PRÁCTICA #07.

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

AUTORAS: Avellaneda,D; Carreño,C; Joya, A; Murcia,M.
INTRODUCCIÓN:
La cromatografía es un método de separación para la caracterización de mezclas
complejas permitiendo identificar y determinar la cantidad de dichos componentes y
obtenerlos más puros y puedan ser usados posteriormente. Además es utilizada para
analizar la cantidad y tipos de proteínas contenidas en muestras las cuales se pueden
separar de acuerdo a su carga como por ejemplo su hidrofobicidad y su pureza; en
ocasiones dependiendo de la carga hace más fácil el trabajo. La cromatografía es
muy útil ya que mediante estudios puede determinar en alguna muestra de análisis
forense, que sustancias o elementos estaban contenidos.
La cromatografía se aprovecha de que cuando se deja mover una mezcla por un
soporte por un papel o tela, los elementos de la mezcla son retenidos por la superficie
del soporte de diferente manera moviéndose por el a diferentes velocidades y se
separan siendo un proceso donde el absorbente lo constituye un papel de filtro;
basándose en el principio de que Todos los sistemas de cromatografía contienen una
fase estacionaria y una fase móvil
[1]
MARCO TEÓRICO:
La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente versátil que
presenta distintas variantes. En toda separación cromatográfica hay dos fases (sólida,
líquida o gas) una móvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la
otra manteniendo un contacto íntimo. La muestra se introduce en la fase móvil y los
componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la móvil. Los
componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada
una de las fases, con lo que se produce la separación. Si un componente está la
mayor parte del tiempo en la fase móvil el producto se mueve rápidamente, mientras
que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido
y su salida es mucho más lenta.

TIPO FASE ESTACIONARIA FASE MÓVIL

Líquido-sólido sólido inerte como gel de disolventes

sílice o alúmina

Intercambio iónico resina cambiadora soluciones acuosas

Líquido-líquido líquido adsorbido en un sólido - líquido

soporte

Gas-líquido película de líquido sólido gas

adsorbida sobre un
 soporte

La más utilizada en química orgánica es cromatografía líquido-sólido en sus dos

variantes: cromatografía en columna (CC) y cromatografía de capa fina (TLC).[2].
Cromatografía líquido-sólido (columna):
Se emplea para la separación de mezclas o purificación de sustancias a escala
preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, alúmina (Al2O3) dentro
de una columna como las que se pueden ver en la figuras. La elección del disolvente
es crucial para una buena separación. Dicho disolvente pasa a través de la columna
por efecto de la gravedad o bien por aplicación de presión (cromatografía flash). La
columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna
poniendo en el fondo de ésta un poco de algodón o lana de vidrio, para evitar que la
sílica (SiO2) o la alúmina queden retenidas en la columna y del disolvente se enrasada
hasta el nivel del soporte. A continuación se introduce la muestra por la parte superior
de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogiéndose por lo general en
tubos de ensayo.

El orden aproximado de elución de compuestos es aproximadamente el que se indica;

y la polaridad de los disolventes.

Cromatografía líquido-sólido (capa fina):

La técnica de cromatografía en capa fina (TLC) es una de las más comunes
empleadas en un laboratorio de Química Orgánica. Entre otras cosas permite:
● Determinar el grado de pureza de un compuesto.
● Comparar muestras.
● Realizar el seguimiento de una reacción.
● Controlar el contenido de las fracciones obtenidas en cromatografía de
columna.
La cromatografía en capa fina usa como fase estacionaria un sólido como gel de sílice
o alúmina conteniendo algún material que hace que se mantenga la fase estacionaria
sobre un soporte tal y como placas de vidrio, aluminio e incluso materiales plásticos.
Las placas pueden prepararse en el laboratorio o adquirirse en el mercado.
Para realizar una cromatografía en columna se procede de la siguiente manera:
1. Preparar o cortar, en su caso, una placa de tamaño adecuado.
2. Disolver una pequeña cantidad de la muestra y, mediante un capilar de vidrio,
pinchar en la parte inferior de la placa a cierta distancia del borde.
3. Introducir la placa en un recipiente con el disolvente adecuado. Dicho
recipiente debe presentar una atmósfera saturada en el vapor del disolvente
por lo que se pone trozo de papel de filtro en la parte posterior y disponer de
un sistema de cierre.
4. Cerrar el recipiente y dejar que el líquido ascienda por capilaridad.
5. Revelar la placa para poner de manifiesto donde se encuentran los puntos.
6. Determinar las posiciones relativas de los puntos mediante el cálculo del Rf
[3]
Esta también puede ser llamada cromatografía plana
Se realiza sobre papel u otro material sólido. Suele llamarse “en capa fina” o “en capa
delgada” porque la fase estacionaria recubre un soporte plano y rígido

