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Efecto de una ingestión experimental fl aflatoxina y Eimeira retos de la vacuna sobre la histopatología

intestinal y dinámica celular inmune de los pollos de engorde:


la aplicación de un índice de salud intestinal

AL Kraieski, RM Hayashi, A. Sánchez, GC Almeida, y E. Santin 1

Laboratorio de Microbiología y Patología Aviar, Departamento de Medicina Veterinaria de la Universidad Federal de Paraná,
Curitiba, Brasil, 80035-050

RESUMEN El presente estudio evaluó el efecto de aflatoxina B1 y Eimeria ISI de alteraciones macroscópicas asociado a Eimeria Sion le- en el intestino

Descargado de https://academic.oup.com/ps/article-abstract/96/5/1078/2416078 por invitado el 09 julio 2019


retos de la vacuna y su interacción en la morfología intestinal, delgado medio, menor ganancia de peso corporal (BWG) y el consumo de alimento
aplicando el índice morfométrico “Veo el interior” (ISI). También se (FI), y la relación de conver- sión peor de alimentación en comparación con las aves
estudiaron la respuesta inmune lular CEL y el rendimiento de pollos de no desafiado. Ambos
engorde. Un total de 240 pollos de engorde fueron RESPETA en una Eimeria y desafíos de aflatoxinas modulan las células MUNE im- en el
di- 2 × disposición 2 factorial con 4 los tratamientos, T1: dieta de control yeyuno y el hígado, generalmente incrementando de forma que el
y ningún desafío (CON), T2: Aflatoxina B1 (AFLA), T3: dieta de control número de macrófagos, CD4 +, y CD8 + en relación con el grupo de
y Eimeria control. Las aves de COC y COC + grupos Afla presentan puntuación
ical superior ISI histolog- en el yeyuno a las 7 y 14 d de com- edad
desafío (COC), y T4: La aflatoxina B1 y Eimeria recortaron a la CON y grupos Afla. La reducción de FI y BWG fue
desafío (AFLA + COC). Se aplicó el índice de métrica correlacionada con alta ISI histológico y resultó en una alta presencia
morfo-matemática ISI para evaluar las alteraciones macro y de células inmunes en los tejidos, lo que sugiere la demanda
microscópicas. Las muestras de hígado y el yeyuno se analizaron para respuesta inmune. El ISI histológico tenía correlación estadística con el
los macrófagos, CD4 +, y CD8 + contando por inmunohistoquímica a rendimiento del pollo.
los 7, 14, y 21 días de edad. Pollos desafiado con Eimeria presentaron
mayor

palabras clave: costo inmune, respuesta pro-inflamatoria, la salud intestinal, inmunidad intestinal, índice de salud

2017 Poultry Science 96: 1078-1087


http://dx.doi.org/10.3382/ps/pew397

INTRODUCCIÓN relacionados con cambios sistémicos y metabólicos (Klasing,


2004 ; Kogut y Klasing, 2009 ). rendimiento de los animales podría verse
En cuanto a la producción de pollos de engorde, gastrointestinal afectada por la asociación entre el proceso inflamatoria y el daño
el desarrollo del tracto está altamente correlacionado con el intestinal.
rendimiento del animal (Maiorka et al., 2000 ; Santin et al., 2001 ). Con el fin de evaluar la alteración promovida por tritional Nu,
Epitelio de la mucosa intestinal tiene la función de la digestión y la infecciosa, y los agentes ambientales sobre la salud an- imal, métodos
absorción, y también representa una importante barrera entre el lumen de calificación han sido objeto de diversos estudios. Se aplicaron para
del intestino y el animal contra un amplio espectro de sustancias evaluar iosis coccid- (Johnson y Reid, 1970 ), Macro (Keirs et al.,
nocivas e inmunogénicas (Gottardo et al., 2016 ). Daños y perjuicios de
la barrera epitelio resultan en la inflamación, las respuestas inmunes 1991 ; Teirlynck et al., 2011 ) y microscópicas alteraciones
no controlados, y la homeostasis orgánica desequilibrada (Kitessa et (Gholamiandehkordi et al., 2007 ), Tibial dyscondropla- sia (Im et al., 2012
al., 2014 ). salud intestinal podría ser afectada por agentes infecciosas ), Y el bienestar (Blatchford et al.,
nutricionales y en especie tales como micotoxinas (Santin et al., 2002 , 2015 ). Hay muchos investigadores y productores Buscar el nombre de algún índice de la
salud del intestino para su aplicación en la industria de carne de aves de intentarlo y se
correlaciona con el rendimiento del animal.
2003 ) y Eimeria ( Lillehoj y la trucha, 1996 ; Jang et al., 2011 ), Muchos estudios (Huff y Ruff, mil novecientos ochenta y dos ; Stoev et al., 2002
Respectivamente, aumentando el proceso inflamatorio cosa mu-
; Girgis et al., 2010 ; Ellakany et al., 2011 ) Mostraron que la combinación de
intestinal. La fase aguda de la respuesta inmune es el primer
micotoxinas y Eimeria genera una mayor disminución en el peso corporal, el
mecanismo de defensa y que es
aumento en la alimentación de conver- sión, y la disminución de los niveles
de carotenoides en plasma de la coccidiosis por sí mismo. El objetivo de este
©do2016 Poultry Science Association Inc. Recibido el 26 de estudio fue evaluar el efecto de la aflatoxina B1 y Eimeria retos cine VCA y
julio de 2016. aceptado el 10 de de octubre de 2016.
sus interacciones sobre la respuesta mune im- intestinal y, además, aplicar y
1 Autor correspondiente: besantin@hotmail.com evaluar 1078
Aflatoxinas y COCCIDIOSIS SOBRE salud intestinal 1079

