Enterobacteriaceae

Clasificación de las bacterias Manual de
Bergey
ENTEROBACTERIACEAE
La segunda edición, de “Bergey's
Curso de Bacteriología Manual of Systematic Bacteriology”
está organizado filogenéticamente
para reflejar el estado actual de la
taxonomía de los procariotas.
Bergey's Manual of Systematic Bacteriology - Second Edition Abril 2001
Blga Nora Bravo Cruz Curso de Bacteriología 2
Dominio Eubacteria
Dominio Eubacteria
Phylum Aquificae (5 géneros) Phylum Proteobacteria (441 géneros)

Phylum Thermotogae (5 géneros) Clase Alphaproteobacteria
Clase Betaproteobacteria
Phylum Thermodesulfobacteria (1 género) Clase Gammaproteobacteria
Phylum "Deinococcus-Thermus" (3 géneros). Clase Deltaproteobacteria
Phylum Chrysiogenetes (1 género) Clase Epsilonproteobacteria
Phylum Chloroflexi (5 géneros) Phylum Firmicutes (184 géneros)
Phylum Thermomicrobia (1 género) Clase Clostridia
Phylum Nitrospira (4 géneros) Clase Mollicutes
Clase Bacilli
Phylum Deferribacteres (5 géneros)
Phylum Cyanobacteria (57 géneros)
Phylum Chlorobi (5 géneros)

Blga Nora Bravo Cruz Curso de Bacteriología 3 Blga Nora Bravo Cruz Curso de Bacteriología 4
1
Dominio Eubacteria
Phylum Actinobacteria (139 géneros)
Phylum Planctomycetes (4 géneros)
Phylum Chlamydiae (5 géneros)
Phylum Spirochaetes (13 géneros)
Phylum Fibrobacteres (1 género)
Phylum Acidobacteria (3 géneros) TAXONOMIA
Phylum Bacteroidetes (53 géneros)
Clase Bacteroidetes
Familia Enterobacteriaceae
Clase Flavobacteria
Clase Sphingobacteria
Phylum Fusobacteria (7 géneros)
Phylum Verrucomicrobia (3 géneros)
Phylum Dictyoglomus (1 género)
TAXONOMIA Familia Enterobacteriaceae

Géneros (41)
• Enterobacter
• Phylum BXII Proteobacteria phy. Nov. • Erwinia
• Alterococcus
• Clase III “Gammaproteobacteria” • Escherichia
• Orden XIII “Enterobacteriales” • Arsenophonus • Ewingella
• Familia I Enterobacteriaceae • Brenneria • Hafnia
• Buchnera • Klebsiella
• Budvicia • Kluyvera
• Buttiauxella • Leclercia
• Calymmatobacterium • Leminorella
• Cedecea • Moellerella
• Citrobacter • Morganella
• Edwardsiella
Bergey's Manual of Systematic Bacteriology - Second Edition Abril 2001 Bergey's Manual of Systematic Bacteriology - Second Edition Abril 2001
2
Géneros
• Salmonella • Grupo heterogéneo de bacterias Gram negativas.
• Obesumbacterium • Serratia • Flora normal tracto GI (Escherichia, Enterobacter, Klebsiella).
• Pantoea • Shigella • Son patógenos intestinales (Shigella, Salmonella, Yersinia)
• Pectobacterium • Sodalis • Producen infecciones en otros lugares anatómicos.
• Photorhabdus • Tatumella
• Plesiomonas • Trabulsiella
• Pragia • Wigglesworthia
• Proteus
• Xenorhabdus
• Providencia
• Rahnella • Yersinia
• Saccharobacter • Yokenella
Características Generales Epidemiología

