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Fundamento
Entre las reacciones coloreadas específicas para la determinación de proteínas en solución, destaca la
reacción de biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas pero no los aminoácidos
libres ya que es debida a la presencia de dos o más enlaces peptídicos CO-NH.
Para la reacción de biuret usaremos el reactivo de Benedict (sulfato de cobre, citrato de sodio y
carbonato de sodio) e hidróxido de sodio. El Cu 2+ en un medio fuertemente alcalino se coordina con
los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta cuya intensidad depende de la
concentración de proteínas.
Instrumento.
Los componentes básicos de los espect rofotómetros son: una fuente de radiación (lámpara), un
sistema para seleccionar la longitud de onda deseada (filtro o monocromador) , una cubeta destinada a
contener la muestra (solución absorbente) y un sistema para medir la intensidad de luz emergente y
traducirla en datos legibles.
Rayo Rayo
incidente emergent e
Té cnica
1) Colocar en un tubo de ensayo 3ml NaOH al 3%
2) Añadir 1ml de solución proteica
3) Añadir 0.5ml de solución de Benedict
4) Agitar para que se mezcle bien.
5) Observar los resultados
La intensidad del color obtenido será proporcional a la concentración proteica ( Ley de Lambert-
Beer: A = .l. C donde A : absorbancia;coficiente de extinción molar; l : trayecto recorrido
por haz de luz en cm.; C : concentración de sustancia absorbente) y se puede medir por
espectrofotometría.
CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA Y BIOFISICA
1)- ¿Que color se observa en cada uno de los 5 tubos al finalizar el ensayo?
2)- Si no obtuvieron igual coloración en todos expliquen a que puede deberse.
3) – Usando la curva de calibración determinen la concentración proteica en cada uno de ellos.
Considerando el pretratamiento de las soluciones de BSA realizado previamente por los docentes:
4) ¿Cual es la concentración de HCl antes del agregado de soda.?
5) ¿Cuál es el pH de la solución proteica antes y después del agregado de ácido?
6) ¿Por qué se corrige el pH?
7) Si comparan dicho pretratamiento con el agregado de ácido que realizaron a uno de los tubos
durante el práctico: ¿Qué procesos tienen lugar en cada uno de los dos casos?