Análisis microbiológico de coliformes totales en muestra de

agua del río Torococha, urbanización los Geranios, San

Román, Puno
Alvaro Sucari Hancco a1, Lizbeth Pomari Cañazaca a, Pariguana Castillo Yequelin a , Alcca Cruz Waldir
Yonatan, Choquecota Samuel
a
EP. Ingeniería Ambiental, Facultad de Ingeniería y Arquitectura, Universidad Peruana Unión

Resumen

La calidad del agua se define como el conjunto de caracteres físicos, químicos y biológicos que deben
satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea segura.
El presente trabajo de investigación tiene como finalidad evaluar la calidad microbiológica del agua del
rio Torococha en cuanto a la cantidad, recolección, conservación y su transporte al laboratorio, así como, su
manipulación para el respectivo análisis. En relación al análisis microbiológico, el parámetro determinado
fue coliformes totales. Por los resultados obtenidos en relación a la presencia de coliformes totales se pudo
concluir que existe presencia, por lo cual presenta un mayor riesgo de contaminación para los pobladores
que habitan en la urbanización los geranios.
Palabras clave: Coliformes totales, microorganismos, análisis, agua.

1. Introducción

El agua es el elemento más abundante del planeta, los océanos y mares representan el 97% del agua y el
restante 3% se reparte en lagos y ríos (Tyler, 2002).
Al descargar cualquier tipo de agua residual doméstica, industrial o de agricultura en un cuerpo de agua,
se producen cambios en él, al igual que el vertimiento de basura a la orilla de estos, ocasionando diversos
efectos tales como olor desagradable, incremento o descenso de temperatura; estas condiciones del agua,
traen como consecuencia la alteración de especies que habitan en el cuerpo receptor. La contaminación de
los cuerpos de agua es producida de dos formas; natural y antropogénica. En condiciones normales los ríos
pueden auto depurarse, las aguas arrastran los desechos hacia los océanos, las bacterias utilizan el oxígeno
disuelto en las aguas y degradan los compuestos orgánicos, que a su vez, son consumidas por los peces y
las plantas acuáticas devolviendo el oxígeno y el carbono a la biosfera; este proceso se ha visto alterado en
el rio Torococha.
En el río Torococha desembocan las aguas residuales generadas por la población, también podemos
encontrar aglomeración de residuos sólidos en las riberas del río y la ves la población de los barrios
aledaños utiliza las riberas del río como letrinas públicas, lo cual genera contaminación ambiental, y un olor
nauseabundo.
“Actualmente es un río que ecológicamente a colapsado, pues sus aguas no albergan ningún tipo de
especie en cuanto a fauna acuática, pero si se puede observar la presencia de algunas macrófitas, el
problema de la contaminación a este río se agrava cada día más”.(Yana, 2014)

La contaminación microbiológica en los ambientes acuáticos proviene de descargas de agua residual y

fuentes dispersas, provenientes de desechos fecales de animales y humanos. El grupo coliforme está
1 Autor de correspondencia:
Km. 19 Carretera Central, Ñaña, Lima
Tel.: +0-000-000-0000
E-mail: autor1@institute.xxx, autor2@institute.xxx, autor3@institute.xxx
 Alvaro Sucari / EP. Ingeniería Ambiental
formado por bacterias que producen gas durante la fermentación de la lactosa y pueden crecer en medios
con sales biliares. Este grupo se ha usado como indicador de contaminación microbiológica debido a que
incluye especies que se encuentran en el tracto gastrointestinal de animales de sangre caliente. Algunas
bacterias que pertenecen a los coliformes totales (CT) pueden tener un origen no fecal, sin embargo, se han
utilizado en la determinación de la calidad sanitaria por ser más resistentes que los coliformes fecales (CF)
a ambientes no favorables. (APHA, AWWA, WEF, 1998)
“Uno de los grupos de microorganismos recomendados en guías y normas como indicadores de la
calidad del agua potable e importantes para su valoración en términos sanitarios, es el grupo de las bacterias
coliformes, el cual está formado por los coliformes totales y fecales o termotolerantes, estos últimos
relacionados con la posible presencia de contaminación fecal”. (Robert, 2014)
Las bacterias coliformes son indicadoras de contaminación fecal y por lo tanto, de la posible presencia
de otros patógenos como virus, bacterias, protozoos y fases enquistadas de metazoarios (Harwood, y otros,
2005). Se asume que los indicadores y las bacterias patógenas pueden encontrarse juntos o estar
relacionados, aunque no siempre se observa relación con la presencia de patógenos.

