Grupo laboratorio de Microbiología, Programa de Ingeniería Agroindustrial, Escuela de

ingeniería en ciencias agrícolas, Facultad de ciencias agropecuarias y recursos naturales,

Universidad de los Llanos. Vereda Barcelona. Villavicencio, Colombia.

AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE

ENZIMAS
Laura Katherin BG 117003907; Sebastian Steven BJ 117003905; Gabriela Maite CM
117003913; Yeison BR 117003906.
Facultad de ciencias agropecuarias y recursos naturales.
Ingeniería agroindustrial

RESUMEN
El objetivo de la práctica fue aislar y seleccionar microorganismos mesófilos productoras de
enzimas a partir de muestras de suelo ó aguas, cuantificando microorganismos productores de
amilasas, microorgaismos productores de proteasas y microorgranismos productores de celulasas.
Se hizo con 10g de muestra de suelo haciendo soluciones seriadas de 10 –1 , 10 –2 10 – 3, luego se
sembro 0.1 ml de la dilución 10-4 a 37 °C por 48h, realizando el conteo de colonias, las cajas de
almidón; se revela con lugol, observando zonas de aclaramiento alrededor de las colonias, las
cajas de celulosa; se revelan adicionando rojo congo posteriormente adicionando NaCl y las cajas
con leche no necesitaron revelador, los halos se observan directamente. Se obtuvieron recuentos
de: . Concluyendo así que hubo presencia de microorganismos productores de amilasas, protesasa
y celulasas en bajas cantidades.
Palabras clave: amilosa, celulosa, leche, enzimas, diámetro del halo

ABSTRACT
The objective of the practice was to isolate and select mesophiles microorganisms producing
enzymes from soil or water samples, quantifying amylase-producing microorganisms,
microorgaismos producers of proteases and Microorgranismos Cellulase producers. It Was made
with 10g of soil sample making solutions serial 10 – 1, 10 – 2 10 – 3, then Sembro 0.1 ml of the
dilution 10-4 to 37 °c by 48h, performing the colony count, the boxes of starch; It is revealed with
Lugol, observing clearing areas around the colonies, the pulp boxes; They are revealed by adding
red Congo subsequently adding NaCl and the milk boxes did not need developer, the halos are
directly observed. Counts Were obtained from: . Concluding that there was the presence of
microorganisms producing amylases, protesase and cellulase in low quantities.
Key words: Amylose, cellulose, milk, enzymes, halo diameter

