Práctica Nº 4 Y 5

Aislamiento y Siembra de Hongos Levaduriformes y

Filamentosos

I. INTRODUCCION

Los hongos son microorganismo eucariotas de mayor tamaño y complejidad que las
bacterias. Según su morfología los hongos se pueden dividir en dos grupos: mohos
(hongos filamentosos) y levaduras (hongos levaduriformes)
Los hongos filamentosos están ampliamente distribuidos en la naturaleza y se
caracterizan por presentar como unidad estructural unos filamentos formados por una
o más células llamados hifas, que al reunirse dan lugar a un conglomerado de nombre
micelio. las levaduras son hongos unicelulares de células ovales o cilíndricas
normalmente. Tanto los hongos filamentosos como las levaduras son microscópicos,
pero al formar colonias grandes (las cuales en un cultivo descienden de una sola
célula) pueden apreciarse la simple vista. Las setas por su parte son hongos
filamentosos que forman cuerpos fructíferos macroscópicos. Los hongos
filamentosos, setas incluidas, se consideran organismos t a l o f í t i c o s porq u e
tienen un nivel de organización más sencillo que los tejidos, pero más complejo que
las colonias, en la que sus células se agrupan sin diferenciarse, pero algunas de
ellas si se diferencian, especializándose para la reproducción, otros organismos
talofíticos son las algas. Los hongos revisten gran interés científico puesto que
muchos de ellos producen o participan en la producción de muchas substancias y
bienes útiles al hombre, aunque muchos son también importantes agentes
infecciosos del hombre.

II. OBJETIVOS
 Realizar un aislamiento de hongos a partir de inóculos variados
 Describir las estructuras de los hongos filamentosos y hongos levaduriformes
 Determinar los requerimientos nutricionales y culturales de los hongos.
 Preparar y observar muestras frescas de los cultivos de hongos logrados y graficar
lo observado indicando las partes que lo componen
 Investigar sobre el tratamiento de las micosis que afectan a los humanos.

III. MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS

a. MATERIALES
Inóculos: levadura comercial, moho blanco en el pan, moho verde en el pan, secreción
vaginal.
 Agar Sabouraud dispensado en placas Petri
 Agua destilada esterilizada
 Vaso de precipitación de 50 ml
  Mechero con alcohol
 Asa de siembra
 Estilete
 Pinza de rama recta
 Bisturí
 Placas Petri
 Láminas portaobjetos
 Laminillas cubreobjetos
 Incubadora
 Colorante azul de algodón
 Hidróxido de sodio (NaOH)
 Guantes limpios
 Mascarilla
 Microscopio compuesto

1.1 PROCEDIMIENTOS

3.2.1. Aislamiento y Siembra de hongos levaduriformes (levadura comercial)

Precauciones: usar guantes y mascarilla para toda la toma de muestra
PRIMERA PARTE
1. En una placa Petri colocar 2ml de agua destilada y una porción muy pequeña de levadura
comercial y diluirla.
2. Con ayuda de una aza de siembra sacar una alícuota de la dilución y sembrarla en medio
Sabouraud por el método de agotamiento en estría.
3. Poner a incubar a temperatura ambiente durante 7 días.
SEGUNDA PARTE
4. Una vez logrado el cultivo, preparar muestras frescas de la siguiente manera:
En el centro de una lámina portaobjetos colocar una gota de azul de algodón o de no haber
este reactivo una gota de Na OH.
5. Cubrir con laminilla.
6. Observar en el microscopio utilizando los aumentos de 10X Y 40X
7. Graficar lo observado

3.2.2 Aislamiento y Siembra de hongos filamentosos (moho blanco en el pan)

PRIMERA PARTE
1. En una placa Petri colocar un trozo de pan enmohecido
2. Con ayuda de una pinza y un bisturí sacar pequeñas porciones de la zona donde ha
crecido más el hongo.
3. Hacer la siembra colocando con la pinza esas pequeñas porciones obtenidas en la
superficie del medio Sabouraud.
4. Usando el aza de siembra incinerada y fría presionar sobre el inóculo para que se
adhiera al medio.
1. Poner a incubar a temperatura ambiente durante 7 días.
 SEGUNDA PARTE
6. Una vez logrado el cultivo, preparar muestras frescas de la siguiente manera:
7. En el centro de una lámina portaobjetos colocar una gota de azul de algodón o de no
haber este reactivo una gota de Na OH.
8. Cubrir con laminilla.
9. Observar en el microscopio utilizando los aumentos de 10X Y 40X
10.Graficar lo observado.