2. Materiales y Métodos

2.1. Materiales, reactivos y equipos

2.1.1. Materiales

Para el presente trabajo se usó, 09 tubos de ensayo con tapa rosca, 03 tubos de ensayo, 09 campanas durham, 05 pipetas, 01
propieta, 01 mechero bunsen, muestra líquida del río Torococha, cooler, frasco de vidrio, guantes descartables, mascarilla

2.1.2. Reactivos

 Verde Bilis Brillante

2.1.3. Equipos

Para el presente trabajo se usó diversos equipos como: Balanza electrónica sartorius, autoclave, incubadora, cámara fotográfica,
GPS

2.2. Metodología

2.2.1. Ubicación del punto de muestreo

El área de estudio se encuentra localizado en la urbanización los Geranios de la provincia de San Román, departamento de Puno,
ubicado con los puntos UTM 15°29’50” S, 70°09’14” W.

2.2.2. Rotulado y etiquetado

El recipiente fue rotulado con etiquetas autoadhesivas como establece RJ. 010-2016 (“R.J._010,” 2016). La etiqueta de la
muestra como mínimo debe contar con los siguientes datos:

Muestreo de agua para análisis

2
 Author name / EP. Ingeniería Ambiental
Número de muestra Muestra N°1
Punto de muestreo Río Torococha
Fecha y hora 30/ 08/ 2018 - 08:25 am
Tratamiento Biológico
Operador Waldir Alcca
Observaciones -

2.2.3. Toma de muestra de agua del río Torococha

“Para el proceso de toma de muestra, el personal debe colocarse guantes descartables antes del inicio de la toma de muestra de
agua, ubicarse en un punto medio de la corriente principal, coger el recipiente de vidrio esterilizado, retirar la tapa antes de
colectar la muestra, sostener la botella por debajo del cuello, sumergir en dirección opuesta al flujo de agua, dejar un espacio del
10% del volumen del recipiente para asegurar un adecuado suministro de oxígeno para los microorganismos, colocar la tapa
después de colectar la muestra, el frasco que contiene la muestra fue transportado dentro de una caja termina (cooler) de forma
vertical para que no exista derrames ni se exponga al sol, para su conservación, posterior fue llevado al laboratorio cumpliendo
los tiempos de almacenamiento”.(“R.J._010,” 2016)

2.2.4. Análisis microbiológico

La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del Número más Probable
(NMP)(Diferenciar & Debido, 2009), para la preparación del medio de cultivo Verde Brillante Bilis se debe
pesar 3.24g. del cultivo, medir en una probeta 81 ml de agua destilada, unir el agua destilada con el cultivo
verde brillante bilis lactosa en el matraz, para luego homogenizar la solución empleando una varilla de
vidrio y finalmente sellar con el tapón de algodón y gaza para pasar a esterilizar la solución en la autoclave
a una temperatura de 121°C durante un periodo de tiempo de 15 min.
Para la realización del proceso de banco de dilución en primera instancia se debe enfriar en un vaso
precipitado los tubos con medio de cultivo y los tubos contenidos con agua destilada, rotular los tubos de
ensayo, con denominaciones de 10-1, 10-2 y 10-3 respectivamente. Posterior a ello tomar 1 ml de la muestra
de agua extraída del río Torococha con una pipeta limpia, colocar al tubo rotulado con denominación 10-1 y
homogenizar, realizar el mismo proceso con los tubos denominados 10-2 y 10-3. Para realizar la siembra del
medio de cultivo se debe pasar del tubo 10-1 con la misma pipeta de 1 ml a los 3 tubos con contenido del
medio de cultivo verde brillante bilis 10-1, repetir el proceso con los tubos 10-2 y 10-3, posterior a ello cerrar
ligeramente los tubos de ensayo y llevar a incubar a 37°C, para realizar las observaciones cumplido las 24
horas y 48 horas.

