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La tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial que se lleva utilizando en bacteriología desde

1875. (Salom, 2017)La técnica fue creada por un microbiólogo danés denominado Christian Gram y
supuso toda una revolución para el mundo de la microbiología ya que permitía a los científicos
diferenciar claramente la morfología de las bacterias, además de que podían distinguir entre
bacterias gram positivas, aquellas que se teñían de morado, de las bacterias gram negativas, las que
tras la tinción se ven de color rosa o rojizas.

En el laboratorio se pudo llevar a cabo la técnica de tinción de Gram sin mayor problema ya que una
vez hecho paso a paso el procedimiento, los resultados esperados deberían darse; sin embargo,
pese a completar el procedimiento, la práctica de laboratorio no cumplió con los objetivos
propuestos ya que los tintes utilizados no eran de alta calidad. Esto se comprobó en el laboratorio
porque al realizar el procedimiento no se pudo hacer la diferenciación bacteriana completamente
debido a que no se obtuvo la claridad necesaria para verlas; al quedar la muestra tan obscura
dificulta en mayor medida la visibilidad de las bacterias.

Pero no solamente en los tintes se puede afirmar la falla en la práctica porque los errores que
pudieron haber causado la variabilidad en los resultados se pueden encontrar en: El tiempo
estimado para el cambio en la muestra en el mechero, ya que al dejarla excesivamente en el fuego
hace que se altere la muestra, pudiendo incluso arruinarse. También se puede evidenciar errores en
el cuidado que se tuvo con la muestra porque, por ejemplo, al exponerla a una presión alta de agua
pudo haberse arruinado la mayor parte de la visibilidad bacteriana, así como también el exceso de
cada tinte a la hora de aplicarlo ya que puede mancharla, afirmarla excesivamente o dañarla
completamente.

(Hernández Vidal et al., 2010) Tras recoger la muestra de bacterias que se quieren teñir con
un isopo se procede a extenderla en un portaobjetos y a secarla o bien dejándola secar a
temperatura ambiente o con un mechero, con cuidado de no quemar las bacterias. El siguiente
paso es fijar la muestra en el portaobjetos mediante la aplicación de metanol durante un
minuto. Posteriormente se aplica el tinte cristal violeta, al portaobjetos y se deja reposar un
minuto. Este colorante puede atravesar cualquier tipo de pared bacteriana por lo que tiñe
tanto bacterias gram positivas como gram negativas.

Luego se enjuaga la muestra con agua y se aplica lugol, de forma que cubra toda la muestra
y se espera durante un minuto. El lugol es un compuesto formado principalmente por yodo
que en este caso lo que hace es fijar el colorante violeta aún más a la muestra. El yodo del
lugol y el cristal violeta forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared
de las células bacterianas. Posteriormente el portaobjetos debe lavarse con una mezcla de
alcohol y acetona durante 30 segundos, en este momento, es cuando finaliza realmente la
tinción de Gram, ya que esta mezcla de alcohol y acetona lo que hace es disolver los
complejos de lugol y cristal violeta. De forma opcional, puede realizarse un último paso que
consiste en someter a las bacterias a una última tinción para teñir aquellas que son gram
negativas de color rosa o rojo. Se hace aplicando durante un minuto un colorante como
la safranina y luego se lava con agua.

Sin embargo,
Salom, E. (2017). Tinción de Gram: cómo se hace y para qué se utiliza. Retrieved from
https://cienciatoday.com/tincion-de-gram

Hernández Vidal, G., Ramírez Romero, R., Rodríguez Tovar, L., Mora Valdez, F., Vidales Contreras,
J., & Hernández Escareño, J. (2010). Retrieved from
http://www.scielo.org.mx/pdf/vetmex/v41n4/v41n4a1.pdf

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