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Laboratorio Biofísica.

Acción de catalizadores presentes en tejidos vegetales y


animales.
Camila Andrea Barreto Cubides-316007
cabarretoc@unal.edu.co
Jhony Alexander Galvis Corredor-316030
jhagalvisco@unal.edu.co
Fecha de entrega: 13/05/2019

RESUMEN
En esta práctica de laboratorio se comprobó experimentalmente la actividad enzimática por medio de 3 experimentos.
Para el primer experimento se observó la acción catalítica de la catalasa presente en el hígado y la peroxidasa presente en
la papa al descomponer el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. Además, por medio de un calentamiento, se
comprobó el efecto de la temperatura sobre la actividad de las enzimas. Para el segundo experimento se comprobó la
hidrólisis enzimática por acción de la amilasa salival y se observó el efecto del pH sobre la acción catalítica de la misma.
El tercer experimento permitió comparar la acción catalítica de la amilasa presente en la sangre con la de un catalizador
inorgánico como el bióxido de manganeso (MnO2) al descomponer el peróxido de hidrógeno y finalmente se observó el
efecto de la temperatura sobre cada uno de los catalizadores.

1. INTRODUCCIÓN Las enzimas constituyen el grupo de proteínas


más extenso y más especializado del organismo,
La síntesis y degradación de un gran número de responsable de la dirección de la compleja red de
sustancias en una célula vienen efectuados por reacciones que se producen a nivel celular. Los
enzimas que actúan a la temperatura del distintos tipos de enzimas pueden formar uniones
organismo y dentro de un estrecho límite de pH. covalentes entre átomos del sustrato (síntesis) o
Un catalizador es una sustancia que acelera las pueden romperlas (degradación).
reacciones químicas sin modificarse, lo que Una característica muy importante de la
significa que puede ser utilizado varias veces. actividad enzimática es su especificidad. Cada
Las enzimas (E) son catalizadores biológicos, es clase de enzima actúa sobre un único sustrato,
decir, aceleran la reacción hasta que se alcanza incluso, son incapaces de actuar sobre sustancias
un punto de equilibrio y pueden ser tan eficientes estrechamente relacionadas, así, por ejemplo, no
como para que la velocidad de reacción sea de ejercen acción sobre un estereoisómero del
108 a 1011 veces más rápida que en ausencia de mismo sustrato.
catalizador.
Éstas, son proteínas o glicoproteínas que tienen En general, las enzimas llevan el nombre del
uno o más lugares denominados sitios activos, a sustrato que modifican o el de la actividad que
los cuales se une el sustrato (S), es decir, la ejercen más el sufijo “asa”. Así, existen
sustancia sobre la que actúa la enzima. El nucleasas o endonucleasas (degradación de
sustrato es modificado químicamente y ácidos nucleicos), fosfatasas (sustraen fosfatos),
convertido en uno o más productos (P). Debido a quinasas (los agregan), sulfatasas, lipasa,
que esta reacción generalmente es reversible, oxidasas, glicosidasas, etc. [1]
puede ser expresada del siguiente modo: La acción de la actividad enzimática en una
reacción se ve afectada por la variación de
𝑬 + 𝑺 ↔ [𝑬𝑺] ↔ 𝑬 + 𝑷 (1) factores químicos y físicos tales como la
temperatura, el pH, la concentración de la enzima
Donde [ES] es un complejo enzima-sustrato que y del sustrato, entre otros. La forma de estas
se forma transitoriamente. Este complejo se proteínas depende de muchos enlaces de
disocia para generar un producto (P) y la enzima hidrógeno, así como de otras interacciones que
original. pueden ser alteradas por el calor, cambios de pH
o detergentes. Entonces, las cadenas mayor cantidad en semillas, frutos y tubérculos.
[7]
polipeptídicas se desarrollan y cambian de forma
en un proceso llamado desnaturalización. Estas El lugol o solución de Lugol es una disolución de
proteínas no pueden funcionar si no permanecen yodo molecular I2 y yoduro potásico KI en agua
dobladas, enrolladas y empacadas de una manera destilada. El Lugol sirve para identificar la
precisa. [2] presencia o alteración de almidón u otros
El peróxido de hidrógeno es un residuo del polisacáridos produciendo un color azul intenso.
metabolismo celular de muchos organismos Este reactivo no reacciona con azúcares simples
vivos. Dada su toxicidad debe transformarse como la glucosa o la fructosa. [8]
rápidamente en compuestos menos peligrosos
degradándose por una enzima específica. [3]