• Anaerobios facultativos  Distribución amplia en la tierra y en plantas
• No forman esporas  Flora normal de tracto GI de humanos y animales
• Reducen nitratos a nitritos
 Producen infecciones en el tracto GI y génito urinario
• Fermentan glucosa con o sin gas
• Son oxidasa negativos  En pacientes con compromiso en las barreras anatómicas o
inmunosuprimidos producen neumonía, septicemia,
• Pueden ser móviles (flagelos peritricos) o inmóviles
meningitis, o formación de abscesos.
• 41 géneros
 Producen infecciones nosocomiales
 Pacientes hospitalizados, son particularmente susceptibles a
la colonización y infección con enterobacterias.
3
Significado de las enterobacterias en
el Laboratorio Clínico
Estructuras
 80% de las bacterias Gram negativas • Pared celular con lipopolisacárido (endotoxina) y
porinas
 50% de los aislamientos clínicos significativos
• Membrana citoplasmática
 30% de las septicemias
• Cromosoma único sin membrana nuclear
 70% de las gastroenteritis
• Ribosomas
 75% de las infecciones del tracto urinario
• Flagelos
 Produce infección nosocomial
• Fimbrias o pili (adhesinas)
 Aumento de cepas multiresistentes a los
antibióticos • Pili sexual
• Plásmidos
Pared Celular de bacterias Gram Negativas

La célula bacteriana
4
Bacterias Gram negativas Estructura antigénica
• Serotipia
• Antígenos “O” o antígenos somáticos
peptidoglycan membrana externa
• Antígenos “H” o antígenos flagelares
• Antígenos “K” o antígenos capsulares (Vi)
periplama
citoplasma membrana citoplamática
Antígeno “O” Antígeno “H”

• Lipopolisacárido: Lípido A, core y cadena O • Presentes en los flagelos: proteínas
• Fase lisa o rugosa • Lábiles al calor
• Variación de fase: alternar la expresión de un tipo de antígeno flagelar
• Estables al calor con otro tipo antigénico no relacionado
• Presentan reacción cruzada: especie, género y familia
• Asociado a cierto tipo de infecciones
• Endotoxina
5
Antígeno “K” Factores de Virulencia
• Cápsula: polisacáridos
• Parcialmente estables al calor • Adhesinas: Fimbrias o pili
• Inhibe la reacción somática: • Toxinas
• Salmonella enterica ser. Typhi antígeno Vi: • Adquisición de Fierro
virulencia, detección de portadores • Cápsulas
• Escherichia coli antígeno K1: • Plásmidos
meningitis neonatal, bacteremia e ITU. • Resistencia a Droga Plásmido-independiente
• Evaden fagocitosis
Adhesinas Toxinas
Fimbrias o pili
Alteran la viabilidad o fisiología de la célula afectada
• Adhesión de bacterias a la mucosa, primer paso en la • Citotoxinas y hemolisinas destruyen células
colonización del huésped • Endotoxina asociado a shock tóxico
• Enterotoxinas :
• Rodean como una cabellera a la bacteria
• ST Aumenta el cGMP
• Escherichia coli • LT similar a la toxina colérica
• Diarrea: Factor de colonización I y II (CFA) • VT Sindrome urémico hemolítico
• ITU y pielonefritis: Fimbria P
• Sepsis neonatal o meningitis: Fimbria S
• Mayor salida de toxina: Fimbria 1
• Variación de fase en producción de fimbrias.
6
Adquisición de Fierro Cápsula
• Factor limitante para el crecimiento bacteriano

• Disminuye la habilidad de anticuerpos de unirse a las
• Fierro en el humano esta unido a proteínas: Hb, mioglobina bacterias
• Presencia de sideroforos: enterobactina, aerobactina • Evita la fagocitosis
• Hemolisinas • Pobre inmunogenicidad
• Bacteria sensible a reactantes de fase aguda: transferrina y • K1 similar a compuestos en células eucariotas
lactoferrina en PMN
• Infecciones en sistema nervioso central
Plásmidos Pili sexual

• Unidades independientes extra cromosomiales de ADN
• Transposones: gen que puede ir de un plásmido a otro
plásmido o al cromosoma
• Transferencia a otra cepa o especie o género
• Plásmidos R o de resistencia: Resistencia antimicrobiana
de las bacterias Gram negativas
• Transferencia de factores de virulencia: adhesinas,
toxinas o hemolisinas o varios de ellos
7
Mecanismos de resistencia Resistencia a Droga Plasmido-
independiente
• Gen cromosomial para una b-lactamasa de amplio espectro:
• Citrobacter, Enterobacter, Proteus indol +, Providencia, y Serratia, inducido
en la presencia de algunos antibióticos b-lactámicos
• Adquisición de resistencia durante la terapia.
Escherichia coli E. coli productora de diarrea

