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FACULTAD DE INGENIERÍA
Departamento de Ingeniería de Alimentos Página
Maestría en Ciencias Agroalimentarias
ABSTRACT
INTRODUCCION
Los principios generales de la cinética de las reacciones
químicas son aplicables a las reacciones catalizadas por las
enzimas, es así como L. Michaelis y M. Menten lograron
desarrollar una ecuación modelo que se ajusta al comportamiento
de las enzimas en una reacción (Lehninger A. 1978). A partir
de esta ecuación se pueden dilucidar parámetros experimentales
catalíticos propios de la enzima, como su Km (constante de
Michaelis-Menten) para un sustrato, con base en la
linealización de la ecuación de la velocidad, llamada modelo
lineal de Lineweaver-Burk (Voet D, et al 2006). La constante
de Michaelis-Menten (Km) es una magnitud determinada
experimentalmente y definida como la concentración de sustrato
a la cual la velocidad de la reacción es la mitad de la
velocidad máxima (Lehninger A. 1978).
La glucoamilasa (glucano 1,4-α-glucosidasa) es una enzima
fúngica, extracelular, producida comercialmente con
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MATERIALES Y METODOS
Reactivos
𝒅[𝑺]
= −𝒗 𝑬𝒄 𝟏
𝒅𝒕
𝒅[𝑷]
=𝒗 𝑬𝒄 𝟐
𝒅𝒕
𝑽𝒎𝒂𝒙[𝑺]
𝒗= 𝑬𝒄 𝟑
𝑲𝒎 + [𝑺]
Donde [s] y [p] son la concentración de maltodextrinas y de
azúcares reductores en Mm/mL respectivamente. Vmax (Mm/mL-min)
y Km (Mm/mL) son parámetros del modelo que representan la
velocidad máxima de formación de azúcares reductores y la
concentración de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la
velocidad máxima, respectivamente.
REULTADOS Y DISCUCION
Construcción de la Curva patrón
Cuadro 1. Absorbancias de las muestras de concentración (µg/mL)
conocida a una longitud de onda de 575 nm medidas en un
espectrofotómetro.
ml S/n
Tubo mL agua Concentración Absorbancia
Estándar (µg/mL)
1 0 1 0 0
2 0,2 0,8 200 0,038
3 0,4 0,6 400 0,093
4 0,6 0,4 600 0,162
5 0,8 0,2 800 0,241
6 1 0 1000 0,291
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Recta de Calibracion
0,35
y = 0,0003x - 0,0149
0,3 R² = 0,9899
0,25
Adsorbancia nm
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 200 400 600 800 1000 1200
-0,05
Concentracion ppm
P
Sustrato Tiempo Absorbancia DILUCION PRODUCTO U Mm/min
% (min) nm Mm/mL mL
µg/mL
1% 0,00 0,006 69,67 0,046
1% 10,00 0,008 76,33 0,051 0,0025
1% 20,00 0,012 89,67 0,060 0,0015
1% 30,00 0,012 89,67 0,060 0,0010
1% 40,00 0,016 103,00 0,069 0,0009
1% 50,00 0,020 116,33 0,078 0,0008
1% 60,00 0,027 139,67 0,093 0,0008
1% 70,00 0,036 169,67 0,113 0,0008
1% 80,00 0,044 196,33 0,131 0,0008
0,100
0,080
0,060
0,040
0,020
0,000
0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00
Tiempo min
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P
Sustrato Tiempo Absorbancia DILUCION PRODUCTO U Mm/min
% (min) nm Mm/mL mL
µg/mL
2% 0,00 0,012 89,67 0,060 -
2% 10,00 0,015 99,67 0,066 0,0033
2% 20,00 0,016 103,00 0,069 0,0017
2% 30,00 0,034 163,00 0,109 0,0018
2% 40,00 0,051 219,67 0,146 0,0018
2% 50,00 0,057 239,67 0,160 0,0016
2% 60,00 0,063 259,67 0,173 0,0014
2% 70,00 0,076 303,00 0,202 0,0014
2% 80,00 0,079 313,00 0,209 0,0013
y = 0,0021x + 0,0485
0,200 R² = 0,9651
Glucosa µg/mL
0,150
0,100
0,050
0,000
0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00