La Catalasa es una de las enzimas más 2. EXPERIMENTO 1. PRESENCIA DE


abundantes en la naturaleza. Se encuentra PEROXIDASA O CATALASA EN
ampliamente distribuida en el organismo TEJIDO ANIMAL Y VEGETAL.
humano, principalmente en el hígado, riñón y la
sangre. Su función es evitar que el peróxido de 2.1 OBJETIVOS
hidrógeno (H2O2) se acumule en las células
catalizando la descomposición del peróxido en ● Observar el efecto de algunas enzimas
oxígeno y agua así: presentes en tejidos animales y
vegetales.
2𝐻2 𝑂2 ↔ 2𝐻2 𝑂 + 𝑂2 (2) ● Comparar la acción de la peroxidasa
presente varios tipos de tejidos animales
La peroxidasa es una enzima que cataliza la y vegetales sobre el mismo sustrato
oxidación de un amplio número de sustratos (peróxido de hidrógeno).
orgánicos e inorgánicos, utilizando el poder ● Analizar el efecto de la temperatura en
oxidante del peróxido de hidrógeno. Catalizan la intensidad de la reacción.
reacciones bisustrato de carácter redox, ● Apreciar la actividad catalítica por
utilizando un peróxido como oxidante (a lo que medio del desprendimiento de burbujas
deben su nombre) y un segundo sustrato de y la producción de calor.
características reductoras que es oxidado por el
peróxido. Mientras que la catalasa se encuentra 2.2 MATERIALES Y
presente (en su mayoría) en los tejidos animales, PROCEDIMIENTO
la peroxidasa se encuentra (en su mayoría) en
tejidos vegetales. [4]  Gradilla Bisturí
El dióxido de manganeso (MnO2) puede catalizar  Agitador de vidrio
la reacción de descomposición del peróxido de  Hígado
hidrógeno acelerando la liberación del oxígeno  Papa
en una reacción exotérmica. Así, es posible  Mortero
detectar la liberación de oxígeno. [6]  Peróxido de Hidrógeno
La amilasa es una enzima o proteína especial que  Termómetro
ayuda a digerir los alimentos. La mayoría de la  Probeta
amilasa se produce en el páncreas y en las  Tubos de ensayo
glándulas salivales. Se denomina amilasa a una
 Placa Calefactora
enzima que tiene la capacidad de dividir el
 Beaker
almidón en sus diversos componentes. Cataliza
 Pipeta graduada (1 ml)
una reacción de hidrólisis que, en la digestión del
 Pipeta graduada (2 ml)
almidón, da lugar a azúcares simples. El almidón
es un glúcido (o hidrato de carbono) de reserva  Pipeteador de Cremallera
energética presente en el citoplasma de las
células vegetales que se puede encontrar en Para esta primera parte, se separaron las muestras
de hígado y papa, para obtener una contextura
casi homogénea. Una vez macerados, se procedió
a repartir cada una de las muestras de cada tejido 2.3.3. ¿Se presenta reacción en los tubos de
en dos tubos de ensayo, marcados de la siguiente ensayo que fueron sometidos a ebullición?
manera, los tubos marcados con el número 1,
pertenecían a las muestras de cada tejido a En los resultados obtenidos, se evidenció que la
temperatura ambiente y los marcados con el papa y el hígado reaccionaron después de ser
número 2, fueron sometidos a un baño maría por sometidos a calentamiento. Lo anterior debido a
10 minutos. A las muestras marcadas con el que no fue totalmente macerada y no llegó a una
número 1, se les añadió 3 ml de agua oxigenada temperatura de ebullición. Sin embargo, después
(peróxido de hidrógeno), observándose una se repitió el procedimiento y no se evidenció
reacción exotérmica, de una manera más ningún tipo de reacción debido a la
evidente en la muestra de hígado, la cual estuvo desnaturalización de la enzima por el aumento de
acompañada de una alta efervescencia. Se repitió temperatura.
dicho proceso, para las muestras sometidas al
baño maría, observándose una menor reacción. 2.3.4. ¿Qué les sucedería a las reacciones si las
muestras se sometieran a congelación durante
2.3 PREGUNTAS DE EVALUACIÓN Y 15 minutos? Si se dejan en reposo los tubos de
CONSULTA ensayo que contienen la muestra y el extracto
enzimático durante 15 minutos y se observa
2.3.1. ¿Qué papel desempeñan cada una de las reacción en cada uno de ellos. ¿Qué explicación
muestras de hígado y papa en las reacciones? tiene este hecho?
¿cómo comprobaría que la enzima no ha
sufrido alteración catalítica? La acción enzimática se lleva a cabo en un rango
específico de temperatura, por tanto, si se supera
El hígado y la papa contienen las enzimas este rango funcional (ya sea por calentamiento o
catalasa y peroxidasa, las cuales cumplen el enfriamiento), se modificará la estructura de
papel de catalizadores. orden superior de la enzima por lo que no puede
La acción catalítica va ligada a que la reacción se reaccionar con el sustrato
lleve a cabo, es decir, si al entrar en contacto la
enzima con el sustrato (H2O2) no se evidencia La enzima vuelve a reaccionar con el sustrato ya
reacción entonces quiere decir que la enzima ha que cuando pasan los 15 minutos las condiciones
sufrido algún tipo de alteración normales retornan y por tanto la
(desnaturalización). desnaturalización de la enzima se revierte