• Una de las bacterias más estudiadas • ETEC: toxina LT y ST en niños y diarrea del
viajero
• Son móviles y fermentan la lactosa
• Normalmente coloniza el intestino grueso • EPEC: 12 serotipos diferentes
• Causa más frecuente de algunas de las infecciones • EIEC: 8 serotipos
bacterianas más comunes:
• Infección del tracto urinario • EHEC: O157:H7 colitis hemorrágica,
• Bacteremia Síndrome urémico-hemolítico
• Meningitis neonatal
• Neumonía • EAEC: diarrea del viajero
• Diarrea en niños y del viajero
• ADEC: diarrea persistente
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Klebsiella Klebsiella - Cuadro clínico
• Neumonía lobar adquirida en comunidad en pacientes
• K. pneumoniae, K. oxytoca, K. ozaenae, K. alcohólicos, diabetes mellitus y enfermedad pulmonar
rhinoscleromatis obstructiva crónica.
• Inmóviles • Neumonía con necrosis, inflamación y hemorragia formación
• Colonias mucoides (cápsula de polisacárido) de abscesos, cavitación, empiema, y adherencias pleurales con
alta mortalidad.
• Evita la fagocitosis y retarda migración de PMN
• Bronconeumonía o bronquitis intrahospitalaria
• Multiresistente:
• Ampicilina y carbenicilina en forma natural
• 9 % de las infecciones de tracto urinario
• Cefalosporinas y aminoglicosidos por plásmidos de R • 14% de las bacteremias intrahospitalarias
• 8% de las infecciones nosocomiales: ITU, tracto biliar y herida
quirúrgica
Serratia Hafnia
• S. marcescens, S. liquifaciens, S. rubidaea, S. • H. alvei
odorifera • Infecciones nosocomiales
• Coloniza tracto GI y urinario
• Bacteria oportunista
• Resistencia múltiple a antimicrobianos
• Infección nosocomial
• Se transmite de mano a mano por personal
• 4% bacteremias e infecciones del tracto respiratorio
• 2% ITU, herida quirúrgica, e infecciones cutáneas
9
Proteus, Morganella y Providencia Proteus
 Proteus vulgaris, P. mirabilis, P. myxofaciens, • Ureasa
Morganella morganii, Providencia stuartii, P. • produce hidróxido de amonio
rettgeri • aumento del pH urinario
• formación de cálculos que actúan como cuerpos extraños produciendo
 Gran movilidad (swarming o velamiento) obstrucción del flujo urinario
 Hidrólisis de la urea • Persistencia de infección, (infección crónica)
 2° lugar en el aislamiento en laboratorios clínicos • Destrucción del parénquima renal
 Colonizan y infectan el tracto urinario

 Fimbrias para la colonización del epitelio urinario
 10% de ITU por P. mirabilis.
 Infección de heridas, neumonía y septicemia
 Infecciones oportunistas
Proteus Citrobacter
• C. amalonaticus, C. diversus, y C. freundii
• Asociados con enfermedad humana.
• Asociado con infección nosocomial
• Infección en tracto urinario y respiratorio en pacientes
hospitalizados
• Infección secundaria o colonización sin importancia
clínica
• Neonatos: C. diversus, meningitis y abscesos cerebrales
10
Edwardsiella Erwinia
 E. tarda, E. hoshinae, E. ictaluri.
• Bacterias principalmente asociadas con plantas.
 Sólo E. tarda ha sido asociado con enfermedad humana.
• No estan asociadas con enfermedad humana
 Raramente causa enfermedad
 Gastroenteritis: diarrea intermitente, acuosa que dura
varios días, vómitos y fiebre de bajo grado.
 Bacteremia, abscesos, meningitis, e infección de tejido
blandos
Género Yersinia Yersinias patógenas