[4]
METODOLOGÍA:
En esta ocasión se realiza un estudio netamente cualitativo de los pigmentos que
posee la espinaca. Para ello, se tomó cierta cantidad de espinaca se lavó y se maceró
en el mortero junto con etanol hasta obtener un pigmento verde, el producto se filtró.
Posteriormente, se depositó una pequeña parte del contenido en un vaso de
precipitados y se colocó una placa de aluminio con sílica-gel (tapada con un vidrio de
reloj, con el fin de que se escapen los vapores del alcohol), la cual es de gran ayuda
dado que la sílica es una sustancia muy polar, esto permitirá una mejor separación
por cromatografía del contenido tratado.
Posterior a ello, el pigmento verde fue tratado con éter de petróleo para obtener
algunos otros pigmentos que se encontraban en la sustancia de espinaca. Para ello,
la placa de sílica-gel debe marcarse en la parte de abajo y en la parte de arriba para
establecer en donde comienza la cromatografía y en donde se espera que termine el
procedimiento.

RESULTADOS:
El proceso de cromatografía se realiza con el fin de identificar sustancias puras e
impuras, en el primer proceso de pigmento vegetal con etanol trans incorporan la
placa de aluminio con sílica-gel, al transcurrir 5 minutos aproximadamente se observó
la presencia de la primera línea con el paso del tiempo sobre la placa se observaron
la presencia de 4 líneas la primera de color amarillo fuerte, la segunda de verde
pastel, la tercera de verde limón y la cuarta de amarillo pastel como se observa en la
imagen anexa. cad auna de esta líneas corresponden a un compuesto diferente. el
componente que menos se desplaza se considera como el más polar, los
componentes más tenues corresponden a poco reactivo y más producto, y el
componente más puro es el que e desplaza hasta el final (sólo), no sufre
desdoblamiento.

En el segundo proceso en la placa de aluminio con sílica-gel, se dibuja un alinea a

lápiz y en ella se realizó una concentración del pigmento circularmente se sumergió
en éter de petróleo no se género reacción alguna, se le agregó al éter de petróleo
etanol puro y en este proceso en círculo verde tomó una coloración amarillenta verde
y se desplazó una cantidad en forma de línea amarilla y como coloración formando
una línea de color gris, el éter de petróleo es apolar.