2.3.2. ¿Cuál es la naturaleza química de la 2.3.5. Teniendo en cuenta las reacciones con las
sustancia que cataliza las anteriores muestras enzimáticas ¿quiénes presentan
reacciones? ¿hubo desprendimiento de calor? desprendimiento de oxígeno? ¿cuál de estos dos
Explicar tejidos presentan mayor actividad? Describa el
orden de actividad en orden decreciente.
Las sustancias que catalizan las anteriores
reacciones son la catalasa y la peroxidasa. Estas Ambas muestras presentan desprendimiento de
son enzimas orgánicas. En ambas reacciones se oxígeno, sin embargo, la muestra de hígado
observó desprendimiento de calor. Debido a que evidencia mayor desprendimiento de oxígeno.
la enzima actúa como catalizador la velocidad de Esto se debe a que el tejido animal presenta
reacción aumenta, por tanto, se descompone el mayor actividad enzimática, por tanto, la
peróxido lo cual conlleva a un rompimiento de velocidad de reacción va a ser mayor y a su vez,
los enlaces, de tal forma que se libera energía. Se se presenta mayor desprendimiento de oxígeno
evidenció mayor desprendimiento de calor en la en comparación a la muestra de papa.
muestra que contenía hígado, lo cual puede
deberse a que el tejido animal presenta mayor 2.3.6. En algunas oportunidades usamos agua
complejidad a nivel biológico y por tanto hay oxigenada como antiséptico y se observa que al
mayor presencia de estos catalizadores momento de aplicarla en una herida se produce
biológicos. burbujas, ¿qué es lo que indica esto?
Durante los procesos metabólicos, las células de Se añadió 1mL de la disolución de saliva 1:5 y
nuestro organismo producen desechos, entre 1:10 con intervalo de segundos. Posteriormente
ellos el peróxido de hidrógeno. Dado su carácter se añadió a cada tubo 3 gotas de lugol, se
oxidante y, para evitar que las células sean mezclaron y se agitaron, observando las
dañadas, es necesario que se deshagan diferentes coloraciones.
rápidamente de él. Esto lo logran gracias a una
enzima llamada catalasa que cataliza su 3.3 PREGUNTAS DE EVALUACIÓN Y
descomposición en oxígeno y agua. Cuando se CONSULTA
aplica agua oxigenada en una herida, la catalasa
no identifica el origen del peróxido y, por tanto, 3.3.1. ¿Cómo explicaría el hecho de que la
la enzima actúa descomponiendo el peróxido en amilasa de la salival actúa sobre el almidón en
agua y oxígeno reflejándose en forma de la boca, pero no en el estómago?
burbujas. [10]
En el cuerpo humano las enzimas dan su
3. EXPERIMENTO 2. ACCIÓN rendimiento óptimo con un pH de 6-8, en
CATALÍTICA DE LA AMILASA particular el pH óptimo de la amilasa es de 6.9.
SALIVAL En el estómago, un epitelio glandular cubre la
pared estomacal interna en donde sus células
3.1 OBJETIVOS secretan unos dos litros de moco, ácido