3. Resultados y Discusión

3.1. Resultado 1

Desacuerdo a las observaciones realizadas pasado las 24 horas de incubación, se observó que, en los
tres tubos rotulados con denominación 10-1, dos de éstos presentan formación de gas y existe cambio en el
medio de cultivo, específicamente en su coloración. Por ello a ambos tubos se les da una valorización
positiva (+), sin embargo, el tubo restante únicamente presenta cambios en el medio de cultivo, pero no
cuenta con presencia de gas, por ello se le da una valorización negativa (-). Se aprecia en la tabla N° 1

3
 Alvaro Sucari / EP. Ingeniería Ambiental
Desacuerdo a las observaciones realizadas cumplidas las 48 horas de incubación, se observó que los tres
tubos rotulados con denominación 10-1, en su totalidad presentan formación de gas y cambios en el medio
de cultivo, específicamente cambio en su coloración y consistencia. Por ello a cada uno de los tubos se les
da una valorización positiva (+). Se aprecia en la tabla N° 1
3.2. Resultados 2

Desacuerdo a las observaciones realizadas cumplidas las 24 horas de incubación se observó que los
tubos rotulados con denominación 10-2, en su totalidad presentan formación de gas y cambio del medio de
cultivo. Por ello se le da una valorización positiva (+) a cada uno de los tubos. Se aprecia en la tabla N° 1
Desacuerdo a las observaciones realizadas cumplidas las 48 horas de incubación, se observó que los tres
tubos denominados 10-2, en su totalidad presentan formación de gas y cambio en la coloración y
consistencia del medio de cultivo. Por ello se le da una valorización positiva (+) a los tres tubos. Se aprecia
en la tabla N° 1
3.3. Resultados 3

Desacuerdo a las observaciones realizadas cumplidas las 24 horas de incubación se observó que los tres
tubos rotulados con denominación 10-3, en su totalidad no presentan formación de gas ni hubo cambios en
el medio de cultivo. Por ello se le da una valorización negativa (-) a cada uno de los tres tubos. Se aprecia
en la tabla N° 1
Desacuerdo a las observaciones realizadas cumplidas las 48 horas de incubación se observó que los tres
tubos rotulados con denominación 10-3, en su totalidad no presentan formación de gas ni hubo cambios en
el medio de cultivo. Por ello se le da una valorización negativa (-) a cada uno de los tres tubos. Se aprecia
en la tabla N° 1

Tabla 1

Resultados de observaciones macroscópicas

−1 −2 −3
10 10 10
Observación Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo
1 2 3 1 2 3 1 2 3
24 horas + - + + + + - - -

48 horas + + + + + + - - -

Tabla 2

Número más probable

NÚMERO MAS PROBABLE

−1
10 10−2 10−3 NMP/100ml
24 horas 2 3 0 -
48 horas 3 3 4 0 460 células
 Author name / EP. Ingeniería Ambiental

4. Conclusiones

La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del Número más Probable
(NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con producción de
ácido y gas al incubarlos a 35°C ± 1°C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales
biliares.
Realizado el análisis microbiológico de coliformes totales en la muestra del río Torococha ubicado con
los puntos UTM 15°29’50” S, 70°09’14” W, se concluye que usando el método del Número más Pobable se
puede estimar la presencia de 460 células en 100ml de agua del río Torococha, en las 48 horas de
incubación. Esto indica que realizando una comparación con el ECA tal para aguas superficiales en ríos
La presencia de coliformes totales se debe en gran parte por el desemboque de las aguas servidas y
residuos sólidos, de las viviendas que se encuentran a las riveras del rio Torococha.

Referencias

APHA, AWWA, WEF. (1998). Standard methods for the examination of water and wastewater.
Washington DC: American.
Craigg, D., Fallowfi, e., & Cromar, N. (2002). Enumeration of fecal coliforms from recreational
coastal sites: evaluation of techniques for the separation of bacteria from sediments. J
Appl Microbiol, 93:557-65.
Haller, L., Amedegnato, E., Pote, J., & Wildi, W. (2009). Influence of freshwater sediment
characteristics on persistence of fecal indicator bacteria. Water Air Soil Pollut, 203:217-
27.
Harwood, V. J., Levine, T., Scott, M., Chivulkula, V., Lukasik, J., Farrah, S., & Rose, J. B. (2005).
Validity of the indicator organism paradigm for pathogen reduction in reclaimed water
and public health protection. Applied and Environmental Microbiology, 3163-3170.
Robert, M. (2014). Microorgansimos indicadores de ka calidad de agua potable en Cuba.

5
 Alvaro Sucari / EP. Ingeniería Ambiental
Revista CENIC Ciencias Biológicas, 32-43.
Tyler M, Jr. 2002. Introducción a la Ciencia Ambiental. Desarrollo sostenible de la tierra.
Revisión en castellano 5ta edición. Madrid. Thomson editores.458 p.

Diferenciar, O., & Debido, G. (2009). Camacho et. al., 2009. UNAM., 1–17.
R.J._010. (2016).
Yana, E. A. (2014). Contaminación por materia orgánica en el Río Torococha de la ciudad de Juliaca, 84.