UNIVERSIDAD NACIONAL “HERMILIO VALDIZÁN”

CARRERA PROFESIONAL INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

CURSO: ANÁLISIS POR INSTRUMENTACIÓN

DOCENTE: RUTH ESTHER CHAMORRO GOMEZ

PRÁCTICA N° 3: ESPECTRO DE ABSORCIÓN Y DETERMINACIÓN DE COEFICIENTE DE

ABSORTIVIDAD DEL 2,6 - DICLOROFENOLINDOFENOL

Fabian Diaz, Jhordan Jhampierd; Rafael Orihuela, Angelina Thais

I. INTRODUCCIÓN

La interacción entre las ondas electromagnéticas y la materia de la región UV-visible es el

campo de estudio de la espectroscopia UV-visibles o espectrofotometría. Está basada en la
relación que presenta un haz de luz incidente en la muestra y el haz de luz que pasa por la
solución. Su estudio se basa en que la cantidad de luz absorbida por la materia presente en la
solución es característica del compuesto. La respuesta de dicho componente es función de las
características del haz de luz incidente en la muestra, lo que permite determinar la respuesta en
función de la calidad del haz proporcionado. Dicho conjunto de respuesta en el rango de
longitud de onda de la gama UV-visible se denomina espectro de absorción; dicha respuesta es
característica de cada compuesto, la cual estudiaremos y nos iremos familiarizando con la
utilización y manejo de un espectrofotómetro 20 Génesis. (Fecuchi y Romero, 2010).
El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para absorber
radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UVvisible. Las longitudes de onda de
las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben
dependen de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza
iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la
determinación y caracterización de biomoléculas. (Ríos C., Angel; et.al. 2012)

II. OBJETIVOS  Agua destilada

 Observar y determinar el coeficiente de
absorvidad del 2,6- 3.5 Métodos
diclorofenolindofenol. 3.5.1 Espectro de absorción de
solución de 2,6
Diclorofenolindofenol.
 Se preparó solución 0,368 x 10−3
M 2,6 Diclorofenolindofenol (diluir
III. MATERIALES Y METODOS 1:10 con agua)
3.2 Equipos  Blanco agua bi-destilada.
 Se midió la absorbancia en el
 Espectrofotómetro UV-Vis Genesys 10 intervalo de longitudes, desde 400
s nm hasta 800 nm con intervalos de
1 nm.
3.3 Materiales  Se graficó la curva de absorción
 Micropipetas versus longitud de onda. Para
 Tips de micropipetas determinar la longitud de honda a la
 Celdas para espectrofotómetro cual presenta su máximo absorción
que se utilizará para determinar el
 Tubos de ensayo
coeficiente de absorvidad.
3.4 Reactivos 3.5.2 Determinación del
coeficiente de absorvidad.
 2,6-Diclorofenolindofenol (326.11 A partir de la solución patrón
g/mol) (0.368 M) SE REALIZO 5
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DILUCIONES: 1/10; 1/14; 1/18; Fig.4 Curva de absorvidad de 2,6-

1/22; 1/24 (Se calculó la molaridad diclorofenolinfenol
de todas las diluciones).

 Medir sus absorbancias a la CURVA DE ABSORVIDAD

longitud de onda determinar 0.000
100% 0 0 0
anteriormente y graficar
absorbancia versus concentración. 80%
 Ajustar los puntos a una recta por el 60%
método de mínimos cuadrados. A 0.368 0.262 0.204 0.167
40%
partir de la regresión lineal
obtenida, se determinara la 20%
pendiente de la línea, la cual se 0% 0 0 0 0
divide entre la longitud de la 800 857 889 909 917
trayectoria (cm) para obtener el
coeficiente de extensión. 200 143 111 91 83

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES La grafica es referencial se multiplico a los