un índice matemático morfométricos - “I See Inside” ( ISI) en pollos de la capacidad funcional de las células afectadas se pierde totalmente. En
engorde el uso de estos modelos nutricionales e infecciosas. DICIÓN ad-, la extensión de cada lesión (intensidad) o frecuencia observada
en comparación con órganos no afectados se evalúa en cada órgano / tejido
por animal y la puntuación va de 0 a 3: puntuación de 0 (ausencia de lesión o
de la frecuencia), puntuación 1 (alteración hasta un 25% de la superficie o la
MATERIALES Y MÉTODOS frecuencia observada), la puntuación de 2 (alteración varía de 25 a 50% de la
superficie o la frecuencia observada), y la puntuación de 3 (alteración medida
Este experimento fue aprobado por el Comité Institucional de Uso
más de 50% de la superficie o frecuencia observada). Para llegar al valor final
de Animales de Ética cias SCI Agrícola de la Universidad Federal de
del índice ISI, el FI de cada alteración se multiplica por el número de
Paraná (Protocolo 028/2015).
puntuación respectivos, y los resultados de todas las alteraciones se suman.

Animales, diseño experimental, la dieta, y Vivienda

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Para el análisis macroscópico, los pollos de engorde se sacrificaron por
dislocación cervical y los canales se System- ticamente evaluaron después
Un total de 240 pollos de engorde machos, Cobb 500, se utilizó de de una división en 5 grupos de sistemas: locomotor, órganos
uno a 21 días de edad. El experimento fue completamente al azar gastrointestinales asociados ( GIT), intestino, la coccidiosis lesión típica, y el
utilizando un 2 × 2 ción Organizar- factorial con 4 tratamientos y 4 sistema de ratorio respi-, según la tabla 1 . La suma de todos los terations al-
repeticiones cada uno, con 15 aves en cada repetición. dieta de control podría llegar a 174, lo que representa el peor estado de salud. La
(sin concentración detectable de aflatoxina) y ningún desafío (: T1 ESTAFA), metodología descrita anteriormente se basa en las diferentes relaciones
entre los otros órganos y la salud in- testinal. Por ejemplo, la mala salud
T2: Aflatoxina B1 400 ppb ( AFLA), T3: La dieta de control y Eimeria desafío intestinal AF efec- la calidad de la basura, lo que afectará el sistema Tor
( COC), y T4: Aflatoxina B1 400 ppb y Eimeria desafío ( AFLA + COC). Pu locomoción y el tegumento (Montagne et al., 2003 ; Wideman y Prisby, 2013 ),
aflatoxina B1 rified se mezcló en la alimentación y dada a la T2 y T4 Que afecta indirectamente ing Feed- y beber el acceso, el empeoramiento de
pollos durante todos los períodos experimentales. muestras de la dieta la situación intestino. La presencia de saco vitelino en aves mayores de 7
se analizaron para la aflatoxina por LC-MS / MS (cromatografía líquida días de edad podría estar asociado con un retraso en el acceso a alimentar
acoplada a espectrometría de masas / espectrometría de masas) durante el primer d de la vida. Se evalúa el tracto respiratorio, ya que puede
metodología y los resultados fueron de 468 y 393 ppb de aflatoxina ser utilizado como un tejido “centinela” para la calidad del medio ambiente,
para los tratamientos T2 y T4, respectivamente. Eimeria desafío de la tales como los niveles de amoníaco, que también verse afectado por la salud
vacuna se realizó por vía oral en el tercer día de edad US- ing una intestinal (Feng-Xian et al., 2012 ), Y es importante tener en cuenta que las
vacuna comercial en vivo, 10 veces mayor que la dosis recomendada bolsas de aires son anatómicamente relacionadas con el intestino.
por el fabricante ( ± 3.3 × 10 5 ooquistes por ave). La vacuna incluye 7
especies de Eimeria

