PRACTICA N° 16

INFLUENCIA DEL pH SOBRE EL CRECIMIENTO MICROBIANO

INTRODUCCIÓN

Para obtener el crecimiento óptimo de los microorganismos, no sólo son indispensables los
requerimientos nutricionales, sino otros factores ambientales tanto físicos como químicos. Un
agente físico es una condición física o propiedad física que causa un cambio, por ejemplo la
humedad, la temperatura, la presión osmótica, el pH, las radiaciones y los filtros bacteriológicos. El
crecimiento de los microorganismos se modifica o se limita al cambiar los factores ambientales
físicos en el medio. El conocimiento de los factores ambientales nos permite explicar la distribución
de los organismos en la naturaleza, sobre todo en el caso de organismos que son patógenos, que
causan deterioro en los alimentos o que dan lugar a pérdidas económicas en otras formas. El manejo
de estos factores se puede utilizar para el control del crecimiento microbiano.

OBJETIVO

Comparar la susceptibilidad de los organismos ante diferentes factores físicos, observando sus
modificaciones en el crecimiento.

MATERIALES Y MÉTODOS

 Muestras de alimentos, manzana, piña, ajo, azucar, harina

 Agar peptona
 Stomacher
 Gradilla
 Pipetas
 Balanza analítica
 Vasos precipitados
 Vaso Erlenmeyer
 pH-metro
 Autoclave
 Tubos de ensayo 6 por grupo
 Guantes descartables
 microscopio óptico de refracción.
 juegos de portaobjetos y cubreobjetos (6 unidades).
 cámara fotográfica para el microscopio
 agentes de limpieza
 papel filtro
 probeta

PROCEDIMIENTO

Preparar el medio de cultivo y autoclavar

Realizar las diluciones correspondientes de cada muestra si el caso lo requiere (1 a 9)
Medir el pH
Filtrar
 METODOLOGIA

IV. Influencia del pH

Prepare dos series de tubos con caldo nutritivo y con diferentes pH (3.0, 5.0, 7.0 y 9.0). 1.

1. Deje un tubo control del caldo normal sin sembrar.

2. Inocule una serie de diferentes pH, con 0.1 ml de Escherichia coli y otra serie con la
levadura Saccharomyces cerevisiae.

3. Deje un tubo control sin sembrar.

4. Incube la bacteria a 37°C y la levadura a 28°C.

5. Registre la turbidez en el colorímetro y compare el crecimiento en los diferentes pH y con

los diferentes organismos.

II. Conteo directo de bacterias al microscopio

Método de Breed (conteo que incluye células vivas y muertas):

1. En un portaobjetos limpio y desengrasado, marque un área de 2 cm 2 cuadrados. Invierta

la laminilla.

2. Deposite 0.01 ml de un cultivo y extiéndalos en el área marcada del portaobjetos y deje

secar a temperatura ambiente.

3. Fije con calor y tiña con azul de metileno de Löeffler.

4. Lave con agua de la llave. Deje secar a temperatura ambiente.

5. Coloque el objetivo micrométrico en la platina del microscopio y observe a 100 X.

6. Mida el diámetro del campo microscópico.

7. Cada división de la escala del objetivo micrométrico mide 10 mm, es decir 0.01 mm =
0.001 cm.

8. Determine la superficie del campo microscópico con la siguiente fórmula:

r2 en cm X 3. 1416 = Superficie de campo microscópico en cm

9. Determine el número de campos microscópicos que existen en la preparación con la

fórmula:

Superficie de la preparación = número de campos microscópicos

Superficie del campo microscópico

10. Coloque en la platina del microscopio la preparación teñida de las bacterias y cuente las
bacterias en 10 campos. Obtenga el valor medio de organismos por campo microscópico.
11. Calcule el número de bacterias que hay en la preparación (0.01 ml) y en 1 ml del cultivo,
con la fórmula:
 # de bacterias x # de campos = # de bacterias x 100 = # bacterias/ml por campo
microscópicos en la preparación de cultivo.

RESULTADOS, DISCUSIÓN

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFIA

ANEXOS