Fig. 1 Obtención de las bases a trabajar. resultados por 10000 para poder observar la
diferencia de la curva
0.368𝑥10−3
 = 0.368𝑥 10−4
10 4.1. discusiones
0.368𝑥10−3
 = 0.262𝑥 10−4
14
0.368𝑥10−3 ● El espectro de absorción del naranja de
 = 0.204𝑥 10−3
18 metilo muestra una creciente al
0.368𝑥10−3
 = 0.167𝑥 10−3 comenzar porque la concentración es
22
0.368𝑥10−3 muy parecida a la del blanco, entonces
 = 0.153𝑥 10−3 comienza a separarse poco a poco del
24
rango inicial y alcanza su punto máximo
Fig. 2. Cantidades de agua destilada que se
de absorbancia, para así, permitir
utilizó.
asegurar que la concentración es la
pieza clave dentro de la solución, puesto
que si tiene muy poca, va a ser una
L Resultado absorbancia baja, porque “se absorben
L
aquellas frecuencias que son capaces de
producir excitación electrónica”, pero
1 200 800 luego desciende debido a que ya no
2 143 857 existe un equilibrio en la solución que le
permita al colorante absorber la
3 111 889
intensidad incidente optimizando la
4 91 909 transmitancia mucho más que la
absorbancia.( Ríos C., Angel; et.al.
2012)
Fig. 3. Obtención de los datos de la absorvidad

917 ● El azul de bromofenol tiene la

800 857 889 909
propiedad de que la longitud de onda a
200 0.368 las formas ácida y básica, en
143 0.262 concentraciones equivalentes, tienen
igual absorbancia.
111 0.204
91 0.167 0.153
● La absorbancia es directamente
83 proporcional a la concentración, por
tanto, siempre que la concentración de
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colorante se aumente, la absorbancia

aumenta también. De la misma forma
cuando la concentración del colorante
disminuye, la absorbancia disminuye.
● La absorcion de radiacion
electromagnetica a determinada
longitud de onda puede alterar el
estado energético de una molécula,
esto se puede medir para realizar un
estudio cuanti o cualitativo, este
fenómeno es el fundamento de la
espectrofotometría. Cuando un haz
de luz incide sobre un medio
homogéneo parte de la radiación es
absorbida y parte de la radiación es
transmitida, la fracción de luz que se
absorbe y se transmite depende de la
cantidad de moleculas presentes en
el medio (de la concentración) lo
que nos permite cuantificar una
sustancia (Fecuchi y Romero,
2010).
5 CONCLUSIONES: con el emergente (absorbancia) es
- Aprendimos el manejo del proporcional a la longitud de trayectoria y a
espectrofotómetro y su utilidad para medir la la concentración de la solución.
absorbancia de una solución. - Evidenciamos la relación lineal
- Se determino experimentalmente el entre la absorbancia y la concentración
lambda óptima de absorción (λ) del azul de propuesta por la ley de Beer al preparar la
bromofenol y el naranja de metilo mediante curva de calibración cuyo eje de ordenadas
la medición de estas a diferentes longitudes es la absorbancia y el eje de abscisas
de onda (λ) dentro del rango de luz visible contiene la cantidad de concentración de
hasta encontrar la absorbancia máxima, forma ascendente, para hallar la pendiente
obteniendo para el azul de bromofenol un “a” que seria el coeficiente de la
landa de 580 nm. absorbancia.
- Aplicamos la ley de Lambert y Beer - Aprendimos a hallar la
concluyendo que la diferencia entre concentración en mg/ml de una solución y
intensidades del rayo incidente expresarlo en otras unidades.
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BIBLIOGRAFÍA
● Feduchi y Romero, 2010. Bioquimica. Segunda edición. Editorial Panamericana.

● Rubinson, J. y Rubinson, K. 2000. Química Analítica Contemporánea .Primera

Edición. Editorial Prentice Hall. México.
● Ríos C., Angel; et.al. 2012. Técnicas espectroscópicas en química analítica.
Volumen I y II. Editorial Síntesis. Madrid.
● J. M. Fernández Alvarado(2009), Química anlitica,editados por Ldo Salinas Úriz
● Christian, Gary D. 2009. Química Analítica. Sexta Edición. Editorial Mc Graw Hill.