( E. acervulina, E.brunetti, E. maxima, E. necatrix, E. praecox, E. Para alteraciones histológicas, se aplicó el mismo cálculo. Mesa 2 describe
tenella, y E. mitis). las alteraciones histológicas evaluadas en el intestino y el hígado. Las
El experimento se llevó a cabo en habitaciones aisladas previamente escalas van de 0 a 54 para el intestino, y de 0 a 39 para el hígado.
desinfectados, con presión negativa, TaiNing jaulas apiladas verticalmente
CON- (repeticiones) con camada ster- ilized virutas de madera (para evitar la
nación contami- externo), bebederos de tetina, y la temperatura y el control
automático de la iluminación. Los animales se mantuvieron en la temperatura
cómodos com- acuerdo con su edad, con alimentación y agua ad libitum. La
La necropsia, Histología e
dieta se basa en el maíz y harina de soja, siguiendo las recomendaciones
inmunohistoquímica
nutricionales de Brasil para las aves de corral (Rostagno, 2011 ).
A los 7, 14, y 21 días de edad, 5 aves por tratamiento fueron sacrificados
por dislocación cervical. Estos pollos se practicó la necropsia para un análisis
macroscópico ISI, y muestras de yeyuno (2 cm proximal a divertículo de
Meckel) y el hígado (lóbulo central) se fijaron en solución de formalina
Método de calificación del sistema - ISI
tamponada al 10% para el análisis histológico ISI. Las mismas muestras se
La metodología ISI en proceso de patente (INPI BR 1020150036019) recogieron y se conservan en gel Tissue-Tek PTU, congelados
fue desarrollado sobre la base de una puntuación numérica de alteración. inmediatamente en hielo seco, y luego almacenados en una
En esta metodología, un impacto fac- tor ( SI) se define para cada
alteración en el análisis macro y microscópica de acuerdo con la - 20 ◦ C congelador para análisis de inmunohistoquímica.
reducción de la capacidad funcional gan o-, basado en el conocimiento Para el análisis histológico ISI, las muestras se incluyeron en parafina
anterior de la literatura y la investigación de fondo. La gama IF de 1 a 3, y 5 μ m secciones fueron cortadas y teñidas con hematoxilina y eosina,
donde 3 es la más impactante para la función del órgano, por ejemplo, más azul Alcian. Para la morfología intestinal, se evaluó una diapositiva
necrosis, tiene la más alta IF porque el por ave y vellosidades se dividieron en fusionado y normal. diez
intestinal
1080 KRAIESKI ET AL.

Tabla 1. ISI alteraciones macroscópicas de los diferentes sistemas y órganos evaluados en la necropsia.

Puntuación máxima para


Sistema Organo alteración observada Factor de impacto sistema 1

Piel y adnexas lesión de la almohadilla del pie / pododermatitis 1 21


Pigmentación 1

sistema lesión mucosa oral 1


locomotor Sistema locomotor presencia de hemorragia 1
(motriz) necrosis de la cabeza femoral 1
dyscondroplasia tibial 1
La resistencia ósea 1

Páncreas hipertrófica 2 33
hipotróficos 2

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Riñón hipertrófica 1

Otros órganos proventrículo Inflamación 1


gastrointestinales Molleja Erosión 1
(GIT) Yema de huevo Persistencia 1
Hígado el rojo (congestión) 2
Amarillo y hipertrófica 2
Amarillo y hipotrófica 3

Duodeno Necrosis 3 72
proceso inflamatorio en la serosa o 1
capa mucosa
Los residuos celulares y moco grueso en mucosa 2
Yeyuno Necrosis 3
Proceso inflamatorio en serosa o capa 1
mucosa. Peyer parches patrón
Intestino
Los residuos celulares y moco espeso rojo 2
(delgado)
Grosor de la pared del intestino 2
Íleon Necrosis 3
Proceso inflamatorio en serosa o capa 1
mucosa. Peyer parches visibles
Los residuos celulares y moco espeso rojo 2
Ceca proceso inflamatorio en la mucosa 2
Presencia de gas 1

Duodeno Eimeria Lesión 2 30


lesiones
Yeyuno Eimeria Lesión 3
Coccidiosis
(coccidiosis) Íleon Eimeria Lesión 3
Ceca Eimeria Lesión 2

Respiratorio Tráquea presencia de hemorragia 1 18


sistema Corazón hidropericardio 2
(respiratoria) Sacos de aire aerosaculitis 3

1 La puntuación máxima para el sistema representa los resultados teniendo en cuenta una observación de la puntuación de 3 para cada alteración, multiplicado por el factor de impacto (valor fijo para cada alteración) y se

suman en el final.

vellosidades por ave se evaluaron de forma proporcional a la distribución se incubaron con 100 a 500 μ L de anticuerpo CIFIC espe- primaria para
morfológica (fusionada y normal), en el objetivo de 10x (también se utiliza los macrófagos, CD4 +, o linfocitos CD8 + T-. Cada anticuerpo se colocó
para confirmar objetivo de 40X ciones alter-) de un microscopio óptico (Nikon en un portaobjetos rentes dife- y se lavó 3 veces con PBS. Los
Eclipse E200, Sao Paulo-SP-Brasil). Las muestras de hígado fueron portaobjetos se incubaron durante 30 a 60 min con el anticuerpo
evaluados en 5 campos por ave en objetivo de 10X. conjugado con HRP específico para el anticuerpo primario, a
continuación, la actividad de peroxidasa fue bloqueado utilizando el kit
Para el análisis inmunohistoquímico, las muestras se procesaron DAB para inmunocitoquímica (HRP-conjugado poco RAB- anti-Ig de
para CD4 +, CD8 + de linfocitos T, y el recuento de los macrófagos de ratón, Dako América del Norte, Carpinte- ria, CA, EE.UU.). Los
acuerdo con Louren Co et al. portaobjetos se contratiñeron con hematoxilina solución. Las células
( 2015 ). diapositivas Inmunohistoquímica Se horizontalmente colocaron marcadas se contaron en
en una cámara de incubación húmeda y
Aflatoxinas y COCCIDIOSIS SOBRE salud intestinal 1081

Tabla 2. ISI alteraciones histológicas evaluadas en el intestino y el hígado.