1. INTRODUCCIÓN. velocidad de reacción química del orden de

Una de las funciones mas importantes de las
proteínas, y que puede resultar mas
desconocida, es su papel como aceleradores
de las reacciones químicas que ocurren en los
seres vivos. Las proteínas que están dedicadas
a esta función se conocen con el nombre de
enzimas. Una enzima puede acelerar la
cien millones de veces.
La presencia de una enzima disminuye la
cantidad de energía necesaria para que ocurra
la reacción. Las enzimas se pueden definir
como catalizadores biológicos. (Morcillo,
2013)
Si se miden actividades “in situ”, debe tenerse
en cuenta que las enzimas son difíciles de
extraer de los suelos, y generalmente pierden
su integridad cuando se intenta su extracción,
ya que son rápidamente degradadas o
desnaturalizadas (Burns, 1982); cabe destacar
que las actividades enzimáticas disminuyen
con la profundidad del suelo (Rastin, 1990),
ya que, en general, son proporcionales al
contenido de materia orgánica (Tabatabai,
1994)
Las amilasas son enzimas que catalizan las
reacciones hidrolíticas del almidón, dando
origen a diversos productos que poseen una
gran relevancia para algunas operaciones y
procesos industriales. Las amilasas son
comúnmente halladas en animales y plantas;
sin embargo, para fines industriales, las más
utilizadas son aquellas de origen bacteriano o
fúngico. Las amilasas poseen una gran
importancia en la producción de alimentos y
de biocombustibles
La celulasa cataliza la hidrolisis de la
celulosa, ya que la celulasa es insoluble y no
puede ser asimilada por los microorganismos,
por lo que es hidrolizada extracelularmente,
para ello se emplea habitualmente la
carboximetilcelulosa como sustrato.
La actividad proteasa en el suelo es
especifica de una pequeña fracción de la
comunidad microbiana.
(Ferreiro, 2006)
Discusión de resultados
En la práctica se aislaron microorganismos
mesófilos productores de enzimas a partir de
muestras de una muestra de suelo,
cuantificando microorganismos productores
de amilasas, microorganismos productores de
proteasas y microorganismos productores de
celulasas.
Cabe destacar que, para analizar la actividad
amilolítica, se empleó agar almidón como
medio de cultivo, para proteasas se empleó
agar leche y para celulasas se empleó agar
celulosa. Debido a los requerimientos
nutricionales de cada microorganismo.
Para realizar la identificación de
microorganismos productores de Amilasas,
La actividad amilolítica se detectó mediante
la formación de halos translúcidos alrededor
de las colonias después de la adición de
solución de lugol sobre las placas
(Amoozegar et al., 2003). De la cual se
obtuvo un recuento de 4 UFC.
Para el caso de la actividad de las proteasas,
se analizaron las colonias que presentaban
halos translúcidos alrededor de las cepas, lo
cual es el indicativo de la presencia de
proteasas en el medio de cultivo. Ferrero. M,
(1995). Obteniéndose un recuento de 6 UFC.
Para la identificación de celulasas, se realizó
una tinción con Lugol, esperándose una
tinción color café claro, indicativo para las
celulasas, que en este caso se obtuvo un
recuento de 2 UFC.
CONCLUSIONES
La determinación de colonias formadores de enzimas
como la amilasa, proteasa, y celulasa, no fue posible
debido a que se obtuvo una cantidad excesiva de
microorganismos, puesto que al agregar los
reveladores a cada uno de los cultivos no se podía
diferenciar cada una de las colonias.
BIBLIOGRAFIA
 Ferreiro, J. P. (2006). Propiedades
bioquímicas de suelos de prado de Galicia.
Univ Santiago de Compostela.
 Morcillo Ortega, G., CORTÉS RUBIO, E.,
& GARCÍA LÓPEZ, J. L. (2011).
Biotecnología y alimentación.
 Amoozegar, M.A.; Malekzadeh, F.; Malik,
K.A. 2003. Production of amylase by newly
isolated moderate halophile, Halobacillus
sp. strain Journal of Microbiological
Methods.
 Ferrero, Marcela Alejandra. (1995). Estudios
de producción de proteasas en especies del
género Bacillus. Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales. Universidad de Buenos
Aires.
CUESTIONARIO
color púrpura profundo. Este tipo de prueba
puede realizarse con cualquier producto que
contenga almidón como ser patatas, pan o
determinados frutos
Esta reacción es el resultado de la formación
de cadenas de poliyoduro a partir de
la reacción del almidón con el yodo presente
en la solución de un reactivo llamado Lugol.
La amilosa, el componente del almidón de
cadena lineal, forma hélices donde se juntan
las moléculas de yodo, formando un color
azul oscuro a negro.
¿En qué medio de cultivo se puede aislar
microorganismos con presencia de enzimas
lipoliticas?

¿En que sustratos y cómo actúan las
enzimas amilasas, proteasas y celulasas?
La amilasa actúa sobre almidones y
azucares, proporcionan glucosa, se produce
en el páncreas y el estómago, y las
condiciones para que actúe debe ser un medio
moderadamente acido.
Las Proteasas son enzimas que rompen
los enlaces peptídicos de las proteínas. Usan
una molécula de agua para hacerlo y por lo
tanto se clasifican como hidrolasas. Se
producen en el estómago y las condiciones
para que actúe deber ser un medio muy acido.
En un medio de cultivo con un X% de lípido.
En este estudio se reporta el aislamiento de
microorganismos lipolíticos a partir de
efluentes industriales contaminados con
aceites vegetales, la evaluación de su
actividad en condiciones variables de pH,
temperatura, e identificación de la cepa con
mayor actividad enzimática, Serratia
marcescens.

La celulasa es una enzima compleja

especializada en descomponer celulosa,
transformándola en múltiples monómeros
de glucosa.

¿Cuál es la reacción del almidón con el

lugol?

La prueba del yodo es una reacción

química usada para determinar la presencia o
alteración de almidón u otros polisacáridos.
Una solución de yodo como el lugol,
reacciona con almidón produciendo un