UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA

BIOQUIMICA Y FARMACIA
CULTIVOS CELULARES
Docente: Mgr. Maía Isabel Ramirez Orellana

ESTUDIANTES: Johanna Velez, Andrea Cueva

FECHA: 2018/10/08

CUESTIONARIO N°1

1. ¿Qué son los cultivos celulares?

Conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células 'in vitro', manteniendo al
máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas.

2. Coloque al menos tres eventos históricos importantes (dentro del desarrollo de los cultivos
celulares).
 En 1907, Ross Granville Harrison (iniciador de los cultivos de tejidos animales) fué el primer
científico que empleó técnicas in vitro para el estudio de fenómenos in vivo, realizando
cultivos de médula espinal embrionaria de anfibios.
 Lograr un medio nutritivo adecuado, era una limitación, Burrows en 1910 empleó plasma de
pollo para nutrir los explantes de tejidos embrionarios de pollo. Este medio se reveló mucho
mejor que los anteriormente probados, permitiendo observar el crecimiento del tejido
nervioso, corazón y piel.
 Rous y Jones en 1916 emplearon por vez primera extractos enriquecidos en tripsina para
disociar las células de embriones de pollo, estableciendo el primer cultivo celular, además
desarrollaron numerosos métodos de manipulación en condiciones de asepsia que aún hoy
día se utilizan.

3. Mediante un esquema de llaves coloque los diferentes tipos de cultivos que existen
Cultivo de órganos:
Órgano sobre rejilla situada en la interfase líquido-gas de un medio de donde obtiene nutrientes y
al que libera desechos.
Permite mantener la arquitectura característica del tejido “in vivo” e interacciones histológicas, es
posible mantener los tipos celulares diferenciados
Limitaciones:
No crecen mucho (proliferación celular limita a células embrionarias periféricas). No se pueden
propagar. Necesario nuevo explanTe por cada experimento requiriendo más trabajo y limitada
reproducibilidad de la muestra.
Cuantificar es difícil y la cantidad de material que se puede cultivar es reducida.

Explantes primarios:
Fragmento de tejido o de órgano es colocado en interfase sólido-líquido de soporte de vidrio o
plástico. Células se adhieren a la superficie y células de la
periferia del explante pueden migrar y proliferar por la superficie del soporte.
Útil en pequeñas cantidades de tejido (biopsias de piel)
 Cultivo celular primario
Más utilizado.
Se obtiene a partir de explantes primarios o suspensiones de células disgregadas.
Se pierden interacciones célula-célula y célula-matriz extracelular.
Células son capaces de proliferar y población crece notablemente.
Cuando alcanzan la confluencia (ocupan toda la superficie disponible) los contactos entre ellas
inhiben proliferación y crecimiento se detiene: en esta etapa se debe hacer un subcultivo o pase
(transplantar las células nuevo soporte). Pueden ser en:
 Monocapa
 Suspensión

Cultivos histotípicos y organotípicos

o Histotípicos:
Un solo tipo celular.
Alcanzar una elevada densidad celular (como ocurre en los tejidos).
Crea estructura tridimensional parecida a tejido original
o Organotípicos:
Varios tipos celulares que interaccionan entre sí (intenta parecerse lo más posible a la original)
Creación “in vitro” de tejidos u órganos completamente funcionales, que puedan ser usados
como injertos u tranasplantes.
Base de la ingeniería de tejidos.

4. En un esquema T coloque las ventajas y desventajas que involucran trabajar con cultivos
celulares

VENTAJAS
 Permiten un control preciso y fino del medio ambiente
Se pueden controlar las condiciones físico-químicas (pH, temperatura, presión osmótica,
presión parcial de O2 y CO2), y fisiológicos (hormonas, factores de crecimiento, densidad
celular, etc.).
 Caracterización y homogeneidad de la muestra
Muestra de tejido es siempre heterogénea, al cabo de uno o dos pases, líneas celulares
cultivadas son homogéneas (de morfología y su composición son uniformes).
 Economía:
Al realizarse en volúmenes reducidos se requiere menos cantidad de reactivos o drogas.
 Ética
El cultivo celular no puede reemplazar siempre al ensayo 'in vivo' (experimentación en
animales) pero es una alternativa válida en muchas situaciones.

DESVENTAJAS
 Técnica sensible
 Estrictas condiciones de asepsia, ya que crecimiento es mucho más lento que contaminantes
más habituales (hongos, levaduras, bacterias, micoplasmas, etc.) y necesita un medio muy
complejo similar al plasma o liquido interticial.
 Cantidad y coste
Producir 1 gramo de células en cultivo cuesta 10 veces más que obtenerlas a partir del tejido
de un animal, se obtienen cantidades muy pequeñas.
 Inestabilidad
Muchas líneas celulares continuas son inestables debido a aneuploidías, afectando tanto
velocidad de crecimiento como capacidad para diferenciarse.
Para evitarlo se emplear líneas estables que se resiembran cada cierto tiempo o número de
generaciones a partir de stock congelado.