Organo alteraciones factor de impacto (FI) Puntuación máxima 1

Intestino espesor lámina propia 2 54


el espesor del epitelio 1
proliferación enterocitos 1
infiltración de células plasmáticas epitelial 1
infiltración inflamatoria mixta 3
en la lámina propia
proliferación Las células caliciformes 2
Congestión 2
Necrosis (cariolisis apical) 3
Presencia de ooquistes 3

Hígado Congestión 1 39
degeneración hidrópica 1
vacuolización celular 2

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la proliferación del conducto biliar 3
infiltración de células inmunes 1
pericolangitis 3
agregada linfocítica 2

1 La puntuación máxima representa los resultados teniendo en cuenta una observación de la puntuación de 3 para cada alteración,

multiplicado por el factor de impacto (valor fijo para cada alteración) y se suman en el final.

un microscopio óptico (100x objetivo aumentos). Se midieron cinco significa con sus errores estándar. Para correlación anal- Ysis, se utilizó el
campos por ave totalizando 25 campos por tratamiento de yeyuno e coeficiente de correlación de Pearson (r), y el software proporcionado la PAG-
hígado. valores.

Actuación
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Las aves se asignaron aleatoriamente a uno d ​de edad in der or- para obtener el
Aves desafiadas con Eimeria tenido altas puntuaciones de lesiones
peso corporal inicial medio igual por jaula. Las aves y el alimento se pesaron
cidiosis COC, observados principalmente en el intestino delgado medio, y
semanalmente (cero, 7, 14 y 21 d) para evaluar el consumo de alimento ( FI), ganancia
las aves no-desafió no presentó lesiones (Tabla 3 ). La puntuación ISI de
de peso corporal ( BWG), y la relación de conversión del alimento ( FCR). Todas las
GIT fue alta en las aves desafiadas con Eimeria. La aflatoxina no
aves cidos eutha- para tomar muestras de tejido, así como por otras causas de
estadística- mente afecta a ningún parámetro macroscópico evaluado, y no
mortalidad, se pesaron individualmente para la estimación de la conversión de
hubo interacción entre los factores en el análisis macroscópico. Aunque la
alimento corregido para la mortalidad y pollos retiradas.
aflatoxina podría causar alteraciones macroscópicas en diversos órganos y
especialmente en el hígado (Giambrone et al., 1985 ; Huff et al., 1986 ;
Pandey y Chauhan, 2007 ; Monson et al., 2015 ), No se observó diferencia
entre los grupos, que probable- mente podría estar relacionado con el nivel
de aflatoxina utilizado en el presente estudio. Según Dalvi y McGowan ( 1984
Análisis estadístico
) En condiciones experimentales, sólo los niveles de 10 ppm de aflatoxina
La unidad experimental para el rendimiento fue la jaula, y para otros fueron capaces de causar una diferencia significativa en el rendimiento del
análisis, el ave. Los datos fueron submit- ted a ANOVA y las medias pollo. Los pollos de engorde alimentados con un bajo nivel de aflatoxina
significativamente diferentes ( P < 0.05) se compararon usando la prueba (de 50 a 250 ppb) en condiciones experimentales
de Tukey al nivel de 5% de probabilidad utilizando el programa
estadístico Statistix 9 para Windows. Los datos se presentan como

Tabla 3. las puntuaciones macroscópicas ISI media y el error estándar en sistemas de diferentes tratamientos en 21 días de edad.

Tratamiento Locomotor Respiratorio otro GIT Intestino La coccidiosis Puntaje total

La aflatoxina No 1.7 0.0 4.7 6.6 0.4 13.5


Sí 2.2 0.2 3.6 6.4 1.5 14.0

Eimeria No 1.7 0.2 2.5 segundo 7.6 0.0 segundo 12.1


Sí 2.2 0.0 5.9 una 5.4 1.9 una 15.4
SEM 0.27 0.12 0.75 0.79 0.45 1.13

probabilidades
La aflatoxina (P 1) 0,403 0,337 0,369 0,874 0,143 0,835
Eimeria ( PAG 2) 0,403 0,337 0,016 0,172 0,022 0,192
Interacción (P 1 * PAG 2) 0,999 0,337 0,103 0,221 0,143 0,755

a, b Letras diferentes en la misma columna indican diferencias significativas ( P < 0,05).


1082 KRAIESKI ET AL.

Figura 1. ISI histológicos puntuaciones de alteración en el yeyuno (A) y el hígado (B) en diferentes grupos de 7, 14, y 21 días de edad. Las barras de error representan los errores estándar de

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la media. CONTRA: control, AFLA: aflatoxina B1, COC: Eimeria desafío, AFLA + COC: aflatoxina B1 y Eimeria reto.
a B C Letras diferentes indican una diferencia significativa ( PAG < 0,05). A, B Letras diferentes indican una diferencia significativa ( PAG < 0,05) en el factor de desafío coccidiosis.

no presentaron ningún lesiones macroscópicas en blanco or- Gans, pero Eimeria y el desafío de aflatoxinas en FI de 14 a 21 días. FI más alta
tenía cambios histopatológicos (Santin et al., se observó en el grupo alimentado con aflatoxinas y sin Eimeria, en
2003 ; Ortatatli et al., 2005 ). En figura 1 , Es posible observar la comparación con el grupo alimentado con aflatoxinas y Eimeria. No se
interacción entre COC y AFLA en yeyuno e histología hepática. diferencia fue ob- servido en grupos sin aflatoxina.

