Universidad del Zulia

Facultad Experimental de Ciencias

Departamento de Biología.
U.A. Microbiología

Prof. Ricardo Alonso Silva

 Conllevan

Liberación Producción
 Las principales muestras
y su toma

Algunos ejemplos: Sarampión y rubeola

Rabia
Hepatitis A,B,C,D,E
 Es necesario que el medico

Requisito comprenda el proceso de

infección

de la • Es importante la obtención
muestra temprana de una muestra
adecuada, esto debido a
que la excreción del virus
para su tiende a ser por pocos días

buen Esterilidad

manejo Tiempo de transporte

Seguridad
 Datos que deben Recomendaciones para la
toma, manejo y
incluir una muestra: preservación de muestras
 Nombre del paciente, edad y sexo. para el estudio
 Resumen de la historia clínica(fecha de comienzo virológicos están:
de los síntomas, examen físico, pruebas de
laboratorio, entre otros)
 Diagnostico presuntivo(enfermedad viral que se Garantizar
sospecha)
 Tipo de muestra y fecha de la toma Refrigeradas
 Casos análogos ocurridos en miembros de la Criopreservantes
misma familia o en el vecindario
 Vacunas recibidas y fechas en que fueron Sangre debe tomarse
administradas
 Exposición del paciente a vectores(insectos) o No debe usarse solución
animales salina
 Terapia recibida
 Se utiliza
“ Examen
microscópico:
En busca

Aislamiento (cultivo)
e identificación del virus: Estudios serológicos:
”
determinan la presencia de
No es un Laboratorios antígenos
procedimiento especializados del virus o anticuerpos

Pruebas para detectar virus sin

y antígenos: recurrir
Realizada en tejidos
Combinados o solos
Pueden ser

Directas Indirectas
Evidencian Demuestran
 Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay
Es un inmunoensayo en fase solida que permite la identificación
tanto de antígenos (ELISA directa) como de anticuerpos (ELISA
indirecta).
Fundamento.

Añadir
Agregar el sustrato. Analizar
Fijar el antígeno o Agregar
Lo que reacción
antígeno o anticuerpo a anticuerpo
permitirá colorimétrica
anticuerpo a estudiar conjugado
observar en un
una fase (contenido (ligado) con
cambio de espectrofotó
solida en el suero una enzima.
color en la metro.
del paciente)
reacción
 (método de sándwich) se utiliza para detectar antígenos.

Añadir antígenos
Fijar Anticuerpo a Añadir Anticuerpo Analizar en
(contenidos en la Añadir sustrato
la fase sólida ligado a enzima espectrofotómetro
muestra)
 se utiliza para detectar anticuerpos.

Añadir Anticuerpos
Fijar Antígeno a la Añadir Anticuerpo Analizar en
(contenidos en la Añadir sustrato
fase sólida ligado a enzima espectrofotómetro
muestra)

Antígeno Adición de Adición de Adición de

fijado al muestra con anticuerpo ligado sustrato y
pozo anticuerpos a a una enzima medición del color
estudiar
 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Se hace cuantificación, en la cual se mide la absorbancia en una

longitud de onda determinada en un espectrofotómetro.
DESVENTAJAS Y
VENTAJAS
LIMITACIONES
➢ Muy sensible.
➢ Alta especificidad.
➢ Da resultados en un corto tiempo (entre 1-4 ➢ Posibles falsos positivos:
horas y en algunos casos en pocos minutos). ➢ Posibles falsos negativos: En
➢ No necesita equipo especial el ELISA directo la baja
➢ No necesita trabajo con radioactividad (a concentración de antígenos
diferencia de RIA). puede ser un problema.
➢ Se pueden estudiar varias muestras
simultáneamente.
 Utilidad en la práctica médica

La prueba permite determinar antígenos o anticuerpos específicos para:

Dengue

HSV (virus del herpes simple)

VIH
RSV (virus sincitial respiratorio
humano)
CMV

Rubeola

Hepatitis A, B y C
 Fundamento.

Prueba serológica que consiste en pequeñas partículas de

látex recubiertas de anticuerpos o antígenos específicos
que se aglutinan en presencia de antígenos o anticuerpos
homólogos.
Se fijan Inmunoglobulinas a partículas de látex, de tal manera que los
fragmentos de unión queden libres y sean capaces de unirse al antígeno que
este en la muestra, al haber reacción antígeno-anticuerpo se formara una
aglutinación visible.
 Directo.

