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Bioquímica

Practica N° 06
GLUCOLISIS EXPERIMENTAL

I. INTRODUCCIÓN
La mayor parte de los átomos de carbono de los alimentos ingeridos por los
animales es excretado como CO2, más de los 2/3 de estos átomos de carbono es
excretado como grupos acetilo durante los estados intermediarios de su conversión
a CO2 . Durante el metabolismo los grupos acetilo se unen como tioésteres a la
coenzima A, un tiol que tiene la función de transportar grupos acilo dentro de la
célula .
La ruta fundamental por la que ocurre el catabolismo de la glucosa en la mayor parte
de las células está constituida por una serie de reacciones que convierten a este
azúcar en piruvato (CH3 CO COOH) cetoácido que se forma en el citoplasma. De
esta ruta se valen la generación de ATP en un medio anaeróbico (músculos
esqueléticos), además esta ruta es el preludio para el ciclo de Krebs en donde se va
a dar la combustión completa de la glucosa .
La utilización de los fosfatos permite alcalinizar el medio , inhibiendo de este la
piruvato descarboxilasa lo que traerá como consecuencia la acumulación del mismo
, las reacciones que se utilizan para su determinación identifican al grupo carbonilo
(ceto) del piruvato .
II. OBJETIVO GENERAL
❖ Sintetizar piruvato por fermentación de la glucosa
❖ Determinar la presencia de piruvato mediante el método del Nitroprusiato
III. MATERIALES Y REACTIVOS.
● Glucosa al 10% .
● Fosfato de sodio dibásico 0,5 M.
● Suspensión de levadura en Na 2HPO4
● Nitroprusiato de sodio al 5%
● Sulfato de amonio sólido.
● Acido tricloroacetico
IV. PROCEDIMIENTO:
1.- Síntesis de Piruvato Proceder de acuerdo al siguiente cuadro

Solución Tubo A

ml de glucosa al 10% 5

ml de suspensión de levadura en 5 5
Na2HPO4
Colocar en baño maría a 37|°C x 30 minutos.

Agregar 2ml de ácido tricloroacético , mezclar y centrifugar a 2500 rpm por 30 ml-
Identificación de Piruvato.- Método de Nitroprusiato .

Proceder de acuerdo al siguiente cuadro:

Solución Tubo B

Gr. de sulfato de amonio 1

Ml. de sobrenadante hervido 2

Gotas de nitroprusiato 2

Mezclar vigorosamente y añadir por las paredes del tubo (en zona) hidróxido de amonio
hasta que se forme un anillo de color verde o azul.
V. RESULTADOS

En esta imagen se observa que se formó el anillo de color verde, esto indica la
presencia del piruvato

VI. DISCUSIÓN

● Cabe destacar que el músculo esquelético expresa otra isoforma de FBpasa,


la isoenzima muscular, cuya principal diferencia cinética in vitro, respecto de
la isoenzima hepática, es su alta sensibilidad al efector alostérico AMP.
● La parte de la centrifugación se realizó con finalidad de extraer la glucosa y el
glucógeno y que puedan reaccionar los reactivos y que se puedan distinguir
más claramente las diferencias de coloración respectiva para cada una de las
coloraciones que da.

VII. CUESTIONARIO
1. - Explique detalladamente los destinos del piruvato como producto final de la
glucolisis
El destino del piruvato que se forma en la glucólisis puede variar dependiendo
de las condiciones ambientales en presencia de oxígeno mayoritariamente
seguirá la ruta aeróbica ,esto es oxidación del piruvato a acetil-CoA,
oxidación completa de éste en el ciclo de Krebs, hasta CO2 y agua, y
transferencia de los electrones obtenidos a la cadena de transporte
electrónico y finalmente al oxígeno (es decir, todo el NADH/FADH2 obtenido
en la glucólisis, la oxidación del piruvato y el ciclo de Krebs) para obtener
energía (en la fosforilación oxidativa) en ausencia de oxígeno el piruvato no
sigue la vía anterior, puesto que no hay oxígeno al que transferir los
electrones que se produzcan para que la glucólisis se pueda realizar en estas
condiciones se debe buscar la manera de deshacerse de los electrones que
genera, es decir se debe buscar la manera de reoxidar el NADH a NAD+, la
glucólisis funciona muy rápido en casi todas las células, sobre todo en las
que es la única fuente de producción de energía, así que se genera mucho
NADH que debe re oxidarse puesto que la cantidad de NADH es limitada.
Diferentes organismos han optado por diferentes formas de hacerlo, lo más
común es transferir los electrones al producto final de la glucólisis, el
piruvato, transformándolo en otro

El piruvato obtenido en la glucólisis tiene tres caminos dependiendo de la presencia


o ausencia de oxígeno
.En presencia de oxígeno las dos moléculas de piruvato se convierten en dos
moléculas de acetil CoA por la enzima complejo piruvato deshidrogenada que irán al
ciclo de Krebs
. En ausencia de oxígeno las dos moléculas de piruvato se convierten en dos
moléculas de lactato por la enzima lactato deshidrogenasa

2. Para que se usa el ácido tricloroacético.


Él es un ácido orgánico derivado del ácido acético, en el cual
tres átomos de hidrógeno del grupo metilo han sido reemplazados por átomos
de cloro, es ampliamente utilizado en bioquímica por su propiedad de precipitar
macromoléculas, como proteínas ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido
ribonucleico (ARN), además, la sal de sodio del ATC es utilizada como
un herbicida el ácido tricloroacético se puede emplear para
destruir lesiones intraepiteliales, cervicales, uterinas o displasias cervicales
(lesiones pre neoplásicas; displasias cervicales; CIN-I, CIN-II, CIN-III; LIP o SIL de
alto y bajo grado) , otros usos en medicina y cosmética incluyen el descamamiento
químico (comúnmente referido como peeling), la remoción de tatuajes, el
tratamiento de verrugas (incluyendo las verrugas genitales por HPV) y el acné
juvenil.

3. Grafique las reacciones de la glucolisis

VIII. BIBLIOGRAFÍA

https://ibcbioquimica.blogspot.com/2012/04/destinos-del-piruvato.html

https://bioquibi.webs.ull.es/metabolismo/antonio/fermentacion2007.pdf

https://clorurosodio.com/acido-tricloroacetico/

https://bioquibi.webs.ull.es/metabolismo/antonio/glucolisis2007.pdf