Eimeria desafío reduce FI y BWG y negativamente afectada FCR. BWG se vio afectada solamente por Eimeria reto. El grupo
FI era 11 y 12% menor en ria Eime- aves desafiadas de d de uno a 21 y desafiado tenía 20, 28, 17, 19, y 13% menor BWG en los períodos de
también de d 7 a 21, respectivamente, en comparación con el grupo no uno a 14, 7 a 14, uno a 21, 7 a 21, y 14 a 21 d, respectivamente, en
desafiado (Tabla 4 ). También había una interacción entre comparación con la no grupo desafiado (Tabla 5 ).

Tabla 4. El consumo de alimento (FI, gramos) media y el error estándar en diferentes períodos y tratamientos.

Tratamiento FI 1 a 14 d FI 7 a 14 d FI 1 a 21 d FI 7 a 21 d FI 14 a 21 d

La aflatoxina No 606 462 1120 1014 562


Sí 642 503 1178 1078 583

Eimeria No 608 461 1214 una 1114 una 601


Sí 640 504 1083 segundo 978 segundo 544
La aflatoxina Eimeria

No No 597 453 1143 1029 553 a, b


Sí No 620 469 1285 1199 648 una
No Sí 615 472 1096 998 570 a, b
Sí Sí 665 536 1071 957 519 segundo
SEM 15.3 16.4 30.1 33.0 18.4

probabilidades
La aflatoxina (P 1) 0,260 0,227 0,243 0,233 0,492
Eimeria ( PAG 2) 0,333 0,198 0,017 0,020 0,090
Interacción (P 1 * PAG 2) 0,673 0,457 0,103 0,062 0,034

a, b Letras diferentes en la misma columna indican diferencias significativas ( P < 0,05).

Tabla 5. el aumento de peso corporal (BWG, gramos) media y error estándar en diferentes períodos y tratamientos.

Tratamiento BWG 1 a 14 d BWG 7 a 14 d BWG 1 a 21 d BWG 7 a 21 d BWG 14 a 21 d

La aflatoxina No 332 224 658 588 370


Sí 338 223 663 582 356

Eimeria No 371 una 260 una 722 una 647 una 388 una
Sí 298 segundo 187 segundo 599 segundo 523 segundo 338 segundo
SEM 10.7 10.4 18.1 17.8 9.0

probabilidades
La aflatoxina (P 1) 0,520 0,939 0,774 0,721 0,320
Eimeria ( PAG 2) 0,001 0,001 0,001 0,001 0,003
Interacción (P 1 * PAG 2) 0,052 0,074 0,106 0,191 0,881

a, b Letras diferentes en la misma columna indican diferencias significativas ( P < 0,05).


Aflatoxinas y COCCIDIOSIS SOBRE salud intestinal 1083

Tabla 6. tasa de conversión alimenticia (FCR) media y el error estándar en diferentes períodos y tratamientos.

Tratamiento FCR 1 a 14 d FCR 7 a 14 d FCR 1 a 21 d FCR 7 a 21 d FCR 14 a 21 d

La aflatoxina No 1.84 2.10 1.70 1.73 1.53


Sí 1.95 2.39 1.78 1.85 1.64

Eimeria No 1.64 segundo 1.77 1.68 segundo 1.72 1.56


Sí 2.15 una 2.72 1.81 una 1.87 1.61
La aflatoxina Eimeria

No No 1.66 1.79 do 1.62 1.61 1.42


sim No 1.61 1.75 do 1.74 1.83 1.70
No Sí 2.01 2.42 segundo 1.79 1.85 1.65
Sí Sí 2.29 3.03 una 1.82 1.87 1.57
SEM 0.07 0.14 0.02 0.04 0.05

probabilidades

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La aflatoxina (P 1) 0,185 0,050 0,140 0,104 0,292
Eimeria ( PAG 2) 0,001 0,001 0,018 0,053 0,624
Interacción (P 1 * PAG 2) 0,064 0,027 0,383 0,163 0,077

C.A Letras diferentes en la misma columna indican diferencias significativas ( P < 0,05).

