FACULTAD DE Informe de Práctica de Laboratorio

LABORATORIO DE FISIOLOGIA
CIENCIAS EXACTAS Y VEGETAL
NATURALES

Viabilidad en semillas de Phaseolus vulgaris y Lens culinaris: Test de Tetrazolium

Lida A Bueno Cano, Paola A. Patiño Mejía

Fecha de presentación 14/08/2019

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Resumen
Las semillas son estructuras sexuales características de las plantas vasculares superiores que contienen reservas energéticas
necesarias para el desarrollo del embrión, hasta su germinación, influenciada por las condiciones del ambiente o la viabilidad que
posee la semilla, esta última se evalúa mediante métodos bioquímicos como el Tetrazolium. Se utilizan 30 semillas de Phaseolus
vulgaris y en 20 semillas de Lens culinaris, que se colocan en inhibición 24 horas antes de la práctica, hirviendo la mitad de estas y
realizando cortes longitudinales, que se pondrán a reaccionar con Tetrazolium, coloreando el embrión de las semillas no hervidas,
variando por especie, debido a las condiciones intrínsecas y extrínsecas de estas, que favorecen o no la capacidad germinativa de la
semilla.
Palabras Clave: Viabilidad, Semillas, Tetrazolium, Germinación, Condiciones
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1. Introducción
La semilla es una estructura de reproducción sexual
característica de las plantas vasculares superiores
(Angiospermas y Gimnospermas) formada a partir de
la maduración del óvulo vegetal [3], contiene reservas
energéticas como carbohidratos, grasas y proteínas que
sirven al embrión desde sus primeras etapas de vida
[1] hasta que se pueda desarrollar en una nueva
plántula bajo condiciones apropiadas, y así
desempeñar un papel fundamental en la renovación,
persistencia y dispersión en la ecología de las
poblaciones de plantas [1]. Las semillas cumplen un
papel importante como materia prima para muchos
animales, incluyendo los humanos; sin embargo, no
todas germinan tras pasar la fase de maduración, esto
se debe a la influencia de las condiciones del ambiente
o la viabilidad de éstas, ya que varía dependiendo de la
especie y factores externos [2] que incurren en la
fisiología del embrión; la viabilidad de las semillas
está directamente relacionada con la tolerancia a la
deshidratación y a la temperatura, siendo
características intrínsecas de las plantas; para
sobrevivir a dichas variaciones desarrollan de ciertos
mecanismos adaptativos que previenen el deterioro
celular en caso de una pérdida de agua [5].
Es de vital importancia conocer los factores que
afectan la viabilidad y germinación de las semillas,
tanto en especies amenazadas como en especies
destinadas a la producción agrícola [6] para generar
mecanismos que optimicen o aumenten la viabilidad
y, por lo tanto, el potencial germinativo [7].
Para conocer si las semillas de alguna especie son
viables existen múltiples métodos bioquímicos
colorimétricos como el índigo carmín y el de
Tetrazolium[8], este último fue el utilizado durante la
práctica; se utiliza desde 1950 y evalúa
principalmente el vigor de las semillas en función de
la coloración del embrión [2][8][9]; dicho test evalúa
la viabilidad empleando la sal de tetrazolio (cloruro
de 2, 3, 5- trifeniltetrazolio) que reacciona a los
procesos de reducción de las células vivas tomando el
hidrógeno liberado por las enzimas deshidrogenasas
y forma una sustancia roja o rosácea, estable y no
difusible, el trifenil-formazan que colorea las semillas
viables en diferentes regiones tales como radícula,
plúmula, eje embrional y cotiledones entre
otros[4][7][8].
2. Procedimiento Experimental
Materiales: 30 semillas de Phaseolus vulgaris, 20
semillas de Lens culinaris, Tetrazolio al 3%, cuchilla,
dos cajas de petri, estufa y beaker 200ml.
Procedimiento: Se colocaron las semillas en
imbibición 24 horas antes de la práctica; posterior a
esto, se hierven 15 semillas de Phaseolus vulgaris y
10 de Lens culinaris durante 10 minutos, mientras
esto ocurre, a las semillas restantes se les realiza un
corte longitudinal permitiendo al embrión quedar

