INTRODUCCIÓN

Los microorganismos se encuentran dispersos en la naturaleza como en

los suelos, el aire, el agua y los alimentos en los que juegan papeles de
gran importancia en el ecosistema. En estos hábitats existen una gran
variedad de microorganismos tales como bacterias, hongos, virus, entre
otros; donde su presencia depende de factores ambientales como es la
temperatura, humedad, disponibilidad de nutrientes, pH y presencia de
oxígeno.
Con frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de
manera detallada su identidad bioquímica, porque otras características no
son suficientemente distintivas o diferenciales.
En el laboratorio disponemos de numerosas técnicas para la
caracterización bioquímica de una especie.
Además de los productos finales de los procesos metabólicos, también se
necesita conocer con detalle cómo se producen estos cambios, como se
producen estos cambios, como ocurren paso a paso las reacciones
químicas, cuales enzimas deben reconstruir las secuencias de las
reacciones bioquímicas que tiene lugar dentro de la célula.
En general el microorganismo se cultiva en medios que contiene una
sustancia nutritiva especifica o sustrato y después de la incubación del
cultivo se examina para ver los cambios químicos que hayan ocurrido
El objetivo de esta práctica es conocer las diferentes reacciones que
tienen los microorganismos al ser expuestos con las diferentes pruebas
bioquímicas.
 AGENTES FÍSICOS
Debido a su pequeño tamaño y a su estilo de vida individual, las células procariotas
sufren los cambios ambientales de un modo mucho más directo e inmediato que las
células de los organismos pluricelulares. A lo largo de miles de millones de años, los
procariotas han venido estando sometidas a diversas presiones ambientales, y han
respondido evolutivamente creando numerosos mecanismos de adaptación.
Actualmente, las únicas formas de vida existentes en determinados ambientes
extremos son exclusivamente procariotas. Desafiando a nuestras ideas preconcebidas
de lo que es la vida “normal”, encontramos extraordinarios seres vivos unicelulares
viviendo “cómodamente” a pHs muy ácidos o muy alcalinos, sumergidos en salmueras
y salinas, o reproduciéndose a temperaturas de más de 100ºC y a grandes presiones.
Este tipo de microorganismos que habitan medios que los humanos consideramos
como “extremos” reciben el calificativo de extremófilos. En este capítulo veremos
algunas de estas notables adaptaciones.
En esta práctica solo se trabajó con dos de los principales agentes físicos.

La temperatura:
La temperatura es uno de los parámetros ambientales más importantes que condicionan el
crecimiento y la supervivencia de los microorganismos. La temperatura afecta a la velocidad de
crecimiento (y por lo tanto, al tiempo de generación, g). Cada bacteria (y suponiendo que el
resto de condiciones ambientales se mantienen constantes) muestra una curva característica
de tasa de crecimiento en función de la temperatura, donde se puede distinguir tres puntos
característicos llamados temperaturas cardinales:

 Temperatura mínima: por debajo de ella no hay crecimiento.

 Temperatura máxima: por encima de ella tampoco existe crecimiento.
 Temperatura óptima: permite la máxima tasa de crecimiento.

Siembra:
En esta práctica se sembró en tubos de ensayo en un caldo nutritivo como medio
teniendo como muestras a Bacillus sp. y E. Coli.
Estos fueron sometidos a una temperatura de 100 °C, pero a diferentes tiempos

 Un tiempo de 0 ,1 ,5 ,10 minutos

Resultados:
Para los bacillus sp.
 A 0 minutos hubo actividad microbiana(crecimiento)
 A 1 minuto hubo actividad microbiana(crecimiento)
 A 5 minuto no hubo actividad microbiana
 A 10 minuto no hubo actividad microbiana

Para los E. Coli

 A 0 minutos hubo actividad microbiana(crecimiento)
 A 1 minuto no hubo actividad microbiana
 A 5 minuto no hubo actividad microbiana
 A 10 minuto no hubo actividad microbiana
pH :
El pH afecta tanto a la carga superficial neta de la bacteria como al grado de ionización del
agente. En general, las formas ionizadas de los agentes disociables pasan mejor a través de las
membranas biológicas, y por lo tanto son más efectivos.

 Los agentes aniónicos suelen ser más efectivos a pH ácidos.