Los anticuerpos esta fijado a la Indirecto.

partícula de látex.
Los antígenos esta fijado a la
Descubre antígenos presentes en
partícula de látex.
la muestra
Descubre anticuerpos presentes
en la muestra
INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS
Utilidad en la
práctica médica
➢ Si se presenta aglutinación (positivo), La prueba permite determinar antígenos o
indica la compatibilidad antígeno anticuerpos específicos para:
anticuerpo.
➢ Si no se presenta aglutinación ➢ Virus de influenza
(negativo), no hay compatibilidad ➢ RSV
antígeno anticuerpo. ➢ Virus del sarampión
Pueden interpretarse como inmune si es
positivo o susceptible si es negativo, ya
que la información suministrada
corresponde a exposición al agente o
infección pasada, ya que las pruebas de
látex no son muy específicas para la IgM.
 DESVENTAJAS Y
VENTAJAS
LIMITACIONES
➢ Fácil de realizar.
➢ Posibles falsos positivos:
➢ Toma pocos minutos. reacciones cruzadas.

➢ No necesita equipo ni ➢ Posibles falsos negativos:

entrenamiento especial. periodo de ventana
inmunológico, errores
➢ Tiene buena sensibilidad (no técnicos.
tan buena como ELISA)
➢ No es tan preciso.
➢ Tiene buena especificidad
(no tan buena como ELISA)
 Fundamento:
se basa
Fluorocromo

Utilidad
práctica medica: Interpretación de los
influenza, el resultados:
RSV, paperas, Positiva
sarampión, etc. Negativa
Inespecifica

Limitaciones: Ventajas:
Posibles falsos obtener
Costoso No es necesario
Debe ser especificidad
realizado por
personal sensibilidad

• María del Pilar Crespo, Bacteriologa microbióloga, Colombia Médica (2000)

 Detecta anticuerpos específicos de antígeno.
También conocido como
Western Blot.

Es una técnica analítica usada

para detectar proteínas
especificas en una muestra
determinada.
Fundamento.

Mediante una Se pasan las Se corta la

electroforesis en gel se proteínas membrana en
separadas a una tiras delgadas Se hace reaccionar el
separan las proteínas. suero del paciente
membrana verticales
(que contiene Ag
Se añade un anti- específicos contra las
Se adiciona proteínas virales)
anticuerpo ligado con
sustrato.
una enzima
 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

De haber reacción entre antígeno y anticuerpo se observará como una

banda de color café que hace evidente la unión de los anticuerpos que
reaccionaron con la proteína que migró en ese sitio.

Al comparar con un control se ubica y se determina el tipo de proteína

para la cual hay antígenos específicos; de esta forma se puede definir
exactamente contra cuáles proteínas están dirigidos los anticuerpos del
paciente y asimismo determinar la fase de la infección en que se
encuentra.
Utilidad en la práctica
médica
➢ Suplementaria y confirmatoria para VIH o HTLV-1

➢ Permite diferenciar entre VIH1 y VIH2


VENTAJAS
➢ Proporciona información
cualitativa, cuantitativa y
estructural de la proteína.
➢ Alta sensibilidad.
➢ Alta especificidad.
DESVENTAJAS Y
LIMITACIONES
➢ Requiere un personal
altamente capacitado.
➢ Requiere equipos de alta
tecnología.
➢ Puede dar falsos negativos
cuando el título de
anticuerpos es bajo.
 Fundamento: Mediante esta técnica se pueden encontrar cantidades
• La desnaturalización
• La hibridación de los cebadores (5`3)
• La extensión de estos cebadores

Técnicas de Interpretación de los resultados:

amplificación • El material genético se compara con secuencias de nucleótidos controles para
determinar o no de elementos virales.
del ácido • Es importante tener en cuenta que una PCR positiva no siempre indica infección
nucleico: activa
Ventajas:
Reacción en
• Simplicidad y rapidez:
cadena de la • Sensibilidad y especificidad
polimerasa. • que puede evidenciar una infección aunque el individuo se encuentre en
(PCR) ventana inmunológica
Limitaciones:
Necesidad de cebadores
La prueba se debe efectuar en condiciones adecuadas
Errores técnicos

Utilidad práctica médica: hepatitis B, el VIH, papiloma virus,

hantavirus y herpes
Es una técnica de alta complejidad que permite visualizar
el agente viral y su efecto celular especifico.

Se basa en la obtención de muestras virales, empleadas

para ser cultivadas en condiciones aptas y controladas,
para su posterior estudio y manipulación. No es un
procedimiento rutinario y se realiza en laboratorios
especializados.
 Los sistemas de cultivos más utilizados son:

1.- Cultivos primarios

Se caracterizan por tener varios tipos de células. La
mayoría son de crecimiento limitado in vitro.