clorhídrico (HCl), pepsinógenos y otros
● Comprobar la hidrólisis enzimática por componentes del fluido gástrico. Este fluido
acción de la amilasa salival. tiene un pH de 2, así, la acidez elevada desdobla
● Deducir el pH óptimo en el cual actúa la las enzimas alterando su forma y por tanto su
amilasa salival. acción catalítica se ve inhibida, contrario a lo que
sucede en la boca ya que esta posee un pH entre
3.2 MATERIALES Y 5,6 - 7,9, luego se encuentra en condiciones
PROCEDIMIENTO óptimas dentro de las cuales puede actuar
 Disolución amilasa salival 1:5 y 1:10 normalmente.
 Disolución de NaCl 0.9%
 Disolución de amilosa 1% (almidón) 3.3.2 Explique por qué en las reacciones
 Disolución de yodo o lugol enzimáticas puede haber liberación de energía
 Disoluciones a pH diferentes: en forma de calor (exergónicas) o puede ocurrir
 Disolución de HNO3 (pH=0.97) reacciones endergónicas.
 NaOH 1M (pH=12.65)
Las enzimas frecuentemente actúan por
 Disolución de BaCl2 (pH= 5.97)
acoplamiento de una reacción endergónica con
una reacción exergónica mediante la hidrólisis de
Para esta segunda parte de la práctica, se extrajo
ATP. [11]
la muestra de saliva, la cual se procedió a diluir
El acoplamiento de reacciones es cuando una
en agua en cantidades de 1:5 y a 1:10,
reacción energéticamente favorable (como la
depositadas en tubos de ensayo. Además, se
hidrólisis de ATP) se vincula directamente con
disponía de 6 tubos de ensayo, 3 para la dilución
una reacción energéticamente desfavorable
de 1:5 y 3 para la dilución 1:10, los cuales se
(endergónica). La vinculación suele ocurrir
rotularon de la siguiente manera: a los dos
mediante un compuesto intermedio compartido,
marcados con el número 1, y se les añadió 4 mL
lo que significa que el producto de una reacción
de HNO3 (pH=0.97). A los tubos marcados con
es "tomado" y utilizado como reactivo en la
el número 2, se les añadió 4 mL de BaCl2 (pH=
segunda reacción. [12]
5.97) y a los marcados con el número 3, se les
añadió 4 mL de NaOH (pH=12.65).
3.3.3. ¿Qué otros factores además de la
Posteriormente, se añadió a cada uno de los tubos
temperatura y pH influyen en la actividad de
de ensayo, 2 mL de NaCl (al 0.9%) y 4 mL de
una enzima?
solución de almidón (al 1%), se agitó y se
mezcló, sin observar cambios significativos.
La actividad enzimática puede verse afectada 4.2 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
además de la temperatura y pH por factores
como, la cantidad de enzima, cantidad de ● Peróxido de hidrógeno (H202)
sustrato, el tiempo de reacción, presencia de ● Sangre (como fuente de catalasa)
cofactores, presencia de modulares y por la ● Papa (como fuente de catalasa)
presencia de inhibidores. [13] ● Bióxido de Manganeso (MnO2)