• Bacilos Gram-negativos • Peste
• Crecen sobre medios ordinarios • Yersinia pestis
• Desarrollan en baja temperatura • Enteropatógenas

• Yersinia enterocolitica
• Crecen mejor a 28°C que a 37°C • Yersinia pseudotuberculosis
• Móviles a 28°C, pero inmóviles a 37°C
• Cuadro clínico
• Cuadros diarreicos
• Pseudoapendicitis: raro
• Peste frecuente: Cajamarca, Lambayeque, Piura
11
Yersinia pestis
Formas clínicas de la Peste
• PESTE BUBONICA
• Introducción percutanea del bacilo (pulga)
• Drenaje linfático: Bubón
• Diseminación: bazo, hígado, pulmones
• Septicemia terminal mortal
• PESTE NEUMONICA
• Contaminación por aerosoles
• Infección directa de los pulmones
• Septicemia mortal
Peste bubónica Peste negra

Género Salmonella Nomenclatura de Salmonella

• Gastroenteritis o Salmonelosis
• síntomas pueden presentarse entre 6 a 48 horas después de ingerir
alimentos o agua contaminados.
• náuseas, vómitos y diarrea no sanguinolenta, fiebre, dolor abdominal, Especie y subespecie Serotipos Habitat
mialgias y cefaleas. S. enterica
S. enterica subsp. enterica 1454 Animales de sangre caliente
• Diarrea toxigénica S. enterica subsp. salamae 489 Animales de sangre fría y ambiente
S. enterica subsp. arizonae 94 Animales de sangre fría y ambiente
• Salmonella enterica ser. Enteritidis S. enterica subsp. diarizonae 324 Animales de sangre fría y ambiente
• Asociada al consumo de mayonesa S. enterica subsp. houtenae 70 Animales de sangre fría y ambiente
S. enterica subsp. indica 12 Animales de sangre fría y ambiente
S. bongori 20 Animales de sangre fría y ambiente
12
Salmonella Género Salmonella
• 2463 serotipos • Fiebre enterica o tifoidea
• Salmonella enterica ser. Typhi, Salmonella ser. Paratyphi
A y Salmonella ser. Paratyphi B.
• Septicemia: Salmonella enterica
ser. Typhi, Salmonella enterica ser. Paratyphi A, • Período de incubación: 10 a 14 días,
Salmonella enterica ser. Paratyphi B, Salmonella • Fiebre que aumenta progresivamente, dolor de cabeza, mialgias,
enterica ser. Paratyphi C (Bartonelosis), Salmonella enterica ser.
Agona malestar, anorexia, y síntomas gastrointestinales.
• Portador asintomático
• Diarrea toxigénica: Salmonella enterica ser. • Reservorio vesícula biliar Salmonella enterica ser. Typhi.
Enteritidis • Septicemia
• Bacteremia, niños y ancianos.
• Diarrea invasiva: Salmonella enterica ser. • Clínica similar a bacteremias por bacilos Gram negativos
Newport, Salmonella enterica ser. Agona,
Salmonella enterica ser. Thompson, etc.
Género Shigella Serotipos de Shigella

• Kiyoshi Shiga, bacilo de la disentería en 1898.
• Restringidas a los humanos
• Disentería bacilar: Grupo Especie N° Serotipos Serotipos más
• diarreas con moco y sangre frecuentes
• cólico abdominal
A S. dysenteriae 15 A2, A3
• fiebre
B S. flexneri 6 (14) B2a, B1a, B3a, B6
• Transmisión: fecal-oral, manos contaminadas, alimentos, C S. boydii 18 C1, C2
agua.
D S. sonnei 2 D1
• Bacterias inmóviles
El grupo mas frecuente es el B, seguido de D, C y A.
13
Identificación en el laboratorio
• El aislamiento e identificación ayuda al tratamiento debido a
que las enfermedades infecciosas pueden tener una variedad
de cuadros clínicos y complicaciones
• El antibiograma ayuda en la selección del antibiótico para la
terapia.
IDENTIFICACIÓN DE • La identificación esta basada en los principios de taxonomía

aplicados a la situación clínica microbiológica.
ENTEROBACTERIAS • Las pruebas deben ser de fácil aprendizaje, de bajo costo y fácil
de realizar.
Métodos de Laboratorio
Métodos de identificación Métodos de identificación

