LAURA CAMILA PARRA PÉREZ COD.

1098766810

ASEGURAMIENTO

INTRODUCCION

La determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) es la medida de la sensibilidad

de una bacteria a un antibiótico. Es la mínima cantidad de antimicrobiano que es capaz de
impedir el crecimiento de un microorganismo en unas condiciones normalizadas. Es el método
habitual utilizado en los laboratorios de Microbiología Clínica. Para llevarlo a cabo es necesario
utilizar cepas control (de referencia) con el fin de que los resultados sean reproducibles y
comparables. Este método nos ofrece información sobre la sensibilidad de las bacterias S
(sensible), I (intermedia) y R (resistente).

Existen diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de forma rutinaria, y
de manera semicuantitativa, las CIM (métodos manuales y métodos automatizados o
semiautomatizados). Se puede realizar mediante:

1.- Difusión en agar: Disco placa y E test.

2.- Dilución: Medio sólido y Medio líquido (micro/macrodilución).

3.- Mecanizados y Automatizados. 1

La Concentración Mínima Bactericida (CMB) es la mínima cantidad de antibiótico capaz de

destruir el 99,9% de una muestra inoculada en condiciones estandarizadas.

Para el presente informe se llevó acabo un método manual que realizo mediante una dilución
primero en caldo y luego se inocularon en medio sólido.

La bacteria puesta a prueba en esta práctica fue Staphylococcus aureus cuyas características
morfológicas tanto microscópicas como macroscópica. Como el nombre con deja ver se trata de
cocos Gram positivos que poseen tendencia a agruparse en racimos. Tienen una forma esférica
y un diámetro de alrededor de una micra. En medios no selectivos, S. aureus presenta colonias
de 1 a 3 mm de diámetro, lisas, levemente elevadas, de bordes enteros, levemente convexas y
generalmente pigmentadas con un color que puede ir desde el crema hasta el amarillo.

En cuanto a su forma de obtener energía es tanto a través de la fermentación como de la

respiración. En cuanto a los requerimientos de cultivo, son no exigentes desde el punto de vista
nutricional, creciendo en medios pobres y simples. En su relación con el oxígeno son aerobios-
anaerobios facultativos. Es muy resistente a las condiciones ambientales normales. En cuanto a
los agentes químicos, es sensible a la mayoría de los desinfectantes y antisépticos, que lo matan
en pocos minutos. 2

El alcohol es un producto bactericida de potencia intermedia, el alcohol etílico y el alcohol

isopropílico. No son activos frente a esporas (no deben utilizarse en desinfección de material
quirúrgico o dental), y en lo que respecta a hongos y virus su actividad es variable, aunque son
eficaces sobre la mayoría de microorganismos presentes en la piel. El mecanismo de acción es
por desnaturalización de las proteínas plasmáticas. Usualmente el alcohol más comercializado
es el alcohol etílico al 70%. 3

ANALISIS DE RESULTADOS
Para esta práctica se realizaron diluciones hasta 10-7 de un cultivo de S. aureus que podríamos
suponer que estuvo en su fase logarítmica preparando un patrón de mcfarlanol en agua
destilada estéril. ya preparadas estas; se tomó de las diluciones 10-5, 10-6 y 10-7 inóculos para
sembrar de cada una de estas por duplicado, para incubar por 24 horas a 37ºC, de las cuales se
obtuvieron los siguientes resultados de su recuento:

Tabla 1. Recuento de colonias de macfarlanol

10-5 125 UFC/mL

10-6 0 UFC/mL

10-7 0 UFC/mL

Que ajustando el numero de colonias presentes en la solución madre no aproximaría a una

conetracion de UFC en 1’250.000 UFC/m:
1′ 250.000 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝐿
𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 = = 250.000 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝐿
10
5
Siendo el 250.000 UFC/mL la concentración de la solución patrón es decir el 100% para realizar
una dilución al 0.1% arrojándonos como calor de control para desarrollar el resto de este
informe una cantidad de 250 UFC/mL.

Para comprobar tanto la capacidad inhibitoria y bactericida del desinfectante puesto a prueba
que en este caso fue el alcohol al 70% de la marca ALCOPY se realizaron 10 diluciones
consecutivas siendo 9 las inoculadas con S. aureus y la dilución 10 es la muestra CONTOL, para
así disminuir la concentración del alcohol hasta obtener una concentración del 0,13671875%,
en la tabla que se presenta a continuación podemos ver cada tubo con su respectiva
concentración:

Tabla 2. Concentraciones de las diluciones del alcohol al 70%

Nº DE CONCENTRACIÓN
TUBOS %
1 35%
2 17,5%
3 8,75%
4 4,375%
5 2,1875%
6 1,09375%
7 0,546875%
8 0,2734375%
9 0,13671875%

Los 10 tubos anteriormente descritos cono diluciones se colocaron en un periodo de incubación

por 24 horas a 37ºC; ya pasado el día de incubación se realizó un recuento para comprobar de
manera visual y cualitativamente el crecimiento del microorganismo expresado en la turbidez
de los tubos, los resultados se ven en la imagen 1. A partir de esta se escogen los tubos en los
cuales se encuentra el Concentración Mínima inhibitoria (CMI), cuya elección también se escogió
de manera cualitativa, es decir, que donde el caldo BHI no presenta turbidez o crecimiento del
inoculo, y estableció que el CMI para el alcohol al 70% es en el tubo 4

Imagen 1. Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) tubo 4.

Para concluir la estimación del alcohol al 70% como desinfectante a partir de CMI se
seleccionaron 3 tubos antes y se realiza la siembra de 1ml de estos tubos (1, 2,3 y 4) por
profundidad en agar nutritivo por 24 horas a 37ºC, pasado el tiempo de incubación se sacaron
las cajas para realizar el recuento final, de la cual, se observaron que cada una de las cajas
presento crecimiento bacteriano ya que habían colonias no aisladas el cual dificulto el conteo
de ellas y se estableció que para estos casos eran colonias incontables, por lo tanto, no se puede
establecer la Concentración Mínima Bactericida (CMB), esta es una cualidad de este método de
validación cuantitativa, y al ser las colonia incontables no se puede realizar el resto del análisis
cuantificable. A continuación en la imagen 2 se ve el crecimiento de S. aureus en las cajas

Imagen 2. Crecimiento de S. aureus de los tubos 1, 2, 3 y 4

DIANA EN LAS CONCLUSIONES ESCRIBA POR FIS PORQUE HAY CRECIMIENTO DE S. AUREUS
QUE ES PORQIE SON REDUCTORTES DE LACTOSA Y LAS CARACTERISITICA NUTRICIONALES DE
S. AUREUS PORQIE EL PROFESOR NOS DIJO QUE EL CRECIMIENTO ERA CARACTERISITICO POR
ESO POR QUE SON DECOMPONEDORES DE LA LACTOSA, Y DIGA QUE LA CMB FUE
INCALCULABLE PORQUE EL ALCOHOL NO ES UN BUEN DESINFECTANTE QUE POR LO TANTO ES
INHIBITORIO HASTA LA CONCETRACION DE 4,375% PERO NO ES BACTERICIDA, EXPLICA ESO!!!!