índice de conversión fue peor en Eimeria aves desafiadas en periodos período de infección. La ingesta de aflatoxina contami- nados dieta
de uno a 14 y de 1 a 21 d en comparación con el grupo no desafiado puede inducir broiler órgano linfoide impedi- ment, caracterizada por
(Tabla 6 ). Hubo una significativa y aflatoxina Eimeria desafiar interacción lesiones histológicas (Peng et al.,
de FCR del 7 al 14 d, cuando AFLA + COC tuvo el peor FCR en 2015 ). El presente estudio es de acuerdo con Peng et al. ( 2014 ), Que
comparación con otros tratamientos. Este fect EF- de la coccidiosis en el también observó un alto número de células CD8 + en los pollos alimentados
rendimiento podría estar asociada a la inflamación, lo que reduce el con dietas que contienen la aflatoxina, y baja CD4 +: CD8 +. células T CD8
consumo de alimento y aumenta las demandas de requisitos (Klasing, 2007 + desempeñan su papel protegiendo contra las células diana huésped
; Jang et al., 2010 ). El impacto más alto en FI era de 7 a 21 d y BWG era específicas que están comprometidas con la infección o la transfor- mación
del 7 al 14 d, que se asoció con la fase aguda de la respuesta inmunitaria oncogénico (Williams y Bevan, 2007 ; Prado-García et al.,
vinculada a la Eimeria ciclo (Allen y Fetterer, 2002 ). Como se describe en
estu- dios demás IES (Huff y Ruff, mil novecientos ochenta y dos ; Stoev et 2012 ). La aflatoxina que tiene efectos cancerígenos (Wogan,
al., 2002 ; Girgis et al., 1992 ; Wild et al., 2000 ), Y Eimeria como un agente infeccioso lular intracel-
podría estar relacionado con el aumento de la cantidad de células CD8 + en el
hígado y el yeyuno encontrado en el presente estudio.
2010 ; Ellakany et al., 2011 ), La aflatoxina tenía un EF-fect impulsar en la
coccidiosis en algunos períodos. Fue posible observar que en ación eva- histológico, en 7 días de
De acuerdo a los resultados, Eimeria eficacia desafío se verificó no edad, los grupos desafiados con ria (Eime- COC y AFLA + COC) tenían
sólo por el rendimiento, sino también por macroscópica (tabla 3 ), mayores alteraciones histológicas ISI en el yeyuno en comparación con
Inmunohistoquímica (Figura 2 ) E histológica (figura 1 ) Análisis. En el los grupos no desafiado (CON y Afla), principalmente a causa de la
huésped naive, CIDIA CoC-activa las células dendríticas y macrófagos presencia de infiltración inflamatorio mixto en la lámina propia ( MILP), la
locales al- diversas quimiocinas proinflamatorias guientes (Dalloul et al., 2003proliferación de células caliciformes, y el espesor de la lámina propia.
). Después de las infecciones primarias y secundarias con Eimeria, un Estas puntuaciones se correlacionan con un alto número de células
mayor porcentaje de CD8 + linfocitos T (Choi y Lillehoj, 2000 ) Y + inmunes en los grupos de COC en inmunohistoquímica. Podría estar
linfocitos T CD4 (Bessay et al., 1996 ) Se observa 8 días post infección asociada a la respuesta inflamatoria contra Eimeria, pero sólo la lámina
(Choi y Lillehoj, 2000 ), Pero la proporción de células CD8 + es alta espesor pria pro- tenía correlación estadística negativa con FCR (r = - 0,59),
(Rothwell et al., 1995 ). En el presente estudio, se observó un mayor y no hay correlación con FI y BWG se encontró (Tabla 7 ). La respuesta
número de macrófagos en el yeyuno y el hígado 4 d después del inflamatoria aguda induce anorexia en las aves, caracterizados por
desafío en AFLA + COC en comparación con otros grupos, y más alto menos de alimentación y el tamaño del cuerpo pequeño, especialmente
CD8 + células 11 d después de la exposición en COC y AFLA + COC observado en la primera d después de la exposición (Jiang et al., 2010 ).
en comparación con otros grupos . Para las células CD4 + a 7 d, se En la histología hepática en 7 d, el grupo AFLA + COC mostró el más
observó un número más bajo de este linfocito en el yeyuno y el hígado bajo ISI en comparación con otros grupos. A esta edad, las aves
cuando aflatoxina estaba presente (AFLA y AFLA + COC), en mostraron un alto fisiológica steato- sis debido a la absorción de la yema.
comparación con los grupos no suplementadas con aflatoxina (CON y Se observó que a esta edad podría ser difícil aplicar el ISI his- tología en
COC). El papel de las células CD4 + en coccidiosis podría implicar la el hígado, una vez que la vacuolización SI es no baja de alta en este
pro- ducción de citocinas solubles (Yun et al., 2000 ) Para in- pliegue o periodo (Figura 3 , F). También hubo ninguna correlación estadística entre
reducir la respuesta inmune de acuerdo con la el evaluado
1084 KRAIESKI ET AL.

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Figura 2. Los cambios en las subpoblaciones de células inmunes (macrófagos y CD4 + y CD8 + T-linfocitos teñidos por inmunohistoquímica) en el yeyuno y el hígado en diferentes grupos de
7, 14 y 21 días de edad. Las barras de error representan los errores estándar de la media. CONTRA: control, AFLA: aflatoxina B1, COC: Eimeria desafío, AFLA + COC: aflatoxina B1 y Eimeria reto.
aBC Letras diferentes indican una diferencia significativa ( PAG < 0,05).

