Trabajo Ahora Si Final 2

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
ESTADÍSTICA 2
UNVIERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Facultad De Ingeniería Química
Carrera de Ingeniería Química
Estadística II
Diseño Experimental
Validación del espectrofotómetro Cary 60 UV-VIS en la repetibilidad que presenta el equipo,

mediante un ensayo de calibración según la norma ISO 17025, para ser validado como equipo
calibrado y certificado para la emisión de ensayos de pureza en análisis de muestras en el
laboratorio de análisis Instrumental – Químico de la Facultad de Ingeniería Química de la
Universidad Central Del Ecuador.
INTEGRANTES:
Mena Andrés
Román Alejandro
Vera Jean Pierre
Villamarín Ronald
Vizuete Emerson
PARALELO 1
QUITO – ECUADOR
2017-2018
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Contenido
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................4
1. TEMA ........................................................................................................................................5
2. OBJETIVOS ................................................................................................................................5
OBJETIVO GENERAL ..................................................................................................................5
OBJETIVOS ESPECÍFICOS ...........................................................................................................5
3. IDENTIFICACIÓN DE TODAS LAS POSIBLES FUENTES DE VARIACIÓN ........................................5
3.1. Factores De Tratamiento ..................................................................................................5
3.1.1. Factores cualitativos ...................................................................................................5
3.1.2 Factores cuantitativos .................................................................................................9
3.2. Factores Molestia ............................................................................................................12
3.2.1. Temperatura.............................................................................................................12
4. NIVELES DE FACTORES............................................................................................................12
5. ELECCIÓN DE REGLA DE ASIGNACIÓN DE UNIDADES EXPERIMENTALES A LAS CONDICIONES
DE ESTUDIO.
...............................................................................................................................13
6. ESPECIFICACIÓN DE MEDIDAS QUE SE REALIZARÁN. .............................................................14
6.1 Materiales y Equios ..........................................................................................................14
6.2 SUSTANCIAS Y REACTIVOS ...............................................................................................14
6.3 Unidad experimental .......................................................................................................14
6.4 Procedimiento experimental ............................................................................................14
6.5 La validación .....................................................................................................................15
7. REALIZACIÓN DE UN EXPERIMENTO PILOTO ..........................................................................16
8. ESPECIFICACIÓN DEL MODELO A ELEGIR EN EL DISEÑO. ........................................................17
8.1 Modelo de efecto fijo .......................................................................................................17
9. DETERMINACIÓN DE TAMAÑO DE MUESTRA.........................................................................18
10. RESULTADOS ........................................................................................................................19
11. DISCUSIÓN............................................................................................................................19
12. CONCLUSIONES ....................................................................................................................20
12.1 Conclusiones para el análisis de varianzas......................................................................20
12.2 CONCLUSIONES SOBRE LA VALIDACIÓN del ESPECTROFOTÓMETRO CARY 60 UV-VIS.
...............................................................................................................................................23
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13. RECOMENDACIONES ............................................................................................................24

14. BIBLIOGRAFÌA .......................................................................................................................25
15. ANEXOS ................................................................................................................................26
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INTRODUCCIÓN
La espectrofotometría, una de las técnicas más importantes y usadas en el análisis
instrumental, debido a su sencillez, rapidez y precisión, nos permite conocer la
concentración de una sustancia en disolución, basada en la absorción de las radiaciones
del espectro de luz por parte de las moléculas y esta cantidad de radiación absorbida,
depende directamente de la concentración de la sustancia.
Teniendo esta premisa, se evidencia la importancia que tiene la espectrofotometría en

nuestro ámbito ingenieril, y como tal la importancia de un equipo que nos permita una
correcta medición, por parte del Laboratorio de Análisis Instrumental Químico, de la
Facultad de Ingeniería Química de la Universidad Central del Ecuador, es de vital
importancia contar con un espectrofotómetro que cuente con una validación respectiva
que avale los resultados obtenidos por este para análisis de muestras que llegan al
laboratorio, los resultados se refieren a métodos cuantitativos de análisis químico que
utilizan la luz para medir concentraciones de sustancias químicas.
La línea de validación que sigue el presente trabajo, se guía por las normas ISO 17025
en la que se establecen los requisitos que deben cumplir los laboratorios de ensayo y
calibración. Tomando base en las normas ISO 9000, introduciendo una serie de
requisitos técnicos para cumplir con la validación de nuestro espectrofotómetro,
demostrando si los resultados son o no técnicamente competentes y sus resultados son
veraces.
Este trabajo, no busca reemplazar a los documentos de referencia en que se

fundamentan las políticas de trazabilidad e incertidumbre de la ISO. Las Guías aportan
criterios técnicos que servirán de apoyo a la aplicación de la norma, más es
responsabilidad del laboratorio adoptar los criterios de aplicación mencionados. La
consistencia de las Guías con esta norma y con los demás documentos de referencia,
permitirá conseguir el propósito de asegurar la confiabilidad de la evaluación de la
conformidad para la validación de repetibilidad del espectrofotómetro Cary 60 UV-VIS.
Esta validación, se va a enfocar en el ensayo para repetibilidad de muestras químicas

que presenten absorbancia, mediante distintos factores para en análisis que pueden o
no afectar al resultado de nuestro equipo, dentro de cual se pondrá en estudio el material
de la celda, el tipo de agua usado como disolvente y la pureza de los estándares usados
como material de referencia certificado para el análisis. Y demás variables que pudieran
afectar a nuestro ensayo, de manera directa o indirecta a la cantidad de absorbancia
medido, todo determinado en base al ensayo realizado en laboratorio de Análisis
Instrumental, de la Universidad Central del Ecuador, con el fin de definir los factores que
podrían influir en el ensayo, y determinar si el espectrofotómetro Cary 60 UV-VIS, esta
calibrado en ensayos de repetibilidad para análisis de muestra.
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1. TEMA
Validación del espectrofotómetro Cary 60 UV-VIS en la repetibilidad que
presenta el equipo, mediante un ensayo de calibración según la norma ISO
17025, para ser validado como equipo calibrado y certificado para la emisión de
ensayos de pureza en análisis de muestras en el laboratorio de análisis
Instrumental – Químico de la Facultad de Ingeniería Química de la Universidad
Central Del Ecuador.
2. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Determinar si el espectrofotómetro Cary 60 UV-VIS, usado en el
laboratorio de Análisis Instrumental de la facultad de Ingeniería Química
de la Universidad Central del Ecuador, cumple con los parámetros de
validación para repetibilidad según la Norma ISO 17025, para la emisión
de certificados de pureza.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Identificar los factores que influyen o no en el ensayo, y su relación
directa con la medición de absorbancia
Determinar si un conjunto específico de variables pueden asegurar una
medición más precisa y confiable, para una curva de calibración realizada
a condiciones de laboratorio.
Analizar el efecto que provoca sobre la variable de respuesta, el tipo de
agua utilizada como blanco, y si esto puede afectar el resultado de una
muestra cualquiera.
3. IDENTIFICACIÓN DE TODAS LAS POSIBLES FUENTES DE