3.2.3 Aislamiento y Siembra de hongos filamentosos (moho Verde del pan)

PRIMERA PARTE
1. En una placa Petri colocar un trozo de pan enmohecido
2. Con ayuda de una pinza y un bisturí sacar pequeñas porciones de la zona donde ha
crecido más el hongo
3. Hacer la siembra colocando con la pinza esas pequeñas porciones obtenidas en la
superficie del medio Sabouraud.
4. Usando el aza de siembra incinerada y fría presionar sobre el inóculo para que se
adhiera al medio.
5. Poner a incubar a temperatura ambiente durante 7 días.
SEGUNDA PARTE
6. Una vez logrado el cultivo, preparar muestras frescas de la siguiente manera:
7.En el centro de una lámina portaobjetos colocar una gota de azul de algodón o de no
haber este reactivo una gota de Na OH
8. Cubrir con laminilla.
9. Observar en el microscopio utilizando los aumentos de 10X Y 40X
10. Graficar lo observado.

1.1.1 Aislamiento y Siembra de hongos levaduriformes (secreción vaginal)

PRIMERA PARTE
1. Con un hisopo estéril sacar una pequeña porción de la muestra biológica contenida en un
frasco.
2. Con ayuda del mismo hisopo sembrarla en medio Sabouraud por el método de
agotamiento en estría.
3. Poner a incubar a temperatura ambiente durante 7 días.
SEGUNDA PARTE
4. Una vez logrado el cultivo, preparar muestras frescas de la siguiente manera:
5. En el centro de una lámina portaobjetos colocar una gota de azul de algodón o de no
haber este reactivo una gota de Na OH.
6. Cubrir con laminilla.
7. Observar en el microscopio utilizando los aumentos de 10X Y 40X
8. Graficar lo observado.
 IV. RESULTADOS

CUADRO DE PRIMER CULTIVO

Inóculo Procedimiento de Gráficos de los resultados observados Gráficos de las observaciones

cultivo en la placa microscópicas

Se diluye la
levadura y con
Levadura
ayuda del asa de
de uso
siembra tomar con
industrial
la alícuota (aro) y
trasladarlo a la
placa preti que
contiene el agar
Sabouraud y hacer
la siembra por
agotamiento en
estría.

CUADRO DEL SEGUNDO CULTIVO

Inóculo Procedimiento de Gráficos de los resultados observados Gráficos de las observaciones
cultivo en la placa microscópicas

En una mitad de
placa Petri y con
Moho
ayuda de un bisturí
blanco
retirar pequeñas
de pan
porciones del hongo
que está creciendo
en la superficie del
pan, luego depositar
algunas porciones
con ayuda del asa
se presiona para
que pegue la
muestra en el agar.
Igual se hace con el
inoculo verde de
pan

CUADRO DEL TERCER CULTIVO

Inóculo Procedimiento de Gráficos de los resultados observados Gráficos de las observaciones
cultivo en la placa microscópicas

En una placa Petri

con ayuda del
Moho
bisturí sacar
verde en
pequeñas
frutas
porciones del
naranja
hongo que ha
crecido sobre la
superficie de la
fruta podrida y
depositarlo sobre
el agar, con ayuda
del asa colocar
pequeñísimas
porciones sobre la
placa Petri.
 CUADRO DEL CUARTO CULTIVO

Inóculo Procedimiento de Gráficos de los resultados observados Gráficos de las observaciones

cultivo en la placa microscópicas

Destapar
cuidadosamente el
Secreción
recipiente, con un
vaginal
hisopo tomar una
(humano)
pequeña porción y
extender sobre el
agar. Esta siembra
es por agotamiento
por estría. Flamear
el gollete del aro
para desinfectar.