 Los agentes catiónicos muestran más eficacia a pH alcalinos.
Siembra:
En esta práctica se sembró en tubos de ensayo en un caldo nutritivo como medio
teniendo como muestras a Bacillus sp. y E. Coli. Pero a distintos pHs

Resultados:
Para los bacillus sp.:
 A pH 2 no hubo crecimiento (el tubo de ensayo se observo transparente)
 A pH 7 hubo crecimiento (el tubo de ensayo se observó turbio)
 A pH 10 hubo crecimiento (el tubo de ensayo se observó un poco turbio esto
debido al buen inoculo)
Para los E. Coli:
 A pH 2 no hubo crecimiento (el tubo de ensayo se observó transparente)
 A pH 7 hubo crecimiento (el tubo de ensayo se observó turbio)
 A pH 10 hubo crecimiento (el tubo de ensayo se observó un poco turbio esto
debido al buen inoculo)

AGENTES QUÍMICOS
Existen ciertas sustancias químicas que influyen negativamente sobre las bacterias,
pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes:

 bacteriostáticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano.

 bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.
En general, sino sólo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de
microorganismos, hablamos respectivamente de ag entes microbiostáticos y
microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia química, la línea de demarcación
entre un efecto microbiostático y otro microbicida depende muchas veces de la
concentración de dicha sustancia y del tiempo durante el que actúa.
¿Cómo podemos saber que un microorganismo está “muerto”? El único criterio válido
es la pérdida irreversible de la capacidad de división celular, es decir, de la pérdida de
viabilidad, y se suele comprobar empleando técnicas con placas de Petri (es decir,
confirmando que no crecen en medios sólidos adecuados).
Antes de proceder al estudio de las diversas moléculas que pueden afectar el
crecimiento o la viabilidad de los microorganismos, veamos unas cuantas definiciones
básicas.
 Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivación total de todas
las formas de vida microbiana (o sea, su “muerte” o pérdida irreversible de su
viabilidad). (También existen agentes físicos esterilizantes, como ya vimos en
los dos capítulos anteriores).
Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo químicos)
antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patógenos
(infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos suelen) presentar
efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear sólo sobre
materiales inertes.
Agentes antisépticos son sustancias químicas antimicrobianas que se oponen
a la sepsis o putrefacción de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con
baja actividad tóxica hacia los tejidos vivos donde se aplican.
Quimioterápicos son compuestos químicos con actividad microbicida o
microbiostática, con una toxicidad suficientemente baja como para permitir su
administración a un organismo superior, en cuyos fluidos corporales y tejidos
permanece estable un cierto tiempo a concentraciones tales que los hace
eficaces como antimicrobianos dentro del organismo.
Todos los días usamos agentes químicos para controlar el crecimiento
microbiano: detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloración de las aguas
potables, antisépticos para la piel y el tratamiento de heridas, desinfectantes para
tratar superficies en la industria y en los laboratorios, quimioterápicos y
antibióticos para tratar enfermedades bacterianas, etc.
Para esta práctica se utilizó cinco agentes químicos que son:

El formol al 10 %
Legía al 4 %
Alcohol al 70 %
Alcohol yodado
Fenol al 1 %
Siembra:
En esta práctica se sembró en placas Petri en agar nutritivo como medio utilizando
como muestras a Pseudomonas y E. Coli. Se utilizó la técnica de siembra en camada

Una vez sembrado se utilizó discos embebidos con los diferentes compuestos químicos
los cuales se colocarán en la placa distanciados unos de otros.

Resultados:
Para E. Coli:
El formol al 10 %: formo un alo grande alrededor del disco
Legía al 4 %: formo un alo medio
Alcohol al 70 %: formo un alo pequeño
Alcohol yodado: formo un alo pequeño
Fenol al 1 %: formo un alo
Para Pseudomona:
El formol al 10 %: formo un alo grande
Legía al 4 %: formo un alo mediano
Alcohol al 70 %: formo un alo pequeño
Alcohol yodado: formo un alo pequeño
Fenol al 1 %: formo un alo pequeño

CONCLUSIONES
En esta práctica se aprendió que los agentes químicos
afectan de diferentes formas a los microrganismos debido a
que estos no tienen la misma resistencia.
También aprendidos que para estas pruebas en especial
para los agentes químicos se utilizó la técnica de siembra
en camada para así poder observar mejor el efecto de
estos.
Aprendimos que en los agentes químicos influye el tiempo
de exposición a este, la concentración del químico y el
número de microorganismos al cual contrarrestara.