VARIACIÓN
3.1. Factores De Tratamiento
3.1.1. Factores cualitativos

Tipo de agua (blanco)
Uno de los reactivos más comunes y considerado como disolvente universal es

el agua, por lo tanto, es de vital importancia cuidar su pureza. Si se mantiene un
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control sistemático de la pureza o calidad del agua para uso en el laboratorio se

promueve la eliminación de sesgo en los resultados, se evitan interferencias o
reacciones colaterales y se aumenta así la confiabilidad en los resultados.
(Torres Lozano M, Lara Manzana JV, 2000). Para este trabajo se han escogido
dos tipos de agua según las normas ASTM 1193: 2001
- Agua potable
Es aquella que es apta para el consumo, libre de microorganismos, sustancias
tóxicas y sin olor ni color, tiene disuelta en ella otros elementos, como sales y
minerales, comúnmente posee una conductividad final máxima de 5,0 µS/cm.
Sirve para la preparación de soluciones, estándar en pequeños procesos y para
el lavado o enjuague de cristalería en laboratorios (Torres Lozano M, Lara
Manzana JV, 2000)
- Agua Destilada (tipo III)

Tipo de agua satisfactoria para algunas pruebas generales de laboratorio, para
la mayoría de los análisis cualitativos, tales como uroanálisis, procedimientos
histológicos y parasitológicos; para el enjuague de muestras analíticas;
preparación de soluciones de referencia; y para el lavado o enjuague de
cristalería final (Cabanes J, Chazarra S, Garcia Carmona F., 2010)
Tabla 1. Cuadro comparativo entre los dos tipos de agua utilizados
Parámetro Tipo III Tipo IV

(destilada) (Potable)
Conductividad eléctrica Max. (µS/cm @ 4,0 5,0
25ºC)
Resistividad eléctrica Min. (MΩ-cm @ 0,25 0,2
25ºC)
pH a 25ºC - 5,0 - 8,0
TOC máx. (µg/L) 200 Sin límite
Sodio máx. (µg/L) 10 50
Sílice max. (µg/L) 500 Sin límite
Cloro max. (µg/L) 10 50
Fuente: (ASTM) D1193-91 Sociedad Americana de Pruebas y Materiales
Especificaciones estándar para el Agua de calidad de reactivo
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ESTADÍSTICA 2
Material de la celda
Las celdas o cubetas para espectrofotómetro son recipientes de plástico, vidrio
o cuarzo que se utiliza para realizar lecturas espectrofotométricas a líquidos.
Para que una celda o cubeta para espectrofotómetro funcione adecuadamente
requiere estar completamente limpia y sin ralladuras; además, la elección del
material de fabricación es importante dependiendo del método
espectrofotométrico que se utilice y la naturaleza de la muestra, para este trabajo
se ha escogido los dos siguientes tipos de celda por accesibilidad y por eficiencia
del material para el rango de región de luz ultravioleta: (González, 2004)
- Celda de Vidrio
Especialmente apropiadas para la realización de la analítica del agua y para
análisis en los campos de la química y biología, se pueden utilizar con la mayoría
de disolventes polares, así como ácidos y soluciones alcalinas, con un riesgo de
contaminación muy reducido y costos mucho más bajos en comparación con
cubetas de cuarzo, para la validación espectrofotométrica: (González, 2004)
Rango longitud de onda 340-2500 nm

Medidas exteriores 45x12.5 mm
Ancho interior 10 mm
Grosor base 1.2 mm
Tabla 2. Cuadro descriptivo de propiedades de la celda de vidrio de un

espectrofotómetro.
Rango de Paso Volumen mL Tolerancia Referencia

transmisión luz mm mm
(longitudes de onda)
1 0,35 ±0,01 642,001
2 0,70 ±0,01 642,002
5 1,70 ±0,02 642,005
De 340 a 2500 nm 10 3,50 ±0,02 642,010
20 7 ±0,02 642,020
40 14 ±0,02 642,040
50 17,50 ±0,03 642,050
Fuente: Comercial Labor, S.A
(http://comerciallabor.com/documents/cubetas.pdf)
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- Celda de Cuarzo
Son fabricadas por sinterización de sus paredes, es decir siguiendo un proceso
de calentamiento, sin llegar al punto de fusión, se moldea por presión, se
caracteriza por tener resistencia a álcalis y ácidos mantenidos en la celda durante
24 horas sin rotura ni goteo. Se puede utilizar con la casi la totalidad de
disolventes, muy utilizada para trabajos que requieren alta sensibilidad y
exactitud en los resultados, para la validación espectrofotométrica: (Budavari,
1996)
Rango longitud de onda 190-2500 nm

Medidas exteriores 45x12.5 mm
Referencia Ancho interior 10 mm
Grosor base 1.2 mm
Tabla 3. Cuadro descriptivo de propiedades de la celda de cuarzo de un

espectrofotómetro.
Rango de Paso Volumen mL Tolerancia Referencia

transmisión luz mm mm
(longitudes de onda)
1 0,35 ±0,01 642,001
2 0,70 ±0,01 642,002
5 1,70 ±0,02 642,005
190-2500 nm 10 3,50 ±0,02 642,010
20 7 ±0,02 642,020
40 14 ±0,02 642,040
50 17,50 ±0,03 642,050
Fuente: Comercial Labor, S.A
(http://comerciallabor.com/documents/cubetas.pdf)
Patrón Primario
Patrón que es designado o ampliamente reconocido como poseedor de las más
altas cualidades y cuyo valor se acepta sin referirse a otros patrones de la misma
magnitud.
Existen varios tipos o muestras patrón primarias para la calibración y validación
de un espectrofotómetro cuyo objetivo es comprobar la exactitud de absorbancia
del equipo a través de la comparación de los resultados obtenidos con los
valores estandarizados del patrón que posee una absorbancia máxima de
0,5991, para esta validación se ha tomado en cuenta una muestra patrón
primaria de paracetamol de 91 y 98% de pureza. (Castro CCA, Pimenta CL,
Dorane I., 2007)
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Figura 1. Estructura y formula molecular del Paracetamol
EL TEXTO E 'COLOR ROJO IIA SIDO MODIFICAD