• Pruebas bioquímicas
• Pruebas bioquímicas • TSI - LIA - Indol - MIO - SIM - Citrato
• TSI - LIA - Indol - MIO - SIM - Citrato de Simmons de Simmons
• Otras pruebas bioquímicas
• Manual
• API 20E, MicroScan • Otras pruebas bioquímicas L, A,
O.
• Automatizado
• MicroScan / WalkAway / Vitek / API / ...
• Serotipia
• Pruebas genéticas
14
Métodos de identificación Las pruebas de que consta la galería
API 20E
 Manual 

Prueba
ONPG
Reacción / Enzimas
Beta-galactosidasa
◦ API 20E
 ADH Arginina deshidrolasa
 LDC Lisina descarboxilasa
 Cada tira de API 20E

 ODC Ornitina descarboxilasa
 CIT Utilización del citrato
 H2S Producción de H2S
contiene 20 microtubos o  URE Ureasa

pocillos con distintos
TDA Triptófano desaminasa
 IND Producción de indol
sustratos deshidratados. 

VP
GEL
Producción de acetoína (Voges-Proskauer)
Gelatinasa

 Cada tubo es una prueba

GLU Fermentación/oxidación de glucosa
 MAN Fermentación/oxidación de manitol
 INO Fermentación/oxidación de inositol
bioquímica distinta.  SOR Fermentación/oxidación de sorbitol
 RHA Fermentación/oxidación de ramnosa
 La prueba número 21, la 


SAC
MEL
Fermentación/oxidación de sacarosa
Fermentación/oxidación de melobiosa
oxidasa, se hace de forma 


AMY
ARA
Fermentación/oxidación de amigdalina
Fermentación/oxidación de arabinosa
independiente a la tira.  OX Citocromo oxidasa
PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTOS
A patir de una colonia bien aislada del  Cubrir con parafina las cúpulas de los pocillos
microorganismo, hacer una suspensión ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener
en 5 mL de solución salina (0.85% de anaerobiosis.
NaCl) ó 5 mL de agua estéril.
 Poner la tira en su propia cámara húmeda de

Llenar con la suspensión de bacterias los incubación. Previamente poner agua en los
tubos, no la cúpula (cada pocillo tiene un alvéolos de la cámara para proporcionar una
tubo y una cúpula, parte aerobia), de atmósfera húmeda durante la incubación.
todos los pocillos.
 Incubar a 37 °C durante 18-24 h.

Llenar la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL
con la suspensión de bacterias.
15
Lectura e Interpretación Lectura e Interpretación
Prueba Reacción / Enzimas Negativo Positivo
ONPG Beta-galactosidasa sin color amarillo
ADH Arginina deshidrolasa amarillo rojo o naranja
 Tras la incubación se anotan los resultados inmediatos, es
LDC Lisina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
decir, los que no requieren ser revelados.
ODC Ornitina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
CIT Utilización del citrato verde azul oscuro o turquesa  Determinadas pruebas requieren ser reveladas, para el
H2S Producción de H2S sin precipitado negro precipitado negro
URE Ureasa amarillo rojo o naranja
revelado se tienen que tener en cuenta dos criterios:
TDA Triptófano desaminasa amarillo marrón-rojo  Si la glucosa da negativo y las pruebas positivas son dos o menos de
IND Producción de indol amarillo color rosa o anillo rosa-rojo
VP Producción de acetoína (Voges-Proskauer) sin color rosa-rojo
dos, no hay que añadir reactivos. Cuando esto ocurre se hacen
GEL Gelatinasa sin difusión difusión de pigmento otros tipos de API como el API 20NE, API OF, el API M o el API 10S
GLU Fermentación/oxidación de glucosa azul o verde amarillo para ver determinados metabolismos especiales.
MAN Fermentación/oxidación de manitol azul o verde amarillo
INO Fermentación/oxidación de inositol azul o verde amarillo
 Si la glucosa es positiva y/o tres o más pruebas son positivas se
SOR Fermentación/oxidación de sorbitol azul o verde amarillo revelan las pruebas que requieren reactivos:
RHA Fermentación/oxidación de ramnosa azul o verde amarillo
SAC Fermentación/oxidación de sacarosa azul o verde amarillo
MEL Fermentación/oxidación de melobiosa azul o verde amarillo
AMY Fermentación/oxidación de amigdalina azul o verde amarillo
ARA Fermentación/oxidación de arabinosa azul o verde amarillo
OX Citocromo oxidasa
Lectura e Interpretación
Sistema API Lectura
 TDA Añadir una gota de FeCl3 10 %.
 VP Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una