2.- Cepas de células diploides

Derivadas de tejidos normales, se utilizan en la producción de
vacunas, aislamiento viral y como sustratos para probar
materiales tóxicos.

3.- Líneas celulares.

Son células inmortalizadas en el laboratorio, resisten (n)
número de pases y se caracterizan por derivarse de tejidos
normales o de tumores malignos y se han pasado por los
menos 70 veces in vitro.
 DESVENTAJAS Y
VENTAJAS LIMITACIONES

➢ Alta complejidad.
➢ Permite el estudio detallado de
un virus. ➢ Requiere equipos de alta
tecnología.

Utilidad en la práctica médica

Su principal finalidad está orientada a fines epidemiológicos, utilizándose

en ocurrencias de nuevas epidemias donde se necesite indagar la causa
concluyente.
NO ES UN MÉTODO QUE SE UTILICE CON FINES DIAGNÓSTICOS.
Diagnósticos realizados anteriormente:
Estudio internacional(en Perú): La
sensibilidad y especificidad de la técnica
IFA en comparación con la de Western Blot
fue de 98,2% y 98% respectivamente. Estos
resultados permiten incorporar a la técnica
de IFI como una prueba alternativa para la
confirmación del diagnóstico de infección
por VIH.

Estudio Regional(En Coro):El propósito del

presente estudio fue la confirmación serológica y
molecular de un brote de dengue en el Estado Estudio Nacional(En
Falcón, Venezuela con la finalidad de confirmar la Valencia):El aislamiento viral de
etiología de la enfermedad, determinar los serotipos VSR se realizó a través del
infectantes y la relación del diagnóstico clínico con cultivo celular y la identificación
las respuestas inmunitarias en los pacientes con del agente patógeno por la
infección activa. Se analizaron 54 sueros de técnica de inmunofluorescencia
pacientes con diagnóstico clínico de infección por directa. Se obtuvieron 46
VD, mediante inmunoensayos enzimáticos muestras positivas
desarrollados en Venezuela (ELISA, IgM e IgG) y por
PCR.

• http://exa.unne.edu.ar/bioquimica/inmunoclinica/documentos/Laboratorio_TPN8.pdf
 Bibliografía:
A. Toma, manejo y preservación de muestras para estudios virológicos.
• Guía práctica de la unidad curricular microbiología II autor: Rosaura Hernandez. (2006)
• María del Pilar Crespo, Bacteriologa microbióloga, Colombia Médica (2000)

B. ELISA.
• Sherris, Microbiología médica, McGraw-Hill, 5ta edición (2010)
• Jawetz, Microbiología médica, McGraw-Hill, 25° edición (2010)
• María del Pilar Crespo, Bacteriologa microbióloga, Colombia Médica (2000)

C. Aglutinación de Látex.
• W. Levinson, Microbiología e inmunología médica, McGraw-Hill, 8va edición. (2006)
• Sherris, Microbiología médica, McGraw-Hill, 5ta edición (2010)
• Jawetz, Microbiología médica, McGraw-Hill, 25° edición (2010)
• María del Pilar Crespo, Bacteriologa microbióloga, Colombia Médica 2000

D. Inmunoflorescencia indirecta.

• Diagnóstico viral por el laboratorio María del Pilar Crespo(2000)

• Guia práctica de la unidad curricular microbiología II autor: Rosaura Hernandez. (2006)
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/medicina_experimental/v14_n1/inmunofluorescencia_indirecta.htm
E. Western Blot.
• W. Levinson, Microbiología e inmunología médica, McGraw-Hill, 8va edición. (2006)
• Sherris, Microbiología médica, McGraw-Hill, 5ta edición (2010)
• María del Pilar Crespo, Bacteriologa microbióloga, Colombia Médica (2000)
F. PCR.
• W. Levinson, Microbiología e inmunología médica, McGraw-Hill, 8va edición. (2006)
• Guía práctica de la unidad curricular microbiología II autor: Rosaura Hernandez. (2006)
• María del Pilar Crespo, Bacteriologa microbióloga, Colombia Médica (2000)

G. Aislamiento Viral
• Guía práctica de la unidad curricular microbiología II autor: Rosaura Hernandez. (2006)

H. Estudios anteriores.
• http://www.alquizvetek.com/?page_id=12(Woo et al., 2008). (Fouz et al., 2000; Morgan et al., 1993).
• http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0535-51332003000300005CORO Recibido:
16-06-2002. Aceptado: 26-05-2003.
• http://exa.unne.edu.ar/bioquimica/inmunoclinica/documentos/Laboratorio_TPN8.pdf