Con fundamento e11 el numeral 4.1 /. I de la Norma O
Mexicana NOM-001-SSA 1-1010, se publica el pre
proyecto a efecto de que los interesados. a parttr del
noviembre y hasta el 3/ de diciembre de 1016. lo 0110/
Fuente: (Castro CCA, Pimenta CL, Dorane I., 2007)
evalúen y envien sus observaciones o comentarios en id
español y con el sustento técnico suficiente ante la CPFE
sito en Ria Rhin 111Ímera 57. colonia Cuauhtémoc, có
pasta/ 06500. Ciudad de México. Fax: 5207 6890
Correo electránico: co11.mltasú!i[armacopea.org.mx.
Paracetamol o Acetaminofén
FORMULA: ��8𝐻9�
�2
PARACETAMOL
NOMENCLATURA: 4-Hidroxiacetanilida
HO-o- NH
DESCRIPCIÓN: Polvo blanco cristalino - }-CH3
SOLUBILIDAD: Fácilmente soluble en alcohol y metanol; soluble en acetona, o

MM 151
agua caliente y en solución de hidróxido de sodio 1 N; casi insoluble en
4-H idroxiacctanilida [ 103-�
cloroformo y éter dietílico.
Contiene no menos del 98.0 % y no más del I O 1.0 ,
PESO MOLECULAR: PM= 151 g/mol paracctamol, calculado con referencia a la sustancia seca.
LONGITUD DE ONDA: 250nm TANCI.AS DE REFERENCIA. Paracetamol, Ref-FI
de p-Ammofcnol y SRcf-FEUM de p-cloroacctanihda Mai

de acuerdo con las instrucciones de uso.
Los materiales de referencia entre los cuales está el paracDe
ESta
CmRIo
PlCs
IÓoNn. Pdoelvfoinbildanocso cristalino.
por la Guía ISO 30 como “Material en el cual uno o más valores de sus
propiedades son suficientemente homogéneos y bien definidos, para ser
utilizadas para la validación y calibración de aparatos. (ISO 1992).
3.1.2 Factores cuantitativos
Humedad
Es la cantidad de agua presente en la muestra patrón que es alrededor del 0,2
% en el paracetamol lo cual es prácticamente nula y constante para la realización
del trabajo que aquí se lleva acabo. (Budavari, 1996)
Solubilidad
La solubilidad que es la capacidad de un cuerpo para disolverse al mezclarse
con un líquido, es característica propia de cada sustancia y material, el
acetaminofén es soluble en alcohol y metanol; soluble en acetona, agua caliente
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y en solución de hidróxido de sodio, para esta validación se llevara a cabo la

solubilidad del paracetamol en agua por ser el líquido universal y el más factible
en cualquier experimentación para realizar soluciones de 0,01;
0,03;0,04;0,05;0,06 y 0,08 de concentración de ingrediente activo que serán
estudiadas en este proyecto. (Harris, 2006)
Longitud de onda
La longitud de onda es la distancia que existe entre dos puntos sucesivos que
se encuentran en el mismo estado de vibración (misma elongación, velocidad,
aceleración). Se simboliza mediante la letra griega λ (lambda) y se expresa en
unidades de longitud (m). En el caso particular del paracetamol, se valorará el
espectro UV obteniendo una longitud de onda máxima a 250 nm. (Harris, 2006)
Turbidez
La turbidez o turbiedad es la medida del grado de transparencia que pierde el
agua o algún otro líquido incoloro por la presencia de partículas en suspensión
en este caso el paracetamol que al ser y preparar una misma solución a una
concentración especifica la turbidez será la misma en toda la experimentación.
(Harris, 2006)
Concentración
Proporción o relación que hay entre la cantidad de paracetamol y la cantidad
de agua añadida donde el paracetamol se disuelve en el agua, dando como
resultado la mezcla homogénea de las dos anteriores. (Zavala, 2011 )
Equipo
El cary 60 es un espectrofotómetro que utiliza la tecnología UV-Vis de lámpara
de Xenón, se fabrican de acuerdo a un sistema de gestión de calidad certificado
según la norma ISO 9001. (Manual de Agilent Cary 60 UV-Vis)
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Características
Tabla 4. Características del equipo cary 60
Longitudes de onda medibles 190–1100 nm

Ancho de banda espectral fijo 1,5 nm
Velocidad de barrido hasta 24000 nm/min
velocidad de adquisición de datos 80 puntos por segundo
Precisión de longitud de onda ± 0,5 a 541,94 nm
Reproducibilidad de la longitud de onda: ± 0,1 nm
Intervalo fotométrico ± 3,3 Abs
Fuente: Manual de Agilent Cary 60 UV-Vis (https://www.agilent.com/home)
 Especificaciones
Categoría de medición
La categoría de medición es IEC61010:I. No debe usar este equipo para
mediciones dentro de las categorías de medición II, III y IV.
Grado de contaminación
El grado de contaminación es IEC61010:2. El grado de contaminación ‘2’ se
aplica a un ambiente interior normal.
Diagrama 3.1-1 Cuadro de condiciones
Ilustración 1 Fuente: Manual de Agilente Cary 60 UV – VIS
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3.2. Factores Molestia
3.2.1. Temperatura
Nota1: Para un rendimiento analítico óptimo, la temperatura ambiente del
laboratorio debe estar entre 20 y 25 °C y que se mantenga constante dentro de
un margen de ±2 °C durante todo el día de trabajo. En el espectrofotómetro
Cary 60 UV – VIS (Manual de Agilent Cary 60)
4. NIVELES DE FACTORES
Tabla 5. Fuentes de variación
Factores Tratamiento
Variable Niveles Variable Niveles
Cuantitativa Cualitativa
Pureza del patrón 91% Material de celda a Vidrio
(Paracetamol). pureza usar en el Cuarzo
99,5 % espectrofotómetro
pureza
Tipo de blanco Agua
------------------------ ------------------------- (muestra patrón) a Potable
-- usar en el Agua
espectrofotómetro Destilada
Factores Molestia
Variable Cuantitativa Variable Cualitativa
Tiempo de secado Temperatura de la Marca de Consistencia del
del paracetamol disolución de Paracetamol a usar Paracetamol antes
Paracetamol de la disolución
(Granulado o
diluido)
Porcentaje de pH de la solución Competencia del Tipo de Agua para
acetominofen del de paracetamol personal la dilución del
paracetamol (Experiencia) paracetamol
Apreciación del
instrumental a Velocidad de
usar para la agitación al
disolución disolver
Variable de Respuesta
Tipo de Variable Nombre Unidad de Medida
Cuantitativa Sensibilidad del espectrofotómetro Cary Absorbancia (abs)
60 UV-VIS para medir absorbancia.
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ESTADÍSTICA 2
5. ELECCIÓN DE REGLA DE ASIGNACIÓN DE UNIDADES

