PRACTICA N°1: SISTEMA DE DETECCION MOLECULAR DE PATOGENOS

(MDS) 3MTM

I. INTRODUCCION:

Es una poderosa e innovadora combinación de tecnologías únicas

para la detección de patógenos que emplea la amplificación isotérmica
de ácidos nucleicos (ADN) + la detección por bioluminiscencia.

Es un sistema compacto, resultado de diversas pruebas aplicadas, en

el que cada componente ha sido optimizado para mejorar la
productividad, disminuir tiempos de resultados y asegurar la precisión.
La combinación innovadora de tecnologías ayuda a incrementar la
productividad, liberar los productos rápidamente y proteger el negocio
y sus ganancias.

Posee una tecnología basada en la amplificación isotérmica y

bioluminiscencia; alta especificidad al momento de la detección; utiliza
un solo enriquecimiento y un mismo protocolo para todos los
patógenos; Permite correr 96 pruebas y distintos patógenos a la vez;
es un equipo económico y confiable que ofrece menor repetición de
pruebas y a través de su software, incrementa la productividad del
laboratorio y disminuye errores ayudando a tomar decisiones críticas
rápidamente.

El equipo es de diseño sólido y portátil, sin necesidad de re calibración.

Ofrece un diagnóstico automático al inicio y no posee piezas móviles
o ventiladores de refrigeración. No necesita termocicladores, filtros o
detectores de fluorescencia costosos y el calentador es extraíble para
una fácil limpieza y descontaminación.

Los ensayos de detección molecular MDA2 están disponibles para

Salmonella 2; Listeria 2; Listeria monocytogenes 2 Listeria; E. coli 2
O157 (inclusive H7); Cronobacter 2 con resultados en solo 24 horas.
 II. OBJETIVOS:
 Presentar métodos rápidos oficiales como alternativa a la metodología
tradicional en el análisis de alimentos.
III. MATERIALES
3.1. Muestras biológicas
o Muestra de alimentos: 01 paquete de galletas “OREO”,100g de carne
cruda.
3.2. Insumos y equipos
o Equipo de detección molecular MDS 3MTM.
o Calentador (T=100°C x 15 min)
o Kit MDA2 Salmonella sp
o Micropipeta Mono Canal y multi Canal
o Puntas estériles con filtro (20ul)
o Placas petrifilm 3mtm;Aerobios,Coliformes, S. aureus,Mohos y
levaduras.
o Diluyente = Agua peptonada Buferada ISO.
o Balanza gramera
o 03 incubadoras:una seteada a 35 +/-1°C,otra a 25 o 28 °C y otra a
41.5 °C +/-1°C.
o 01 dispensador de alcohol
o 05 litros de agua destilada
o 01 rollo de papel toalla
3.3.Indumentaria
o 01 caja de guantes de grado alimentario
o 02 mecheros y encendedor
o 02 guardapolvos
o 01 caja de mascarillas
o 01 caja de tocas
IV. PROCEDIMIENTO
4.1. Análisis de muestras alimentarias para el recuento de bacterias
indicadoras.
o Desinfectar la zona de trabajo y encender el mechero.
o Desinfectar la balanza y equipos a utilizar.
o Pesa 11 gramos de muestra y adicionar al frasco conteniendo el medio
de cultivo (99ml).
o Tomar 1mL de la dilución 10-1 y sembrar en la Placas petrifilm 3mTM
de Aerobios,Coliformes, S. aureus,Mohos y levaduras,E.coli y
S.aureus.
o Dejar incubar a 35 +/-1°C por 24 horas. Las Placas petrifilm de Mohos
y levaduras se dejarán incubar incubando a 28°C por 48 horas.
o Tras el tiempo de incubación, realizar la lectura e interpretación.
4.2. Análisis de muestras alimentarias para la detección de patógenos.
o Desinfectar la zona de trabajo y encender el mechero.
o Desinfectar la balanza y equipos a utilizar.
o Pesa 25 gramos de muestra y adicionar al frasco conteniendo el medio
de cultivo (225ml).
o Dejar incubar a 37 +/-1°C o 41.5 +/-1°C por 24 horas (La temperatura
depende del tipo de muestrea)
o Tras el tiempo de incubación transferir 20ul de la muestra al tubo de lisis
(viene en el Kit MDA2 Salmonella sp)

o Calentar el tubo de lisis a 100°C x 15 min.

o Dejar a temperatura el tubo de lisis a 20-25°C x 5 min

o Transferir 20ul del lisado al tubo reactivo y mezclar por 5 veces el lisado
con la perla del tubo reactivo. (viene en el Kit MDA2 Salmonella sp)

o Cargar los tubos reactivos en el soporte que ingresa al equipo MDS

3MTM.Ingresar el soporte al equipo e iniciar la corrida.
 o Observar los resultados en el software MDS 3MTM

V. RESULTADOS:

VI. COMENTARIO:
Al utilizar amplificación del ADN isotérmica y detección de
bioluminiscencia para superar las limitaciones de los sistemas más
antiguos, estos ensayos detectan un nivel tan bajo como 1 CFU del
patógeno objetivo por muestra, incluso en los matrices de muestras más
desafiantes. Los reactivos listos para usar minimizan el margen de error,
un proceso de cambio de color le brinda mayor confianza y un flujo de
trabajo racionalizado que reduce el tiempo de los técnicos en un 30 %. Es
fácil de aprender, fácil de usar y fácil de implementar.