3.3.4. ¿Las enzimas actúan únicamente en el Para realizar la comparación de la acción


interior de las células? catalítica de la enzima catalasa en dos
catalizadores orgánicos (sangre y papa) respecto
La mayoría de las reacciones enzimáticas se a la de un catalizador inorgánico, se procedió de
producen en el interior de la célula, ya que la siguiente manera:
activan el metabolismo celular (suma de todas las
transformaciones de la materia) ya sea por vía Primero, se rotularon 3 tubos de ensayo y se
anabólica (síntesis) o catabólica (degradación), agregó al tubo 1, 3 mL de sangre al 1%, al tubo 2
sin embargo, por exocitosis las enzimas una porción de papa previamente triturada, y al
lisosómicas son liberadas hacia el exterior de la tubo 3 una pequeña porción de MnO2. Dichos
célula constituyendo una barrera de defensa tubos se colocaron dentro de un beaker a baño
extracelular para la célula. [14] maría hasta llegar a una temperatura de 37.5 °C,
aproximadamente por 5 minutos. A cada uno de
3.3.5. Desde el punto de vista enzimático ¿Qué los tubos se les agregó 1 mL de peróxido de
diferencia existe entre la leche cruda y la leche hidrógeno (al 30%) y se observó la intensidad de
pasteurizada? la reacción.
De manera análoga se realizó el mismo
La leche cruda contiene todos los nutrientes procedimiento anterior, con la diferencia de que
intactos. La leche que pasa por el proceso de el baño maría se llevó a cabo durante 10 minutos,
pasteurización pierde las enzimas, minerales y hasta llegar a la ebullición. Posteriormente se les
vitaminas necesarios. Una vez manipulada la agregó 1 mL de peróxido de hidrógeno (al 30%)
leche, tenemos un producto muerto. Esa leche no a cada tubo, observándose la intensidad de la
tiene las enzimas necesarias para digerir el reacción.
magnesio, el calcio, la lactosa, la caseína, la
proteína o el magnesio. [15] 4.3 PREGUNTAS DE EVALUACIÓN Y
CONSULTA
4. EXPERIMENTO 3. COMPARACIÓN
ENTRE LA ACCIÓN CATALÍTICA 4.3.1. De acuerdo a la clasificación de la
DE UNA ENZIMA Y UN catálisis establezca un cuadro comparativo,
CATALIZADOR INORGÁNICO definiendo diferencias y similitudes.

4.1 OBJETIVOS

● Compara la acción catalítica de la


enzima catalasa, con la de un
catalizador inorgánico como el bióxido
de manganeso (MnO2) al descomponer
el peróxido de hidrógeno (H2O2).
● Observar el efecto de la temperatura
sobre la acción catalítica de una enzima
y comparar el mismo efecto de
temperatura sobre un catalizador
inorgánico.
● Medir la actividad catalítica con base en
la producción de calor.
Tabla 1. Diferencias y Similitudes entre tenían 3 coloraciones. El que contenía NaOH
catalizadores biológicos e inorgánicos. (tubo 3) quedó incoloro, el que contenía BaCl2
Biológicos Inorgánicos (tubo 2) presenta una coloración azul y el que
Se forman de Existen menos que los contenía HNO3 (tubo 1) presenta también una
manera natural en compuestos orgánicos coloración azul pero mucho más intensa. Debido
animales y platas a que el lugol reacciona en presencia de almidón
Solubles en agua La formación se da por
presentando coloración azul intensa, se puede
medio de fuerzas
fisicoquímicas decir que en el tubo 3 no hubo actividad catalítica
Forman cadenas No forman cadenas a por parte de la amilasa salival debido a que el pH
excepción de los era muy ácido (pH= 0,97), lo mismo ocurrió en
silicatos el tubo 2 pero en menor proporción ya que en pH
Forman enlaces Forman enlaces iónicos se acercaba a las condiciones óptimas
covalentes y covalentes funcionales (pH= 5,97). El tubo 3, por lo
contrario, no tenía ningún tipo de coloración, sin
Presentan isómeros No presentan isómeros
embargo, es difícil afirmar si hubo o no acción
Son volátiles No son volátiles
A alta temperatura A alta temperatura su catalítica por el pH que se manejaba en el tubo
su actividad actividad incrementa (pH = 12.97). El rango funcional de la amilasa se
incrementa (Temperaturas mayores) encuentra entre 6 y 7 y el del lugol entre 6 y 9,
(Temperatura por tanto, a ese pH puede que el lugol no haya
óptima del cuerpo) funcionado y por tanto no se puede analizar
desde esa perspectiva si hubo o no acción
catalítica.
5. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Otra comparación de la actividad enzimática que
En general, durante la práctica se pudo observar se observó fue al someter a calentamiento la
que la actividad enzimática se ve afectada por sangre junto con el bióxido de manganeso. La
diferentes factores, especialmente, la catalasa en la sangre se desnaturalizó y no
temperatura y el pH. Lo anterior, ocurre ya que reaccionó una vez se añadió en peróxido de
las enzimas se desnaturalizan al cambiar las hidrógeno mientras que el bióxido de manganeso
condiciones óptimas en las que pueden actuar. En reaccionó sin cambio alguno a comparación de
su mayoría, las enzimas se encuentran en cuando se encontraba sin calentamiento. Lo
condiciones normales cuando están a una anterior se debe a que, al ser un catalizador
temperatura de alrededor de los 37°C y un pH inorgánico y a la vez un metal, éste no se ve
entre 6 y 8, de lo contrario, éstas se desdoblan o afectado por la temperatura, luego, la actividad
desenrollan, modificando su empaquetamiento catalítica se podrá llevar a cabo
específico que le permite reaccionar al entrar en independientemente de la temperatura a la que se
contacto con su sustrato particular. haya llevado el mismo.