EXPERIMENTALES A LAS CONDICIONES DE ESTUDIO.
El diseño que se utilizará como regla de asignación, es el diseño factorial, debido a que
se requiere estudiar cada unidad experimental y sus interacciones con cada factor y
antes mencionado, su ecuación es la siguiente:
��
��
𝒗��
� ��= (∏ ��) ∗ �
��
��
� � Ec: 5 -1
Dónde:
n: niveles de tratamiento de cada factor (2 niveles)
k: número de factores a estudiar (3 factores: Pureza del patrón (Paracetamol);

material de celda a usar en el espectrofotómetro, tipo de blanco (tipo de agua) a
usar en el espectrofotómetro)
��
��
𝒗��
� ��= (21 ∗ 21 ∗ 21 ) ∗ 6
��
��
𝒗��
� ��= 𝟒𝟖
Éste diseño fue elegido tomando en cuenta que nuestro estudio consta de 3 factores y
2 niveles para cada factor: Pureza del patrón a 91 y 99,5 % de pureza; material de celda
a usar en el espectrofotómetro siendo vidrio y cuarzo, tipo de blanco a usar en el
espectrofotómetro siendo agua potable y destilada; con la finalidad de constatar si
dichos factores influyen en la validación del método, considerando que los niveles serán
de ayuda para interpretar el comportamiento y la influencia de los mismos durante el
proceso de validación del espectrofotómetro; como finalidad se espera estudiar la
influencia de cada efecto sobre nuestra variable de respuesta.
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6. ESPECIFICACIÓN DE MEDIDAS QUE SE REALIZARÁN.

6.1 Materiales y Equios
6.1.1. Vasos de precipitación A±100ml R:[0-500]ml
6.1.2. Balanza A±0,01g R:[0-2000]g
6.1.3. Agitador
6.1.4. Embudo
6.1.5. Pipetas A±0,1ml R:[0-10]ml
6.1.6. Pera de succión
6.1.7. Balones aforados R:[0-200]ml
6.1.8. Balones aforados R:[0-100]ml
6.1.9. Baño de ultrasonido
6.1.10. Celda de vidrio
6.1.11. Celda de cuarzo
6.1.12. Piseta
6.2 SUSTANCIAS Y REACTIVOS

6.2.1. Agua destilada 𝐻2�(��)
6.2.2. Agua potable 𝐻2�(��)
6.2.3. Paracetamol 91%-98% ��8𝐻9�
�2 (��)
6.3 Unidad experimental

6.3.1. Espectrofotómetro
6.3.1.1. Verificar que la superficie y el compartimiento en donde se colocan los
filtros se encuentren limpios.
6.3.1.2. Encender el equipo y la lámpara del instrumento a calibrar, dejar
estabilizar.
6.4 Procedimiento experimental

6.4.1. Preparación de las muestras
6.4.1.1. Triturar el paracetamol estándar con el fin de reducir a lo máximo posible
el tamaño de partículas del mismo, posteriormente medir una cantidad de
100mg del paracetamol, y aforar con agua destilada en un balón de 200ml.
(Colocar en el ultrasonido para homogeneizar la muestra).
6.4.1.2. Triturar 1 mg del paracetamol comercial, diluir y con ayuda de embudo y
una piseta diluir el paracetamol con el fin de retener en lo posible el placebo
de la muestra; realizar este procedimiento directamente en el balón de 100ml
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ESTADÍSTICA 2
y de proceder a aforar; de igual forma la mezcla colocar en el ultrasonido para

diluir la sustancia y homogeneizarla muestra.
6.4.2. Construcción de la curva de calibración para el estándar

6.4.2.1. Del balón de 250 ml, extraer volúmenes de 1, 3, 4, 5, 6 y 8 ml del estándar
y aforar en balones de 100ml.
6.4.2.2. En la celda de cuarzo colocar la muestra estándar y realizar una lectura
en el espectrofotómetro para obtener el respectivo barrido de espectro de
absorción de luz Uv-vis; con el fin de determinar el rango de luz en el cual el
paracetamol trabaja.
6.4.2.3. Ajustar el equipo al rango de absorbancia obtenido (242nm), y encerar el
equipo con agua destilada, posteriormente obtener y anotar la absorbancia de
cada uno de los estándares.
6.4.2.4. Graficar la absorbancia en función de la concentración del estándar;
obtener la ecuación de la recta y la regresión, controlando que la misma no
baje de 0,99.
6.4.3. Repetitividad.
6.4.3.1. Posteriormente realizar 6 lecturas repetitivas del balón de la muestra de
paracetamol comercial; sacar la absorbancia de cada una de las lecturas.
6.4.3.2. Reemplazar cada una de las absorbancias en la ecuación sacada
anteriormente y conseguir la concentración de la muestra, y en función a la
concentración teórica determinar el porcentaje de error de medición.
6.4.4. Repetir todo el procedimiento utilizando agua potable.

6.4.5. Repetir el procedimiento utilizando celda de plástico y agua potable.
6.4.6. Repetir el procedimiento utilizando celda de plástico y agua potable.
6.5 La Validación
La validación analítica es uno de los elementos básicos en sistemas de calidad. El hecho
de validar trata de disminuir o controlar los factores que llevan a la imprecisión o
inexactitud de un dato generado a través de la realización de un trabajo analítico dentro
de unos parámetros definidos. La validación de un método analítico, provoca una mayor
fiabilidad y aceptación de los datos generados, estando estas en proporción con la
calidad del proceso de obtención de los mismos. Este trabajo tiene como objetivo la
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determinación y validación de un método analítico para la cuantificación de paracetamol

por espectrofotometría ultravioleta.
En el documento criterios de aplicación de la norma NMX-EC-17025-IMNC-2006 se

establece que para los procedimientos de calibración ya sean normalizados o
desarrollados por el laboratorio, éste debe aplicar uno o varios de los incisos siguientes,
tomando en cuenta que el fin es demostrar que el método se encuentra validado y que
se identificaron y validaron los aspectos que puedan influir sobre la trazabilidad y la
incertidumbre de las mediciones.
7. REALIZACIÓN DE UN EXPERIMENTO PILOTO
Con el objetivo de conocer el tiempo que demora cada experimentación, la variabilidad

que puede existir entre cada resultado y poder determinar el número de muestras a
analizar se ha procedido a realizar un experimento piloto en el cual:
7.1 Se procedió a triturar 100mg de paracetamol obteniendo un polvo blanquecino