1
expuesto, y así colocar esta fracción de la semilla en
una caja de Petri, a la que se le agrega unas gotas de
Trifeniltetrazolio al 3% cuidando que la superficie del
corte y el embrión quede en contacto con esta solución.
Se deja actuar la solución alrededor de 30 minutos,
hasta que el embrión presente una tonalidad rosada.
Además, este procedimiento se realiza también con las
semillas hervidas [4]
3. Resultados y Discusión
En los resultados obtenidos, para ambas semillas se
puede observar que, al ser hervidas ninguna reacciona
a la tinción de Tetrazolium, debido a que la
germinación depende en parte al porcentaje de
humedad del ambiente y a la temperatura adecuada,
ocasionando una deshidratación en el embrión, ya que
condiciones extremas de temperatura desfavorecen la
capacidad germinativa. [12]
Las semillas de Phaseolus vulgaris, tuvo un porcentaje
de viabilidad menor al 50%, tal vez por la temperatura
y humedad relativamente alta, en la cual estuvo
almacenada, ocasionando el fenómeno de dureza para
la cocción del frijol, provocando una menor absorción
del agua [10][11], necesaria en el desarrollo y
germinación de ésta, por otro lado las semillas tienen
caducidad, dependiendo de la especie y las
condiciones de conservación de la semilla, que
mantienen su viabilidad durante un tiempo
determinado [11].
Las semillas de Lens culinaris tuvieron una tinción
rojiza del 100%, ya que son muy tolerantes a la
desecación y tienen un porcentaje de humedad entre 15
al 21% necesaria para conservar su capacidad
germinativa, además de poseer una cantidad
importante de reservas alimenticias, en cuerpos
intracelulares que contienen 60% de Carbohidratos,
23% de proteínas y un 2% de lípidos. [12]
4. Conclusiones
Para evaluar la viabilidad de las semillas, mediante la
técnica del Tetrazolium, hay que tener en cuenta las
condiciones en que se estaba almacenada la semilla,
además de los factores intrínsecos y extrínsecos que
afectan su capacidad de germinación, como se pudo
observar con Phaseolus vulgaris.
5. Bibliografía
[1] Doria, J. Generalidades sobre las semillas: Su
producción, conservación y almacenamiento. La Habana,
Cuba: Scielo, 2010. V.31 N.1.
[2] Pérez F.G., Pita J. V. Viabilidad, vigor, longevidad y
conservación de semillas. Madrid, España: Paseo de la
Infanda 2016 Isabel. N. 2112.
[3] Camacho, F. Dormición de semillas: Causas y
tratamientos. México, DF: Editorial Trillas, 1994. 128p.
[4] Duque C.A. Práctica de Laboratorio No.4: Evaluación
de la viabilidad de Semilla-Prueba de Tetrazolium,
Universidad de Caldas.
[5] Mgnitskyi, S., Guido, P. Fisiología de semillas
recalcitrantes de árboles. Agronomía Colombiana, Bogotá,
2007. Vol. 25(1), Pág. 96-103
[6] Vanadillo, G., Suni, M., Cano, A. Viabilidad y
germinación de semillas de Puya raimondii Harms
(Bromeliaceae). Revista Peruana de Biología. Lima, 2004.
Vol. 11(1), Pág. 71-78
[7] Victoria, J., Bonilla, C., Sánchez, M. Viabilidad en
tetrazolio de semillas de caléndula y eneldo. Acta
Agronómica. Bogotá, 2006. Vol. 55(1), Pág. 31-41
[8] Benito, L. F., Herrero, N., Jiménez, I., Peñuelas, J. M.
Aplicación de métodos colorimétricos para la
determinación de la viabilidad en semillas de "Pinus
Pinae": test de tetrazolio e índigo carmín. Cuadernos de la
Sociedad Española de Ciencias Forestales. Madrid, 2004.
Vol. 17, Pág. 23-28
[9]Lallana, V. H., & García, L. F. Efecto de pretratamientos
en la prueba de viabilidad de semillas de Trichocentrum
jonesianum (Orchidaceae). Investigación Agraria. San
Lorenzo, 2013. Vol. 15(2), Pág. 129-132
[10]Peña-Valdivia, C. B. et al. Componentes del
rendimiento de semilla de una población silvestre y un
cultivar de frijol (Phaseolus vulgaris L.). Quad. Bot. Amb.
1998 Vol. 6, Pág. 181-187.
[11] Morales M.E et al. Características físicas y de
germinación en semillas y plántulas de frijol (Phaseolus
vulgaris) silvestre, domesticado y su progenie. Agro
ciencia, México 2017. Vol. 5(1)
[12] Universidad politécnica de Valencia. 2003. Tema 16:
Germinación de semillas
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/temas/tema_17.ht
m#Viabilidad%20de%20las%20semillas
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