desaparece
del campo observado. Si la fuente de luz es externa, se quita el ocular, se coloca el objetivo de menor aumento, y se
mueve el espejo hasta centrar la luz. Recordemos que si tenemos condensador debemos usar la cara plana del espejo.

2. Volvemos a colocar el ocular y, siempre con el objetivo de menor aumento, colocamos el preparado sobre la platina.
Utilizando el tornillo el ajuste macrométrico enfocamos lo más claramente posible.

3. El condensador debe estar en la posición más alta y el diafragma abierto. Esto si el preparado está coloreado, sino el
diafragma debe estar cerrado.
4. Con el tornillo micrométrico se logra el enfoque fino según nuestra visión.

5. Modificamos la apertura del diafragma hasta obtener la cantidad de luz deseada.

6. Luego de estudiado el preparado con este objetivo, podemos pasar gradualmente a objetivos de mayor aumento,
corrigiendo la apertura del diafragma para cada uno de ellos.

7. En caso de utilizar el objetivo de inmersión, se coloca una pequeña gota de aceite sintético sobre el preparado y luego
se enfoca con sumo cuidado, recordando que este objetivo es el de menor distancia frontal y corremos el riesgo de
estropear el preparado y la lente frontal. Al finalizar el uso de este objetivo se deben retirar los restos de aceite con un
papel de carilina o una gasa embebida en xilol o solvente especial para limpieza de lentes, nunca se debe dejar sucio el
objetivo.

8. Cuando se termina de utilizar el microscopio se lo debe dejar de la siguiente manera:

- fuente de luz apagada
- condensador al tope
- diafragma abierto
- platina alta
- objetivo de menor aumento en posición
- todas las lentes limpias.

Guía de trabajo

1- Escribe sobre los tamaños relativos de las células y sus componentes

2- ¿Cuál es el límite de resolución del ojo humano?

3- Describe el microscopio compuesto

4- Diferencia entre microscopio de campo claro, de fluorescencia y de luz UV

5- Diferencia entre microscopio electrónico de transmisión y de barrido

6- Diferencia entre microscopio compuesto y microscopio electrónico

7- Cita y describe las partes del sistema mecanico y óptico del microscopio compuesto de campo claro

8- Qué es poder de resolución?

9- Como se calcula el aumento total

10- Cuales son algunos cuidados que se debe tener para el uso correcto de los microscopios?

11- Grafica un microscopio óptico y señala sus partes