homogéneo para disolverlo en 200 mL de agua en un tiempo medido de 10 minutos
7.2 Se tritura 1mg de paracetamol comercial, se diluye con agua y se filtra la solución
con ayuda de un papel filtro, embudo y una piseta, la sustancia obtenida se afora
en un balón de 100mL, se coloca la mezcla en el ultrasonido para diluir la sustancia
y homogeneizarla muestra, con un tiempo de realización de 25 minutos
7.3 Para realizar la curva de calibración se toma un volumen de 1,3,4,5,6, y 8mL de la
muestra estándar y cada volumen se afora en balones de 100mL, con un tiempo
de realización de 7 minutos
7.4 Se coloca cada una de las disoluciones en la celda de cuarzo, se ajusta el equipo
a un rango de absorbancia de 242nm previamente obtenido al realizar una lectura
de la muestra patrón, encerar el equipo y proceder a obtener la absorbancia de
cada una de las disoluciones preparadas llevándose todo este procedimiento en
un tiempo de 30 minutos para tres lecturas de cada estándar
7.5 Finalmente se obtiene la curva de calibración con los datos obtenidos, se remplaza
los datos en la ecuación obtenida a través de la curva y se determina el error
cometido en la medición con un tiempo empleado de 15 minutos
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ESTADÍSTICA 2
Con esto se tiene en cuenta que la realización de la experimentación se lleva a cabo en

un tiempo de una hora y 27 minutos con lo cual se puede decir que el experimento
completo con los dos tipos de celda y los dos tipos de agua utilizados se llevara a cabo
en 5 horas con 8 minutos con una variabilidad de resultados de 0,0544 para la celda de
cuarzo con agua potable; 0,0513 para la celda de cuarzo con agua destilada; 0,0734
para la celda de vidrio con agua potable y 0,06924 para la celda de vidrio con agua
destilada
El experimento piloto ayuda a tener en cuenta el tiempo de preparación de cada

unidad experimental. Se obtuvo la siguiente matriz de resultados:
Tabla 6. Resultados del experimento piloto
TIPO DE AGUA
AGUA POTABLE AGUA DESTILADA
PUREZA DEL PATRÓN PUREZA DEL PATRÓN
91% 99,5% 91% 99,5%
(PARACETAMOL) (PARACETAMOL) (PARACETAMOL) (PARACETAMOL)
0,5989 0,5925 0,5974 0,5960
Vidrio 0,5915 0,5910 0,5990 0,594
TIPO
0,5940 0,5980 0,5872 0,5867
DE
CELDA 0,5940 0,5946 0,5970 0,5980
Cuarzo 0,5960 0,5970 0,5832 0,5899
0,5992 0,5967 0,5964 0,5970
8. ESPECIFICACIÓN DEL MODELO A ELEGIR EN EL DISEÑO.
8.1 Modelo de efecto fijo

En el presente diseño experimental, se emplea un modelo de efecto fijo; en el cual los
niveles del factor; tipo de celda con el cual trabaja el espectrofotómetro, se encuentran
preestablecidos para su comparación y elegidos por interés propio de los
investigadores, debido a que estos tipos de celdas están a nuestra disposición en el
Laboratorio de Análisis Instrumental de la Facultad de Ingeniería Química –UCE, en la
ciudad de Quito. Además, generan conclusiones representativas acerca de los niveles
de dichos factores sobre el rango de absorción del paracetamol en función al tipo de
celda utilizado. De igual forma se fija los tipos de agua con el cual se va realizar la
experimentación gracias a la disponibilidad en el mismo lugar; debido a que se quiere
determinar la influencia y variabilidad del agua utilizada en la absorbancia del reactivo.
2017-2018 Página: 17
ESTADÍSTICA 2
8.1. Estimaciones para el análisis estadístico.

8.2.1. Estimaciones de cálculo.
8.2.1.1. Cálculo de la absorbancia del paracetamol en lecturas repetitivas.
8.2.1.2. Cálculo de la concentración teórica y experimental del paracetamol.
8.2.1.3. Cálculo del porcentaje de error de la contracción teórica y experimental.
8.2.1.4. Cálculo de la absorbancia media, desviación estándar y coeficiente de
variación.
8.2.2. Estimación del intervalo de confianza.
Debido a que el interés del presente diseño experimental está dirigido a cálculos de
laboratorio, carácter investigativo; se establece un intervalo de confianza del 95%,
para un abarcamiento mayor de datos. Y aseguramiento de la prueba con una
potencia del 90 %.
9. DETERMINACIÓN DE TAMAÑO DE MUESTRA
Para la validación del espectrofotómetro Cary 60 UV-VIS en la repetibilidad se calculó

el número de repeticiones de cada punto experimental en la matriz principal de factores,
el objetivo de la determinación del tamaño de la muestra o número repeticiones es
encontrar el valor correcto de ensayos a realizarse, para utilizar el tamaño del software
Statgraphics y recomendaciones en validaciones de repetibilidad de espectrofotómetros
establecidas.
El cálculo de la estimación de la varianza para el caso viene determinada por una
desviación estándar muestral de un estándar 98% puro de paracetamol, para un ensayo
realizado en un espectrofotómetro con certificado de calibración del laboratorio de la
Facultad de Ingeniería Química de la Universidad Central Del Ecuador, con resultados
tabulados. (Ver tabla 8)
Se usó la herramienta determinadora de muestras del paquete Statgraphics fijando los

valores de la media muestral y poblacional entregados por el estudio anterior,
asumiendo que la desviación estándar de la distribución normal es igual a 0,0544545,
como resultado se requieren 6 observaciones para tener un 90,0% de probabilidad de
rechazar la hipótesis de que mu=0,5991 cuando la verdadera mu=0,6991 usando una
prueba bilateral y con un riesgo alfa de 0,05; obteniéndose además la Curva del
Potencia del cálculo realizado (Ver figura 2)
2017-2018 Página: 18
ESTADÍSTICA 2
10. RESULTADOS
Tabla 7. Matriz generada en el diseño factorial de dos niveles y tres factores para
la señal de absorbancia
TIPO DE BLANCO
AGUA POTABLE AGUA DESTILADA
PUREZA DEL PATRÓN PUREZA DEL PATRÓN
91% 99,5% 91% 99,5%
(PARACETAMOL) (PARACETAMOL) (PARACETAMOL) (PARACETAMOL)
0,5969 0,5980 0,5962 0,5982
0,5955 0,5989 0,5957 0,5988