DISCUSIÓN DE RESULTADO:
● Se observa en en el primer procedimiento pigmentos vegetale como xantofila
de color amarillo fuerte la cual fue la primera línea y es la más polar , la segunda
de verde pastel corresponde a la clorofila B , la tercera de línea de color verde
limón corresponde a clorofila A y la cuarta línea de color amarillo pastel
correponde a carotenos seinto esta la más apolar.
“ Para una mejor separación de pigmentos es necesario que la fase móvil sea una
mezcla de solventes orgánicos apolares con una pequeña porción polar, la porción
apolar permite el corrimiento de los pigmentos apolares carotenos; mientras que la
parte polar permite el corrimiento de los pigmentos polares xantofilas y clorofilas;
además ayuda a la separación de la clorofila a y b que cuenta con una estructura
química similar siendo su única diferencia presencia de un grupo metilo CH3 en la
clorofila A ,y un grupo aldehído CHO en la clorofila B lo que hace a esta última más
polar, mientras más oxígeno posea el pimiento más polar será.” [5]
“ Las xantofilas hidroxílicas pueden existir en la naturaleza en estado libre o
esterificadas con ácidos grasos (palmítico, linoleico, linolénico, esteárico, mirístico,
láurico, oleico, etc.) en pimientos y derivados, patatas, mango, cítricos, etc. Solubles
en acetona, éter etílico, cloroformo, metanol y etanol, es decir, son sustancias
solubles en solventes orgánicos” [6]
“ Los carotenoides frente a los ácidos son muy inestables, dando origen a reacciones
de ciclación y/o isomerización por luz, calor o presencia de ácidos.Debido a que estas
sustancias son en su mayoría solubles en solventes apolares como éter etílico,
benceno, cloroformo, acetona, acetato de etilo, entre otros; y a que se deben extraer
de tejidos frescos que presentan un alto contenido de agua y esta dificulta su
extracción eficiente, es conveniente eliminar primero el agua realizándose por un
procedimiento de deshidratación con etanol o metanol. Luego del tejido deshidratado
se pueden extraer los carotenoides con un solvente apolar. Una alternativa a este
proceso de deshidratación es la liofilización, la cual resulta ventajosa porque se
realiza a baja temperatura y al vacío, eliminando la posibilidad de su degradación por
altas temperaturas y presencia de aire”[7].
● En el segundo proceso en mezcla de éter de petróleo y metano se observa la
formación de dos líneas la primera amarilla la cual corresponde a carotenos y
la segunda de color gris corresponde a desecho que se origina entre los
carotenos y las xantofilas, lo que quiere decir que estos dos compuestos son
solubles en este compuesto.
“El éter de petróleo (fracción 40-60 °C) es el mejor agente (le extracción directa de la
grasa del material seco. El éter dietílico es más eficiente pero también extrae
sustancias no grasas.El éter de petróleo en el disolvente disminuye la solubilidad de
las sustancias no grasas, como la lactosa, que son parcialmente solubles en éter
dietílico cuando se utiliza solo”.[8]

Como resumen de la experiencia en el laboratorio las xantofilas son solubles en

metanol puro considerándose polares en cambio las clorofilas y los carotenos son
apolares a este compuesto, y estos dos últimos compuestos son polares o mejor chico
solubles en éter de petróleo.

CONCLUSIONES:
En esta práctica de laboratorio se pudo comprender que la cromatografía es un
método de adsorción rápido, sencillo y bastante sensible a cualquier cambio y que la
fase móvil y estacionaria de los componentes depende principalmente de la polaridad
que presentan los componentes en el que el menos polar sale más rápido y el más
polar se mantiene estacionario.

BIBLIOGRAFÍA:
[1]. Valdebenito.N Laboratorio Cromatografía en papel. Clubensayos (2016).
Recuperado de:
https://www.clubensayos.com/Informes-de-Libros/Informe-de-Laboratorio-
Cromatograf%C3%ADa-en-papel/3609839.html

[2]. Anónimo. (2004).Química bioinorgánica, cromatografía. Recuperado de:

http://www.dcne.ugto.mx/Contenido/MaterialDidactico/QuimicaBioinorganica/1.9_Cro
matografia.pdf

[3]. Ramos Gallego, M., & Vargas Fernández, C. (2006). Laboratorio de química
orgánica. Madrid: Ramón Areces.

[4]. Anónimo (2004). Cromatografía. Recuperado de:

http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm
[5] Nave, F. (2016) . Laboratorio Química Orgánica I. Recuperado de:
https://www.clubensayos.com/Ciencia/Laboratorio-Qu%C3%ADmica-
Org%C3%A1nica-I/3492414.html

[6].Elizondo, C; Colicheo, D; 2015. Xantofilas. Recuperado de: http://xantofilas-

dc.blogspot.com/2015/11/que-son-las-xantofilas_24.html

[7]. Anónimo(s.f). Carotenos. Recuperado de: https://www.ecured.cu/Caroteno

[8].Educativos(2011). Determinación de grasa. Recuperado de:

https://www.edukativos.com/apuntes/archives/2060