5. Enliste al menos 8 usos de cultivos celulares

 Investigación básica, estudiar fenómenos complejos como, por ejemplo:
 Actividad intracelular: transcripción de DNA, síntesis de proteínas, metabolismo energético,
ciclo celular, diferenciación, apoptosis, etc.
 Flujo intracelular de biomoléculas: procesamiento del ARN, el movimiento del ARN desde
el núcleo hacia el citoplasma, el movimiento de las proteínas hacia diversos orgánulos, el
ensamblaje y desensamblaje de los microtúbulos, etc.
 Genómica y proteómica: análisis genético, infección, transformación celular,
inmortalización, senescencia, expresión génica, rutas metabólicas, etc.
 Ecología celular: estudio de condiciones ambientales responsables de mantenimiento de la
funcionalidad celular y diferenciación, el estudio de las necesidades nutricionales, la cinética
de la población celular, etc.
 Interacciones celulares: morfogénesis, proliferación celular, adhesión celular, interacciones
con la matriz, invasión celular, etc.
Investigación aplicada, en áreas como:
 Virología: Cultivo de virus animales y de plantas, producción de vacunas, etc.
 Biotecnología: producción industrial de fármacos en biorreactores (interferón, insulina,
hormona de crecimiento, etc.)
 Inmunología. Producción de anticuerpos monoclonales, señalización, fenómenos de
inflamación.
 Farmacología: Efecto de diversos fármacos, interacciones con el receptor,
 fenómenos de resistencia, etc.
 Ingeniería de tejidos. Producción de tejidos artificiales (piel, cartílagos) para el tratamiento
de grandes quemados, injertos o autotransplantes, desdiferenciación y diferenciación
inducida, etc.
 Toxicología: citotoxicidad, mutagénesis, carcinogénesis, etc.

6. Que es un cultivo en monocapa y un cultivo en suspensión

• MONOCAPA:
Las células crecen adheridas sobre un soporte sólido (plástico o vidrio). El anclaje al
sustrato es un prerrequisito para la proliferación celular. Es el método utilizado para la
mayoría de las células excepto para las hematopoyéticas.
• SUSPENSION:
 Las células se encuentran dispersas en el medio de cultivo. Su crecimiento no depende del
anclaje. Se restringe a las células hematopoyéticas, células madre, líneas celulares
transformadas y células tumorales. Alcanzan la confluencia cuando el número de células es
grande y los nutrientes son insuficientes.

7. Mencione el concepto de los siguientes términos:

 Explante primario
Fragmento de tejido o de órgano es colocado en interfase sólido-líquido de soporte de vidrio
o plástico. Células se adhieren a la superficie y células de la periferia del explante pueden
migrar y proliferar por la superficie del soporte.
Útil en pequeñas cantidades de tejido (biopsias de piel)
 Línea celular
 Cultivo primario en monocapa: células se dispersan por métodos enzimáticos y se pasan
a un nuevo frasco de cultivo.
 Cultivo primario en suspensión: se diluyen en medio fresco.
Cultivos sucesivos así formados se denominan línea celular.
La formación de una línea celular a partir de un cultivo primario implica que:
o aumenta el número de células obtenidas
o acaban predominando uno o dos tipos celulares: los que tienen mayor tasa de
crecimiento
o la población celular se hace uniforme y homogénea
o sus características se conservan durante las sucesivas generaciones y, si se
conservan en nitrógeno líquido, de forma indefinida

 Línea celular continua

Tipos de células (como las células de roedores y las células tumorales) que evitan la
senescencia, son células que crecen indefinidamente.
Surgen de forma espontánea (exposición a radiaciones ionizantes o a carcinógenos químicos) o
inducida (infección vírica o transfección de ADN).
Resultado de cambio genotípico denominado transformación.
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 Desdiferenciación celular
Pérdida irreversible de propiedad diferencial del tipo celular. Por ejemplo, un hepatocito en
cultivo puede perder algunas anzimas (como la arginasa o las aminotransferasas), o ser
incapaz de almacenar glucógeno o sintetizar las proteínas del suero.
 Desadaptación celular.
Pérdida no es irreversible ya que se debe a la ausencia de algún tipo de señal (hormonal,
nerviosa, etc.) y que basta con recuperar esa señal para que la característica se vuelva a
expresar.
Cuando crecen sobre una matriz de colágeno, los hepatocitos de rata pueden volver a
expresar la enzima tirosina aminotransferasa en presencia de ciertas hormonas (insulina e
hidrocortisona).

Consulta sobre los diferentes tipos de cultivos celulares, los usos que se les da actualmente y las
fuentes de obtención de tales líneas celulares.