Tiempo min
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P
Sustrato Tiempo Absorbancia DILUCION PRODUCTO U Mm/min
% (min) nm Mm/mL mL
µg/mL
3% 0 0,018 109,67 0,07
3% 10 0,028 143,00 0,10 0,0048
3% 20 0,039 179,67 0,12 0,0030
3% 30 0,060 249,67 0,17 0,0028
3% 40 0,076 303,00 0,20 0,0025
3% 50 0,082 323,00 0,22 0,0022
3% 60 0,094 363,00 0,24 0,0020
3% 70 0,101 386,33 0,26 0,0018
3% 80 0,118 443,00 0,30 0,0018
0,30
y = 0,0028x + 0,074
R² = 0,9865
Glucosa Mm/mL
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Tiempo min
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0,400
0,300
0,200
0,100
0,000
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Tiempo min
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0,400
0,300
0,200
0,100
0,000
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0,300
0,200
0,100
0,000
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CINETICA DE LA GLUCOAMILASA
1200,000
y = 2,4011x - 6,139
1/P producto (Mm/mL min)-1
1000,000 R² = 0,992
800,000
600,000
400,000
200,000
0,000
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450
1/[S] Sustrato (Mm/mL)-1
𝐾𝑚 1
= 2,4011 𝑦 = 6,139
𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑉𝑚𝑎𝑥
1
𝑽𝒎𝒂𝒙 = = 0,1629 𝑀𝑚/𝑚𝑖𝑛
6,139
𝐾𝑚 = 0,39 𝑀𝑚/mL
ACTIVIDAD ENZIMATICA
0,004
0,0035
Mm/min mL
0,003
0,0025
0,002
0,0015
0,001
U
0,0005
0
0,00000 0,00200 0,00400 0,00600 0,00800 0,01000 0,01200 0,01400 0,01600
[S] Sustrato Mm/mL
CONCLUSIONES
De este trabajo se puede concluir que Vmax está por encima de
los valores experimentalmente se obtuvieron, es decir, que los
tiempos de reacción fueron insuficientes para alcanzar la Vmax
se reacción a las condiciones de trabajo. También podemos
deducir que si se incrementa la concentración de maltodextrinas
muy por encima de 0,014 Mm/mL, y a mayor concentración de
enzima, se podrían obtener mayores velocidades de hidrólisis
y, por consiguiente, menores tiempos de tratamiento.
También se puede afirmar que existió un efecto de la
concentración de sustrato sobre la actividad enzimática, dado
que la actividad enzimática fue en aumento, en función del
aumento de la concentración de sustrato.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Lehninger A. Bioquímica: las bases moleculares de la estructura
y función celular. 2da edición. Barcelona: Ediciones Omega,
S.A.; 1978. p 1117.
Voet D, Voet J. Bioquímica. 3ra edición. Madrid: Editorial
Médica Panamericana S.A.; 2006. p 1776.
Jennylynd AJ, Byong HL. Glucoamylases: Microbial Sources,
Industrial Applications and Molecular Biology — A Review. J
Food Biochem. 1997 Dec; 21 (6): 1-52.
Agudelo B, Sánchez C, Figueroa C. Producción de jarabe
glucosado mediante sacarificación enzimática. Empleo de un
reactor con membrana. Ingeniería Química. 2004 Jul; 415: 197-
199. (Agudelo B,et al 2004)
Kovalenko GA, Perminova LV, Plaksin GV, Chuenko TV, Komova OV,
Rudina NA. Immobilized glucoamylase: A biocatalyst of dextrin
hydrolysis. Appl Biochem Micro. 2006 Mar; 42 (2): 145-149.
Nebesny E, Rosicka J, Tkaczyk M. Influence of Conditions of
Maize Starch Enzymatic Hydrolysis on Physicochemical
Properties of Glucose Syrups. starch. 2004 Apr; 56 (3-4): 132-
137.
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