EXTRACCION Y CUANTIFICACION DE COLESTEROL

Muestra: 100g de Carne res, Cerdo, Hígado y pescado

Todos los estudiantes se dividirán en 4 grupos de trabajo, en donde cada uno traerá una muestra
de trabajo.

Reactivos:

● 200mL Cloroformo
● 200mL Metanol
● Agua destilada
● Reactivo de Liebermann Burchard
● 100mg Colesterol
● 50mL Ácido acético glaciar

Materiales y reactivos:

● 10 Tubos de ensayo
● Pipeta Pasteur
● Vidrio reloj
● Pipeta de 20mL
● Pipeta de 1mL
● Pera de succión
● Balanza analítica
● Licuadora
● Cuchillo y Tabla de picar
● Bomba de filtrar al vacío
● Papel aluminio
● Probeta de 200mL
● Papel filtro Whatman Nº 1
● Balón de separación de 500mL
● Baño maría 37ºC
● Baño frio
● Frasco ámbar
● Espectrofotómetro

Extracción y cuantificación de colesterol

El siguiente procedimiento es para material que contiene aproximadamente 80% de agua y 1% de

lípidos, por 100g de muestra fresca o congelada homogenizar en licuadora por 2min con una mezcla
de 100mL de cloroformo y 200mL de metanol. A la mezcla es adicionada 100mL de cloroformo y
continuar licuando por 30seg. Luego adicionar 100mL de Agua destilada y volver a licuar por 30seg.
Filtrar al vacío el producto con papel Whatman Nº 1 en embudo Büchner. El filtrado es transferido
a un balón de separación de 500mL. Después de unos minutos en reposo, para favorecer la
separación y clarificación se elimina la capa alcohólica, También se elimina un pequeño volumen de
la capa de cloroformo para asegurar la eliminación completa de la capa superior. Medir el volumen
de la capa de cloroformo para cálculos posteriores. Opcionalmente el lípido retenido en los residuos
de tejido se recupera mezclando el residuo y el papel de filtro con 100 ml de cloroformo y por último
los residuos se enjuagan con un total de 50 ml de cloroformo. El producto se mezcla con el filtrado
original antes de la eliminación de la capa alcohólica.

Reactivo Liebermann Burchard:

Colocar el anhídrido acético y el ácido sulfúrico en baño frio. En el frasco ámbar adicionar 220mL de
anhídrido acético frio y 200mL de ácido acético (a temperatura ambiente). Mezclar por inversión y
adicionar 30mL ácido sulfúrico frio. Puede ser almacenado hasta por 6 meses a 4ºC en oscuridad o
a temperatura ambiente almacenar no más de 2 semanas.

Curva de calibración:

Pesar 100mg de colesterol (Anotar el valor exacto dado por la balanza) en 50mL de ácido acético
glacial. Almacenar en frasco ámbar

Luego de preparar la curva de calibración y la muestra poner a encubar a 37ºC por 18min. Y leer a
625nm en el espectrofotómetro. Al final de la práctica cada grupo compartirá sus datos con los
demás para su respectivo análisis y discusión.