VIDRIO
0,5962 0,5979 0,5962 0,5987
MATERIAL DE CELDA
0,5942 0,5984 0,5947 0,5983
DEL 0,5949 0,5984 0,5943 0,5982
ESPECTROFOTÓMETRO 0,5945 0,5986 0,5944 0,5986
0,5962 0,5992 0,5965 0,5995
CUARZO 0,5975 0,5991 0,5977 0,5996
0,5963 0,5989 0,5968 0,6004
0,5971 0,5997 0,5979 0,5993
0,5970 0,5988 0,5973 0,6012
0,5979 0,6002 0,5981 0,6006
11. DISCUSIÓN
Al aplicar el diseño experimental para la validación del método espectrofotométrico del

paracetamol, permitió determinar cómo afectan los factores en la variabilidad de la
medición de absorbancia para lo que se aplicó un análisis estadístico para evaluar el
proceso de experimentación, ver Tablas 9,10,11 y 12 de tal forma que se verifique la
factibilidad de la hipótesis nula establecida a principio del presente escrito. Se requirió
mantener constante el ambiente de experimentación con el fin de enfocar este análisis
directamente hacia fluctuaciones ocasionadas por el cambio de tipo de agua, pureza del
reactivo y el tipo de celda utilizado. Lo cual en función a la disponibilidad en el
Laboratorio de Análisis Instrumental de la Facultad de Ingeniería Química de la
2017-2018 Página: 19
ESTADÍSTICA 2
Universidad Central del Ecuador; se ha seleccionado los niveles de los factores a ser
tomados en cuenta en el estudio categorizándolos como fijos. Por otro lado el número
de réplicas utilizado para el desarrollo de la experimentación ha sido basado en la Guía
Técnica de Trazabilidad e Incertidumbre en los Servicios de Calibración de
Espectrofotómetros UV-Vis y sus respectivas normativas vigentes. Y así mismo, la
estadística a utilizar sería, para este caso, la F de Fisher para determinar que las
diferencias en la incertidumbre son o no debidas al azar, y la t de Student para definir
que las diferencias del mejor estimado del error son o no debidas al azar. Luego de
haber realizado el ensayo piloto del mismo el análisis ANOVA arrojo influencia del tipo
de celda y la pureza del reactivo lo cual más adelante sus respectivas conclusiones en
la sección siguiente de este documento.
12. CONCLUSIONES
12.1 Conclusiones para el análisis de varianzas.

El análisis de varianzas para la absorbancia presentado en la tabla 9 indica un
valor de P muy cercano a 0 para el factor de estudio TIPO DE CELDA, al ser tan
bajo este valor la hipótesis nula del ANOVA se rechaza a un nivel de significancia
del 0,1%, los resultados se reportan como muy altamente significativos,
indicando que, al menos una media de los tratamientos de niveles del factor es
diferente.
Los resultados de la tabla 9, respecto al factor de estudio del BLANCO utilizado
en la medición de absorbancias de los patrones en el espectrofotómetro indican
un valor de P igual a 0,1542 para el estadístico de Fisher, al ser un valor superior
a 0,1 para cualquier nivel de significancia la hipótesis no se debe rechazar, se
debe aceptar entonces que, no es significativa la diferencia entre las medias de
los tratamientos de niveles del factor del BLANCO.
La herramienta estadística Statgraphics proporcionó para un análisis de varianza
del factor de estudio PUREZA DEL PATRÓN un valor de p muy cercano a 0,
este valor indica que los resultados son muy altamente significativos para un
nivel de significancia del 0,1%, negando la hipótesis nula planteada por el
ANOVA y sugiriendo que al menos una media de los tratamientos de nivel del
factor PUREZA DEL PATRÓN es diferente como se anexa en la tabla 9.
2017-2018 Página: 20
ESTADÍSTICA 2
A través de la herramienta ANOVA se pudo analizar la interacción entre el factor

TIPO DE CELDA y BLANCO, plateándose la hipótesis nula de que no existía
interacción entre ambos factores para cambiar el valor de la absorbancia en los
patrones de forma significativa, mediante la tabla 9 se puede observar que el
valor de P es de 0,1429 igual que en la interacción entre el factor TIPO DE
CELDA y PUREZA DEL PATRÓN, al ser un valor superior a 0,1 para cualquier
nivel de significancia no se puede rechazar la hipótesis nula por consiguiente se
niega alguna interacción entre los factores mencionados sobre la variable de
respuesta.
Al estudiar la interacción entre los factores BLANCO y PUREZA DEL PATRÓN
se determinó mediante la herramienta ANOVA que el valor correspondiente a la
hipótesis nula de negar una interacción entre ambos factores fue de 0,4407, por
lo que a cualquier nivel de significancia la hipótesis nula no se rechaza, es decir,
no existe interacción en ambos factores sobre la variable de respuesta, además
los resultados son reportados como no estadísticamente significativos.
Se determinó que no existe una interacción de grado 3 en el experimento, es
decir la posibilidad de que los tres factores del experimento de validación
BLANCO, PUREZA DEL PATRÓN y TIPO DE CELDA del espectrofotómetro
interactúen a la vez para variar la señal de respuesta (absorbancia), para ello
mediante el análisis de varianzas de la tabla 9, determinó que la probabilidad p,
en contra de la hipótesis alterna fue muy alta por lo que no se puede rechazar la
hipótesis nula, el valor p fue de 0.8181 a cualquier nivel de significancia se puede
decir con seguridad que no existe una interacción entre los 3 factores.
Mediante la prueba de múltiples rangos para el factor de tipo de celdas y la
distribución de grupos homogéneos de la tabla 10, se determina que los valores
de absorbancia más bajos se obtienen al utilizar celdas de vidrio para el
espectrofotómetro mientras que los niveles más altos se alcanzan al utilizar
celdas de cuarzo, resultando estas últimas la mejor opción entre ambos niveles
para cuantificar la variable de respuesta del experimento.
Se comprobó que efectivamente no hay diferencia significativa en la absorbancia
entre un nivel a otro del factor BLANCO utilizado en las mediciones del
experimento, como indica la tabla 11, la distribución de grupos homogéneos
indica que ambos niveles (agua potable y agua destilada) inciden de igual forma
en la variable de respuesta por el método TUKEY HSD.
2017-2018 Página: 21
ESTADÍSTICA 2
El paquete informático ANOVA permitió determinar que el nivel de pureza del

