UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Facultad de Ingeniería

Escuela Académica Profesional de Ingeniería de Materiales

PRACTICA FINAL

“EXTRACCION DEL ADN EMPLEANDO COMPUESTOS DETERSIVOS”

MATERIA: Laboratorio de Organización y funcionamiento celular.

DOCENTE: Dr. Beltrán Orbegoso, Raúl Antonio.

ALUMNO:

 Velarde Vallejos, Eduardo

 Tirado Gutierrez, Javier
 Rojas Polo, Alex
 Reyes Llaro, Alfredo

TURNO: Viernes 11:00 am – 1:00pm.

TRUJILLO – PERÚ

2017
I. INTRODUCCION

En este último laboratorio se está concluyendo la unidad con un tema

sumamente interesante que es “La extracción del ADN empleando
compuestos detersivos”. Para esto se trituro el hígado en un mortero de
porcelana mientras tanto por otro lado se hacia una solución de alcohol con
detergente Ariel, después de esto se mezcló el hígado triturado con la
solución de alcohol y detergente de Ariel en un vaso de precipitación.
Posteriormente se introdujo en la mezcla, la pastilla de la fructuosa.

Para finalizar se pasó a hacer un proceso de filtración; este proceso se

realizó dos veces. Después de unos cuantos minutos se observó que el
ADN comenzó a surgir en la interface de la solución.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

El proceso de extracción del DNA geonómico sigue ciertas pautas para su

correcta purificación que son muy diferentes a los empleados en la
purificación de proteínas, lo que refleja las diferencias básicas en la
estructura de estos dos tipos de macromoléculas. El primer paso en la
purificación del DNA consiste en homogeneizar las células y distar los
núcleos de los cuales se extrae el DNA. El medio de extracción de ordinario
contiene un detergente, como el SDS, que sirve para lisar los núcleos y
liberar el DNA, hecho que aumenta notablemente la viscosidad de la
solución. El detergente inhibe también cualquier actividad nucleasa en la
preparación.

El objetivo de los pasos de purificación es separar el DNA de materiales

contaminantes, como RNA y proteínas.

La desproteinización se logra en general agitando la mezcla con un

volumen de fenol. El fenol (o alternativamente cloroformo) es un
desnaturalizador activo de proteínas que suprime la solubilidad de las
proteínas en la preparación y las precipita. Puesto que el fenol y la solución
salina amortiguadora no se mezclan, solo se requiere centrifugar la
suspensión para separar las bases, permaneciendo el DNA (y el RNA) en
la solución dentro de la fase acuosa de arriba y la proteína presente como
un precipitado concentrado en la interface. La fase acuosa se retira y se
somete a ciclos repetidos de agitación con fenol y centrifugación hasta
agotar toda la proteína de la solución. Añadiendo etanol frío. El etanol frío
forma una capa arriba de la solución acuosa del DNA, el cual, se aísla de
las demás moléculas conforme sale de la solución.

En la interface el RNA sale de la solución salina.

En contraste, el RNA sale de la solución como precipitados. Luego de este

primer paso de purificación, se disuelve el DNA y se trata con ribonucleasa
mediante tratamiento con una proteasa. Enseguida sale la proteasa por
desproteinización con fenol y se vuelve a precipitar el DNA.

La electroforesis es una de las técnicas más empleada en bioquímica y

biología molecular, usada para separar y a veces purificar
macromoléculas, especialmente proteínas y ácidos nucleicos, que difieren
en tamaño, carga o conformación.

Cuando las moléculas cargadas son sometidas a un campo eléctrico,

migran hacia el polo positivo (ánodo) como es el caso de los ácidos
nucleicos o negativo (cátodo) de acuerdo a sus cargas.

Los fragmentos de DNA lineal migran a través del gel de agarosa con una
movilidad inversamente proporcional al log10 de su masa molecular,
situándose los más pequeños más cerca del polo positivo, adoptando una
apariencia similar a un código de barras. Cada barra contiene un fragmento
de ADN de un tamaño determinado más o menos cada 23 pares de bases.

Entre los diferentes factores que afectan la movilidad de los fragmentos de

ADN en el gel de agarosa que pueden optimizarse para la separación de
los fragmentos está la concentración de agarosa.
III. OBJETIVOS:
 Obtener ADN a partir del tejido animal (hígado) empleando compuestos
detersivos.

IV. MATERIALES

 ½ litro de Alcohol Etílico de 96%

 1 litro de Agua Destilada
 1 Colador
 Tela tipo grasa
 Papel filtro
 Hígado de pollo
 Detergente Ariel (150 gr)
 Bicarbonato de sodio ( Aprox. 30gr)
 Pastilla Frutanzima

V. METODOS
 Proceder a triturar hígado de pollo empleando un mortero, añadiendo agua
destilada, luego proceder a filtrar.
 Es un vaso de precipitación colocar 250 ml de agua destilada y añadir
aproximadamente 10 gr de detergente (Ariel). En este sistema adicionar el
triturado del hígado.
 Añadir la enzima (pastilla enzimática-Frutanzima) y el bicarbonato de sodio.
 Proceder a mezclarlo hasta homogeneizarlo empleando la baqueta.
 Se procedió a colar la mezcla 3 veces.
 Adicionar el alcohol frio.
 Observar en la interface la presencia de fibras blanquecinas (ADN).
 VI. RESULTADOS

FIG 01: Triturado del hígado de pollo

FIG.02: Vaciado del detergente al vaso

de precipitado con hígado del pollo y FIG.04: Homogenizar toda la solución

agua destilada
FIG.03: Pastilla + bicarbonato

Frutanzima de sodio FIG.05: Colar unas 3 veces

FIG.06: Agregar alcohol frio de 96° FIG.07: Observación del ADN del hígado de pollo
VII. CONCLUSIONES

En esta práctica se logró el objetivo principal y planteado que es la extracción

del ADN en este caso fue de tejido animal, todo esto siguiendo una serie de
pasos para poder lograrlo, y al final se pudo concluir que la práctica fue
realizada con éxito, ya que se pudo apreciar las fibras blanquecinas las cuales
representan al ADN.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Ordoñez Caicedo. (2015). Campo magnético terrestre. 2017, de

Academia Sitio web:

http://www.academia.edu/24462624/Campo_magn%C3%A9tico
_terrestre._Laboratorio
 Anonimo. (2007). Campo Magnético Terrestre. 2017, de EcuRed

Sitio web:
https://www.ecured.cu/Campo_Magn%C3%A9tico_Terrestre
 Anonimo. (2005).

https://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/rdelgado/docencia/F
ISICA_ITI/PRACTICAS/Campo-Magn-Terr.pdf. 2017, de PDF Sitio
web:
https://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/rdelgado/docencia/F
ISICA_ITI/PRACTICAS/Campo-Magn-Terr.pdf