Se evidenció también que se debe ser cuidadoso


al momento de macerar las muestras, ya que por 6. CONCLUSIONES
ejemplo en el desarrollo de la primera parte, la
muestra de papa no quedó bien triturada, y por - Todas las células vivas, ya sean las que
tanto no pudo realizar su actividad enzimática en conforman tejidos animales o vegetales, cuentan
buena forma porque las células no se pudieron con unos catalizadores específicos, denominados
romper. A su vez, quedaron algunos trozos de enzimas, las cuales sirven para acelerar los
hígado en las paredes del tubo de ensayo, lo que procesos metabólicos. Las reacciones de las
pudo incurrir en errores de esta primera parte. enzimas pueden verse afectadas principalmente
por factores como temperatura, pH,
Se confirmó que la acción catalítica se ve características del medio en que se encuentran,
afectada por el pH. Al añadir Lugol a cada uno entre otros.
de los tubos de ensayo (que se encontraban a
diferentes pH ) se pudo observar que mostraron - Es importante conocer la naturaleza de las
distintas coloraciones. Los tubos de ensayo enzimas al momento de tratar con ellas, ya que
esto permitirá saber su rango de funcionalidad y
los factores que la afectarían, en especial el pH y [6]. CATALIZADORES Y ENZIMAS.
la temperatura a la cual es sometida, ya que ésta [Internet].[Consultado el 04/05/2019].
puede llegar a desnaturalizarse y perder su Disponible en:
actividad enzimática. https://bteduc.com/guias_es/59_Catalizadores_y
_enzimas.pdf
- Las enzimas biológicas tienen un rango de
temperatura (Tª) en el que presenta actividad, [7]. Prueba del almidón: reacción con yodo.
aumenta su actividad con el aumento de Tª, [Internet].[Consultado el 04/05/2019].
siendo su actividad máxima normalmente Disponible en:
próxima a la Tª óptima del organismo de la https://www.murciaeduca.es/iesricardoortega/sit
enzima (en el caso de los humanos 36ºC) a partir io/upload/Prueba_del_Iodo.pdf
de esta temperatura pierden actividad llegando a
desnaturalizarse (perder la estructura [8]. Reactivo de Lugol es.[Internet].[Consultado
tridimensional que le da las propiedades el 04/05/2019]. Disponible en:
catalíticas). Por otra parte, los catalizadores https://www.coursehero.com/file/p39041h/REA
inorgánicos aumentan su actividad al aumentar la CTIVO-DE-LUGOL-El-lugol-o-
Tª, pero suelen actuar con la máxima velocidad soluci%C3%B3n-de-Lugol-es-una-
de catálisis o con velocidades óptimas a Tªs disoluci%C3%B3n-de-yodo/
mayores (150ºC, 400ºC, 800ºC) que las enzimas
biológicas. [9]. EFECTO DEL PH Y TEMPERATURA
SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA
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https://www.medicinatv.com/videoteca/leche-
pasteurizada-vs-leche-cruda-por-ata-pouramini/
ANEXOS

Figura 1. Macerado de la Papa para


Figura 2. Muestras de hígado y papa
la determinación de peroxidasa o
para baño maría.
catalasa en tejidos animales y
vegetales

Figura 3. Muestras de papa e hígado


a temperatura ambiente y a baño Figura 4. Actividad catalítica de la
María después de la adición de amilasa salival a diferentes pH
H2O2.
Figura 5. Actividad catalítica de un Figura 7. Calentamiento muestras de
catalizador inorgánico (MnO2) y un catalizadores biológicos e
catalizador biológico a 37°C. inorgánicos.

Figura 7. Actividad catalítica de un


catalizador inorgánico y un
catalizador biológico después de
someterlos a calentamiento.

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