Observaciones:

 En la mitad de la placa donde que correspondía al inoculo de la secreción vaginal se logró

observar puntos negros, se supuso que era una colonia de hongos por su forma de
crecimiento, primeramente, no se sabía su clasificación ni nombre, pero se investigó y se
logró determinar que es un hongo filamentoso llamado aspergillus niger que suele crecer
en vegetales o también en limones o naranjas como se dio en el caso. Esta especie de
hongo es inocua para los seres humanos, pero en cantidades excesivas puede causar
aspergilosis que puede causar enfermedades pulmonares.

V. CONCLUSIONES
 Los hongos son organismos heterótrofos que necesitan para su alimentación
sustancias elaboradas, en este caso en la práctica se usó como alimento un
sustrato que es el agar Sabouraud para el respectivo aislamiento de hongos de
inóculos variados . Los hongos pueden ser macroscópicos y microscópicos, los
microscópicos se presentan en dos formas, levaduriformes que contienen
protuberancias conocidas como gemas, y filamentosas que liberan esporas, en
los cultivos se pudo observar de forma macroscópica el crecimiento de colonias
de hongos filamentosos sacados de la muestra de pan (moho de pan,Rhizopus
 Nigricans) y naranja (moho de la naranja, penicillium digitatum), y
microscópicamente se observo e identifico en el microscopio hongos
levaduriformes sacados de la muestra de secreción vaginal (posiblemente
cándida) y de la levadura industrial (Saccharomyces cerevisiae).
 Los hongos filamentosos están formados por ramas tubulares llamadas hifas, el
conjunto de las cuales forman el micelio. Se reproducen por la formación de
esporas, las cuales pueden ser pigmentadas y le dan el color al hongo. Al centro
de la colonia se ubican las hifas fértiles que dan origen a las esporas, razón por
la cual los hongos son más coloreados en esa zona. Los hongos levaduriformes
son unicelulares globosos, ovales o alargados de 2 – 6 um. que presentan
reproducción asexuada a través de gemación (Torulopsis, Cándida), fisión
binaria (Schizosaccaromyces) o procesos intermedios (Saccharomyces). Las
levaduras se desarrollan a temperaturas óptimas entre 25 y 30°C y forman
colonias lisas, de textura húmeda, cremosas o membranosas (sin hifas aéreas)
semejantes a las bacterias.
 Los requerimientos nutricionales de los hongos van a depender de nutrientes
orgánicos que son solubilizados por sistemas enzimáticos específicos y son
absorbidos a través de su pared celular y membrana plasmàtica. Los hongos
utilizan como fuente sustratos que contengan carbono principalmente para su
síntesis celular, en este caso se usó el agar Sabouraud como fuente para el
cultivo de hongos, cuya composición principal esta a base de glucosa y
pluripeptona. Entre los requerimientos culturales está el pH óptimo de 3,4 – 5,7,
Tº 20-30.

Muestra de levadura de Moho blanco de pan

uso industrial
 Muestra de moho verde en Muestra de secreción
naranja vaginal

 La micosis son enfermedades fúngicas que se clasifican según diferentes

criterios clínicos y topográficos en micosis superficiales (cutáneas y mucosas),
subcutáneas y micosis invasoras. Las micosis se han denominado por el nombre
del hongo implicado, como la aspergilosis causada por Aspergillus, El tratamiento
de las infecciones por hongos suele prolongarse entre una y tres semanas, y el más
recomendable es la aplicación de antifúngicos o antimicóticos. Estos medicamentos
antimicóticos por vía oral también pueden utilizarse para las infecciones graves. Para
las infecciones en la piel y las uñas se pueden aplicar medicamentos directamente
sobre el área infectada. En el caso de las infecciones vaginales o candidiasis, los
medicamentos pueden aplicarse en forma de cremas, tabletas vaginales o
supositorios y la mayoría de ellos pueden comprarse sin necesidad de acudir a un
médico.

VI. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA

 Francisco Kuhar, Valeria Castiglia y Leandro Papinutt. Reino fungi: Morfologias y estructuras
de los hongos, 2013. Disponible en: https://core.ac.uk/download/pdf/52479411.pdf

 Scilobs mikrosphera. Investigación y ciencia. Articulo: micosis: los hongos invisibles y

las enfermedades que provocan, 1 de junio del 2005. Disponible en:
https://www.investigacionyciencia.es/blogs/medicina-y-biologia/74/posts/micosis-los-
hongos-invisibles-y-las-enfermedades-que-provocan-13225