99% del patrón es significativamente mejor en la absorbancia del paracetamol
respecto al nivel del 91,5%, esto se contrasta en la tabla 12, en la distribución de
grupos homogéneos para el método TUKEY HSD realizado a un nivel de
confianza del 95%.
Mediante la figura 6 correspondiente a la distribución de medias para el factor
TIPO DE CELDA se puede comprobar cualitativamente la distribución de grupos
homogéneos de los niveles del mismo factor de la tabla 10, debido a que la
distribución de los datos de un nivel no se acercan a los del otro, sus límites de
la distribución están separados una gran distancia definiendo la gran importancia
de escoger el nivel adecuado del TIPO DE CELDA del espectrofotómetro.
Para el factor de BLANCO utilizado en la medición de absorbancias de los
patrones de paracetamol, la distribución de medias anexada en la figura 7 indica
que en efecto, no influye el nivel de este factor de forma significativa en la señal
de respuesta, al menos al analizar la gráfica de forma cualitativa, pues se
observa que aproximadamente la mitad del rango de absorbancias son
compartidas entre ambos niveles del BLANCO, por lo que es necesario un
análisis de distribución de grupos homogéneos para determinar la diferencia
entre los valores de absorbancia entregados por cada nivel.
La distribución de medias anexada en la figura 8 demuestra que la distribución
de grupos homogéneos para el factor PUREZA DEL PATRÓN era significativa
en determinar que el nivel del factor con mayores cantidades de absorbancias
era el paracetamol con pureza del 99%, esto debido a que las colas de
distribución de medias de un nivel estaban muy distantes del otro apreciándose
cualitativamente la gran diferencia entre un nivel y el otro sobre la variable de
respuesta.
Al analizar la figura 9, referente al gráfico de interacción entre los factores TIPO
DE CELDA y BLANCO para el método TUKEY HSD se puede evidenciar que las
líneas de cada nivel se cruzan específicamente en los extremos inferiores de
cada nivel lo que sugiere una interacción, sin embargo, en base a los resultados
de la tabla 3 del ANOVA se desprecia este cruce al ser el valor p de esta
interacción igual a 0,1429, sugiere que aunque pueda haber un cruce entre los
niveles no es significativo y no representa una interacción.
Se comprobó mediante la figura 10, que no existe interacción entre los factores
TIPO DE CELDA y PUREZA DEL PATRÓN por carecer de cruces en el gráfico
2017-2018 Página: 22
ESTADÍSTICA 2
de interacciones, debido a esto con un nivel de confianza del 95% se puede

asegurar que el valor de un factor no depende del otro y son independientes
entre sí sobre la variable de respuesta (Absorbancia).
Con un nivel de confianza del 95% para una prueba honestamente significativa
de TUKEY se determinó en la figura 11 que hay carencia de interacción de grado
2 para los factores BLANCO y PUREZA DEL PATRÓN al no existir cruces en el
gráfico de interacciones, por lo que al realizar el experimento ningún factor tuvo
incidencia sobre el otro y la variable de respuesta solo se vio afectada por el nivel
de cada uno de los factores independientemente.
Para las pruebas los gráficos de residuos por factores, figuras 12,13 y 14, se
observa que existe efectivamente una aleatoriedad para las varianzas de los dos
niveles de cada factor, sin embargo el rango en el que se encuentran las
varianzas para los residuos presentan pequeñas diferencias en longitud lo que
sugiere un comportamiento no normal en los factores esto sugiere que debía
aumentarse el número de muestra obviándose por emplear la herramienta
ANOVA que impide que esta no normalidad interfiera de forma significativa en
los resultados.
12.2 CONCLUSIONES SOBRE LA VALIDACIÓN DEL

ESPECTROFOTÓMETRO CARY 60 UV-VIS.
En base a la norma ISO 17025 y con los resultados de la figura 3 se determinó
cualitativamente la precisión y exactitud del espectrofotómetro 60 UV-VIS para
el Gráfico de dispersión por NIVEL para TIPO DE CELDA se determinó que el
equipo de laboratorio al emplear material de vidrio pierde considerablemente
exactitud debido a que la media del nivel es lejana a la media real de respuesta
la cual es de 0,598, por el contrario si se emplea como material de celda el
cuarzo el gráfico de dispersión indica que el equipo está trabajando de forma
más exacta al medir las absorbancias de las muestras de paracetamol.
Para el factor de TIPO DE CELDA y analizando la figura 3 se puede observar
que los resultados de absorbancia del espectrofotómetro son más precisos al
emplear como material de celda el cuarzo, los resultados no son precisos al
emplear material de vidrio debido a esto, el espectrofotómetro no cumple con
los estándares de validación al emplear como material de celda el vidrio.
Al analizar de forma cualitativa la figura 4 anexada en el documento, se
determinó que el equipo de espectrofotometría UV-VIS no cumple los
2017-2018 Página: 23
ESTADÍSTICA 2
estándares de validación de absorbancias para los dos niveles del factor

BLANCO, las impurezas presentes en el agua potable impiden una correcta
lectura en las absorbancias del espectrofotómetro, sin embargo esto no
comprueba al observar el gráfico de dispersión de cada nivel del factor, pese
a que ambos niveles presentan una buena exactitud al estar sus medias cerca
de la real (0,598 para la señal de respuesta), la dispersión es mayor para el
agua destilada que para el agua potable.
Los resultados en la figura 5, determinan que el equipo de espectrofotometría
UV-VIS no cumple estándares de validación basados en la norma ISO 17025
al analizarse el experimento respecto al factor PUREZA DEL PATRÓN, como
se observa el en gráfico de dispersión, el equipo esta funciona de manera
precisa para pureza del 91% y 99,5%, sin embargo los datos no son exactos
para ninguno de los niveles de pureza al alejarse en gran distancia de la media
verdadera respecto a la absorbancia del paracetamol real que fue de 0,598,
mostrándose valores más bajos de absorbancia para la pureza de 91% y
valores superiores a la media real para la pureza del 99,5% del patrón
13. RECOMENDACIONES
El estudio realizado en este trabajo ha permitido determinar que el equipo siguiendo las
normas de validación no está apto para emitir certificados de pureza en muestras
orgánicas por lo que no se recomienda sus emisiones, para futuras validaciones del
equipo de espectrofotometría se recomienda hacer experimentos con 6 réplicas como
sugieren las normas de validación de espectrofotómetros, debido al tiempo y dinero que
requiere la realización total de todos los experimentos, se recomienda realizar futuros
diseños como fracciones factoriales debido a que se comprobó mediante análisis
ANOVA que en los datos que no existe ninguna interacción significativa entre dos o tres
factores de estudio
2017-2018 Página: 24
ESTADÍSTICA 2
14. BIBLIOGRAFÌA
ASTM 1193: 2001 Standard specification for reagent water
Budavari, S. (1996). The Merck Index. 12th edition, Merck & Co.
Cabanes J, Chazarra S, Garcia Carmona F. (2010). Kojic acid a cosmetic skin
whitening agent of tirosinase. J Pharm Pharmacol. Mexico.
Castro CCA, Pimenta CL, Dorane I. (2007). Tratamento da hiperpigmentación:
uva ursina versus hidroquinona. Comest Toiletries.
González, R. (2004). Calibración de Espectrofotómetros UltravioletaVisible.
Querétaro, Qro.México: CASMET.
Harris, D. (2006). Analisis instrumental. Mexico: MacGrawhill.
Torres Lozano M, Lara Manzana JV. (2000). Selección y producción de agua
para uso en el laboratorio. CNM-MRD-PT-017.CENAM.
Zavala, C. C. (2011 ). La química en tus manos II. México: Universidad Nacional
2017-2018 Página: 25
ESTADÍSTICA 2
15. ANEXOS
Tabla 8. Tabla de un ensayo de calibración realizado con un estándar 98% puro de
Paracetamol.
Fuente: Universidad Central del Ecuador, Facultad de Ingeniería Química, Laboratorio de

