B.

MÉTODO 2: DETECCIÓN RÁPIDA DE SALMONELLA (SINGLEPATH)

EQUIPOS Y REACTIVOS

Stomacher
Bolsas para stomacher
Balanza digital
Incubadora a 35+/-2°C
Incubadora 41.5°C
Cámara de flujo laminar
Espátulas, tijeras estériles
Pipetas estériles de 1mL
Gradillas
Cajas de petri
Caldo de pre enriquecimiento no selectivo (225 mL agua peptonada ó caldo latosado)
Caldo RVS
Agar rambach, XLT o XLD

PROCEDIMIENTO

Paso 1. Realizar pre- enriquecimiento o enriquecimiento no selectivo:

Pese 25 gramos de la muestra en una caja estéril, realice este procedimiento bajo la cámara de
flujo laminar. Lleve a un frasco bacteriológico y añada los 225 mL de agua peptonada o caldo de
pre- enriquecimiento.
Este paso también se puede realizar pesando la muestra en la bolsa para stomacher, y adicionar
los 225 mL de agua peptonada y poner a funcionar el equipo durante un minuto.
Incube a 35+/-2°C por 18+/-2 horas

Paso 2. Enriquecimiento Selectivo:

Transfiera un 0,1 mL del caldo a un tubo que contenga 10 mL de caldo RVS (Rappaport
Vassiliadis Soja) e Incube a 41,5°C por 24+/-3 horas
Transferir de 2 a 3 mL en un tubo y tapar con la tapa floja.
Poner en agua a ebullición durante 15 minutos
Enfriar a temperatura ambiente
Transferir 160 μL al casset de prueba
Leer el resultado a los 20 minutos
Si sale una raya la prueba es negativa, si salen dos rayas es positiva.
Si la prueba es positiva se debe sembrar en agar Rambach, agar XLT o agar XLD para la
confirmación.
C. MÉTODO 3: ENRIQUECIMIENTO EN 24 HORAS (CALDO SALMOSYST®)

EQUIPOS Y REACTIVOS
Stomacher
Bolsas para stomacher
Balanza digital
Incubadora a 35+/-2°C
Cámara de flujo laminar
Espátulas, tijeras estériles
Pipetas estériles de 1mL
Gradillas
Cajas de petri
Caldo SALMOSYST®.
tableta de SALMOSYST® SUMPLEMENTO
Agar SS y Hektoen

PROCEDIMIENTO

Pese 25 gramos de la muestra en una caja estéril, realice este procedimiento bajo la cámara de
flujo laminar. Lleve a un frasco bacteriológico y añada los 225 mL de caldo SALMOSYST®.
Incubar por 6 horas a 35 o 37°C
Agregar una tableta de SALMOSYST® SUMPLEMENTO a 10 mL del caldo anterior
Continuar incubando durante 18 horas a 35 o 37°C
A partir de los caldos de enriquecimiento selectivo siembre 0,1 ml en cajas con agares SS y
Entérico Hektoen.
Incube las placas a 35+/-2°C por 24 a 48 horas
En agar SS, las colonias de Salmonella se observan transparentes con centro negro.

En el agar Entérico Hektoen las colonias se observan verde-azuladas, con o sin centro negro.

CUESTIONARIO

Qué indica la presencia de Salmonella en un alimento?

Qué enfermedades puede causar este microorganismo en el hombre?
Para qué se hace el pre-enriquecimiento y el enriquecimiento en estas pruebas?
Qué alimentos son más susceptibles a la contaminación por esta bacteria?
Cuáles son las fuentes y como evitar su contaminación?
¿Cuales son las pruebas bioquímicas se realizan para la confirmación de esta bacteria?