gota del reactivo 2 (C2 H5 OH).
 IND Añadir una gota de reactivo de Kovac’s o de

Dimetilamino-cinamaldehido.
 Oxidasa Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina)

recién preparado.
16
METODOS COMERCIALES DE IDENTIFICACIÓN METODOS COMERCIALES DE IDENTIFICACIÓN
 Existen otros métodos comerciales manuales de

identificación de Enterobacterias además del sistema API 20E
como:
◦ Enterotube (Becton-Dickinson)
◦ Tubo Oxi/Ferm (Becton-Dickinson)
◦ BD-Crystal (Becton-Dickinson)
◦ Micro-ID (Remel)
◦ Rapid (Innovative Diagnostics
◦ Enterotube (Becton-Dickinson)
◦ Agar crmogénico
◦ Minitek (Becton-Dickinson)
◦ Biolog (Biolog Inc.)
◦ Sensititre (AccuMed International)
◦ Sceptor (Becton-Dickinson) entre otros.
Métodos de identificación Métodos de identificación

• Automatizado Pruebas genéticas
• MicroScan
17
PCR en tiempo real (real time PCR)
 Es una variante PCR utilizada para amplificar y simultáneamente
cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación de ADN.
 Para ello emplea, del mismo modo que la PCR convencional,
◦ Un molde de ADN
◦ Al menos un par de cebadores específicos
◦ dNTPs
◦ Un tampón de reacción adecuado
◦ Una ADN polimerasa termoestable.
 A la mezcla se le adiciona una sustancia marcada con un fluoróforo
que, en un termociclador con censores para medir fluorescencia tras
excitar el fluoróforo a la longitud de onda apropiada, permite medir la
tasa de generación de uno o más productos específicos. Dicha
medición, se realiza luego de cada ciclo de amplificación.
Blga Nora Bravo Cruz Curso de Bacteriología 69
18

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Phylum Aquificae (5 géneros) Phylum Proteobacteria (441 géneros)

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TAXONOMIA Familia Enterobacteriaceae

Características Generales Epidemiología

Pared Celular de bacterias Gram Negativas

Antígeno “O” Antígeno “H”

• Asociado a cierto tipo de infecciones

• Factor limitante para el crecimiento bacteriano

Plásmidos Pili sexual

Escherichia coli E. coli productora de diarrea

 Colonizan y infectan el tracto urinario

Género Yersinia Yersinias patógenas

• Desarrollan en baja temperatura • Enteropatógenas

Peste bubónica Peste negra

Género Salmonella Nomenclatura de Salmonella

Género Shigella Serotipos de Shigella

IDENTIFICACIÓN DE • La identificación esta basada en los principios de taxonomía

Métodos de identificación Métodos de identificación

 Cada tira de API 20E

 Cada tubo es una prueba

 La prueba número 21, la 

oxidasa, se hace de forma 

independiente a la tira.  OX Citocromo oxidasa

 Poner la tira en su propia cámara húmeda de

 Incubar a 37 °C durante 18-24 h.

 VP Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una

 IND Añadir una gota de reactivo de Kovac’s o de

 Oxidasa Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina)

 Existen otros métodos comerciales manuales de

Métodos de identificación Métodos de identificación

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