Análisis Químico e Instrumental.
Figura 2. Curva de Potencia para la determinación del número de muestra del

experimento.
Fuente: Statgraphics
2017-2018 Página: 26
ESTADÍSTICA 2
Tabla 9. Análisis de Varianza para ABSORBANCIAS - Suma de Cuadrados Tipo III
Tabla 10. Pruebas de Múltiple Rangos para ABSORBANCIAS por TIPO DE CELDA
Tabla 11. Pruebas de Múltiple Rangos para ABSORBANCIAS por BLANCO
2017-2018 Página: 27
ESTADÍSTICA 2
Tabla 12. Pruebas de Múltiple Rangos para ABSORBANCIAS por PUREZA DEL
PATRÓN
Figura 3. Gráfico de dispersión por NIVEL para TIPO DE CELDA
FUENTE: STATGRAPHICS
2017-2018 Página: 28
ESTADÍSTICA 2
Figura 4. Gráfico de dispersión por NIVEL para BLANCO
Figura 5. Gráfico de dispersión por NIVEL para PUREZA DEL PATRÓN
Figura 6. Gráfico de medias para el nivel TIPO DE CELDA, mediante el método

HSD, al 95% de confianza.
2017-2018 Página: 29
ESTADÍSTICA 2
Figura 7. Gráfico de medias para el nivel BLANCO, mediante el método HSD, al

95% de confianza.
2017-2018 Página: 30
ESTADÍSTICA 2
Figura 8. Gráfico de medias para el nivel PUREZA DEL PATRÒN, mediante el

método HSD, al 95% de confianza.
Figura 9. Gráfico de interacciónes entre los niveles: TIPO DE CELDA y BLANCO

por el método HSD al 95% de confianza.
2017-2018 Página: 31
ESTADÍSTICA 2
Figura 10. Gráfico de interacciónes entre los niveles: TIPO DE CELDA y PUREZA
DEL PATRÓN por el método HSD al 95% de confianza.
Figura 11. Gráfico de interacciónes entre los niveles: BLANCO y PUREZA DEL
PATRÓN por el método HSD al 95% de confianza.
2017-2018 Página: 32
ESTADÍSTICA 2
Figura 12. Gráfico de residuos para ABSORBANCIAS al nivel TIPO DE CELDA
Figura 13. Gráfico de residuos para ABSORBANCIAS al nivel BLANCO
2017-2018 Página: 33
ESTADÍSTICA 2
Figura 14. Gráfico de residuos para ABSORBANCIAS al nivel PUREZA DEL

PATRÓN
2017-2018 Página: 34

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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

UNVIERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Validación del espectrofotómetro Cary 60 UV-VIS en la repetibilidad que presenta el equipo,

13. RECOMENDACIONES ............................................................................................................24

Teniendo esta premisa, se evidencia la importancia que tiene la espectrofotometría en

Este trabajo, no busca reemplazar a los documentos de referencia en que se

Esta validación, se va a enfocar en el ensayo para repetibilidad de muestras químicas

3. IDENTIFICACIÓN DE TODAS LAS POSIBLES FUENTES DE

3.1. Factores De Tratamiento

3.1.1. Factores cualitativos

Uno de los reactivos más comunes y considerado como disolvente universal es

control sistemático de la pureza o calidad del agua para uso en el laboratorio se

- Agua Destilada (tipo III)

Tabla 1. Cuadro comparativo entre los dos tipos de agua utilizados

Parámetro Tipo III Tipo IV

Rango longitud de onda 340-2500 nm

Tabla 2. Cuadro descriptivo de propiedades de la celda de vidrio de un

Rango de Paso Volumen mL Tolerancia Referencia

Rango longitud de onda 190-2500 nm

Tabla 3. Cuadro descriptivo de propiedades de la celda de cuarzo de un

Rango de Paso Volumen mL Tolerancia Referencia

Figura 1. Estructura y formula molecular del Paracetamol

EL TEXTO E 'COLOR ROJO IIA SIDO MODIFICAD

SOLUBILIDAD: Fácilmente soluble en alcohol y metanol; soluble en acetona, o

LONGITUD DE ONDA: 250nm TANCI.AS DE REFERENCIA. Paracetamol, Ref-FI

de p-Ammofcnol y SRcf-FEUM de p-cloroacctanihda Mai

3.1.2 Factores cuantitativos

y en solución de hidróxido de sodio, para esta validación se llevara a cabo la

Tabla 4. Características del equipo cary 60

Longitudes de onda medibles 190–1100 nm

Fuente: Manual de Agilent Cary 60 UV-Vis (https://www.agilent.com/home)

Diagrama 3.1-1 Cuadro de condiciones

Ilustración 1 Fuente: Manual de Agilente Cary 60 UV – VIS

3.2. Factores Molestia

5. ELECCIÓN DE REGLA DE ASIGNACIÓN DE UNIDADES

n: niveles de tratamiento de cada factor (2 niveles)

k: número de factores a estudiar (3 factores: Pureza del patrón (Paracetamol);

6. ESPECIFICACIÓN DE MEDIDAS QUE SE REALIZARÁN.

6.2 SUSTANCIAS Y REACTIVOS

6.3 Unidad experimental

6.4 Procedimiento experimental

y de proceder a aforar; de igual forma la mezcla colocar en el ultrasonido para

6.4.2. Construcción de la curva de calibración para el estándar

6.4.4. Repetir todo el procedimiento utilizando agua potable.

determinación y validación de un método analítico para la cuantificación de paracetamol

En el documento criterios de aplicación de la norma NMX-EC-17025-IMNC-2006 se

7. REALIZACIÓN DE UN EXPERIMENTO PILOTO

Con el objetivo de conocer el tiempo que demora cada experimentación, la variabilidad

7.1 Se procedió a triturar 100mg de paracetamol obteniendo un polvo blanquecino

Con esto se tiene en cuenta que la realización de la experimentación se lleva a cabo en

El experimento piloto ayuda a tener en cuenta el tiempo de preparación de cada

Tabla 6. Resultados del experimento piloto

8. ESPECIFICACIÓN DEL MODELO A ELEGIR EN EL DISEÑO.

8.1 Modelo de efecto fijo

8.1. Estimaciones para el análisis estadístico.

9. DETERMINACIÓN DE TAMAÑO DE MUESTRA

Para la validación del espectrofotómetro Cary 60 UV-VIS en la repetibilidad se calculó

Se usó la herramienta determinadora de muestras del paquete Statgraphics fijando los

0,5969 0,5980 0,5962 0,5982

0,5955 0,5989 0,5957 0,5988

ESPECTROFOTÓMETRO 0,5945 0,5986 0,5944 0,5986

0,5962 0,5992 0,5965 0,5995