parámetros en la histología hepática con los datos de rendimiento (Tabla 7 ). correlación estadística entre infiltración de células inmunes en el
hígado y BWG (r = - 0,72) y FCR (r = 0,58) a los 14 d, mostrando una
A los 14 d, la histología del yeyuno mostró que las aves desafiadas vez más el efecto inflamación en el rendimiento.
tuvieron mayor histológico ISI en comparación con el grupo de
no-desafió, debido a la presencia de ooquistes y MILP. Cuando se A los 21 d, en la histología yeyuno, aves desafiadas tenían
evaluó la correlación de la histología ISI con el rendimiento, una puntuaciones más altas debido a los oocistos (figura 3 ), Que se
correlación estadística negativa del espesor de la lámina propia, la correlacionan con las observaciones macroscópicas de lesiones
proliferación de terocytes en-, MILP, y la presencia de ooquistes con coccidiosis. A esta edad, la infiltración de células plasmáticas epitelial se
BWG (r = - 0,55, r = - 0,62, r = - 0.59, y r = - 0,76, respectivamente) y FCR correlacionó negativamente a FI (r = - 0,54) y BWG (r = - 0,65); MILP se
(r = 0,59, r = 0,52, r = 0,39, y r = 0,61, respectivamente) se observó. No correlacionó con la FCR (r = 0,62) y la presencia de ooquistes con BWG (r
se observó correlación con FI a 14 d (Tabla 7 ). Se esperaba que estos = - 0,74) y FCR (r = 0,67) (Tabla 7 ). Estos resultados sugieren que la
resultados ya que los parámetros histológicos están asociados a la movilización de las células inmunes podría afectar a los parámetros per-
inflamación (Lillehoj y la trucha, 1996 ) Y la presencia de parásitos. Formance. Otros parámetros histológicos, como el grosor epitelial,
células de los enterocitos se re ponsable para la absorción (Uni et al., 2003 enterocitos y células caliciformes prolif- ración se correlacionó
), Pero no totalmente per- haps lo suficientemente maduros para tener positivamente con FI (r = 0,56, r =
una re- lación positiva con el rendimiento. Sin embargo, más estudios se
deben hacer para evaluar la interacción entre la proliferación de 0.27, y r = 0,55, respectivamente) y BWG (r = 0,73, r = 0,51, y r = 0,68,
enterocitos y rendimiento de los animales. respectivamente). De hecho, el espesor lial epithe- podría estar asociada con
células caliciformes y la proliferación de enterocitos o células inflamatorias
infiltraciones ción. enterocitos son células de absorción, y como se observa en
14 d de la vida, su proliferación tiene una correlación diferente con el
En la histología hepática, Eimeria grupos desafiados tenían puntuaciones más rendimiento, lo que podría estar relacionada con las diferentes etapas de
altas como consecuencia de la infiltración de células inmunes y la congestión maduración de las células.
(Figura 3 , D) que se relaciona con los datos munohistochemistry im-. De hecho, el
hígado de las aves tiene un papel como tejido linfoide ectópico, sobre todo en el Las células caliciformes sintetizan y teins glycopro- mucina secretos que
comienzo de la vida (Ol' forman una capa de moco en el intestino delgado, y es importante para
ah y Valverde, 2008 ). Hay un punto negativo proteger y transportar los nutrientes
Aflatoxinas y COCCIDIOSIS SOBRE salud intestinal 1085

Tabla 7. coeficiente de correlación de Pearson (r) entre los parámetros evaluados en el análisis histológico ISI y Formance per- (FI, BWG y FCR 1
) en los diferentes períodos.

r para FI 2 r para BWG 2 r para FCR 2

análisis histológico ISI 7d 14 d 21 d 7d 14 d 21 d 7d 14 d 21 d

Los parámetros evaluados en el yeyuno:


espesor lámina propia - 0.44 0.29 0.05 0.41 - 0.55 * - 0.29 - 0.59 * 0.59 * 0.55 *
el espesor del epitelio 0.02 0.04 0.56 * 0.22 - 0.44 0,73 * - 0.11 0.42 - 0.34
proliferación enterocitos 0.00 0.00 0.27 0.25 - 0.62 * 0.51 * - 0.14 0.52 * - 0.41
infiltración plasma epitelial - 0,19 - 0.13 - 0.54 * - 0.11 0.11 - 0.65 * - 0.08 - 0.10 0.23
inflamatorio mixto - 0.24 - 0.08 - 0.07 - 0.05 - 0.59 * - 0.45 - 0.16 0.39 0.62 *
la infiltración de la lámina propia
proliferación Las células caliciformes - 0.36 0.21 0.55 * - 0.32 0.04 0.68 * - 0.13 0.09 - 0.27
Congestión - 0.12 - 0.12 0.46 0.41 - 0.20 0.45 - 0.32 0.08 - 0.04
Necrosis / cariolisis apical - 0.01 0.34 - 0.20 0.35 - - 0,19 - 0.04
Presencia de ooquistes - 0.10 0.00 - 0.37 - 0.17 - 0,76 * - 0.74 * 0.00 0.61 * 0.67 *

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Puntaje total - 0.39 0.08 - 0.01 0.13 - 0,72 * - 0.48 * - 0.39 0.62 * 0,78 *

Los parámetros evaluados en el hígado:


Congestión 0.09 - 0.03 - 0.14 - 0.21 - 0.75 * - 0.31 0,19 0.53 * 0.29
degeneración hidrópica 0,19 0.02 0.29 - 0.37 0.07 0.38 0.37 - 0.05 - 0.16
vacuolización celular 0.27 0.07 - 0.03 - 0.04 - 0.06 - 0.42 0.25 0.09 0.66 *
la proliferación del conducto biliar - 0.11 0.31 0.02 0.15 0.00 - 0.01 - 0,19 0.15 0.10
infiltración de células inmunes - 0.48 * 0.03 0.30 0.06 - 0,72 * 0.33 - 0.42 0.58 * - 0.10
pericolangitis - 0.11 0.09 - - 0.29 - 0.01 - 0.28 0.14
agregada linfocítica - 0.25 0.44 0.35 - 0.32 - 0.34 0.26 - 0.02 0.55 * 0.10
Puntaje total 0.27 0.27 0.13 - 0.26 - 0.43 - 0,19 0.37 0.48 0.57 *

* Indicar significativa correlación el coeficiente de Pearson ( P < 0,05).


1 FI: consumo de alimento; BWG: ganancia de peso corporal; FCR: el índice de conversión.
2 Para el análisis de correlación, se obtuvieron los parámetros de rendimiento en los períodos de 1 a 7, 1 a 14, y de 1 a 21 d, y los resultados histológicos se

evaluaron a los 7, 14 y 21 d, respectivamente.

Figura 3. Fotomicrografías de secciones teñidas con hematoxilina y eosina yeyuno de pollo y el hígado. Azul Alcian se utilizó para teñir las células caliciformes en el yeyuno. A) y D) muestran
estructura histológica normal del yeyuno grupo de control y el hígado, respectivamente (400X); B) muestra células de infiltración inflamatorias en la lámina propia (flechas) y mayor cantidad de células
caliciformes (círculo) (400X); C) muestra Eimeria oocistos (flechas negras - también observados en B) y el espesor de la lámina propia (flecha blanca) (200X). Estas alteraciones eran los más
estadísticamente correlacionados con los datos de rendimiento y contribuyeron al índice ISI más alta en grupos coccidiosis desafiado a 21 días de edad. E) muestra la presencia de inflamatorias (flechas)
y rojas de la sangre (círculos) células en el espacio intersticial de hígado de aves expuestas con Eimeria a los 14 días de edad (400X); F) muestra vacuolización de células (flechas) en el hígado de pollos
7 días de edad (200X).
1086 KRAIESKI ET AL.

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Figura 4. Correlación de yeyuno ISI alteraciones histológicas y ganancia de peso corporal (BWG) a 14 d (A) y 21 d (B).

entre el lumen y el cepillo de los enterocitos mem- brana frontera (Uni et al., 2003 Dalloul, RA, SA Lillehoj, TA Shellem, y JA Doerr. 2003.
). Existen diferencias en los tipos de mucina glicoproteínas sintetizadas a lo inmunidad de la mucosa mejorada contra Eimeria acervulina en ERS broil- alimentado
un probiótico a base de Lactobacillus. Pavipollo. Sci. 82: 62-66. Dalvi, RR, y C. McGowan.
largo del período de crecimiento (Shub et al., 1983 ). Más estudios sobre los
1984. inducción experimental de
tipos de mucina se debe hacer con el fin de mejor entenderían incluso la aflatoxicosis crónica en pollos por B1 purificada aflatoxina y su reversión por carbón
correlación entre la proliferación de células caliciformes ción y rendimiento vegetal activado, fenobarbital, y la reducción de tathione Glu-. Pavipollo. Sci. 63:
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de los animales.
Ellakany, HF, SS Abuakkada, SS Oda, y YS El-Sayed.
2011. Influencia de los bajos niveles de aflatoxinas en la dieta sobre las infecciones de Eimeria
Se observó en el análisis histológico del hígado que afla- toxina y Eimeria tenella en pollos de engorde. Trop. Anim. Prod salud. 43: 249-
desafío causó más lesiones (por ejemplo, vacuolización de células), 257.
Feng-Xian, W., X. Bin, H. Xiao-Fei, L. Shao-Yu, L. Fu-Zhu, S. can-
pero no hubo interacciones BE- tween estos factores. La vacuolización
Usted, J. Yu-Ping, y W. Lin-Yi. 2012. El efecto de amoníaco y la humedad en los
era la única rámetro pa- que mostró correlación negativa a FCR (r = gallineros en la morfología intestinal y funcyion de pollos de engorde. J. of Animal y
Vet. Avances. 11: 3641 hasta 3646. Gholamiandehkordi, AR, L. Timbermont, A.
0,66) (Tabla 7 ). Santin et al. ( 2002 ) Mostraron que las toxinas myco- pueden Lanckriet, W. Van
Den Broeck, K. Pedersen, J. Dewulf, F. Pasmans, F. Haesebrouck,
aumentar este cambio histológico en las aves y se asocia con el daño de los
R. Ducatelle, y F. Van Immerseel. 2007. La cuantificación de las lesiones intestinales en un
hepatocitos. modelo de enteritis necrótica subclínica. Pathol aviar. 36: 375-82.
Cuando los resultados histológicos ISI se correlacionaron con BWG
(Figura 4 ) y Eimeria reto, se observó que a los 14 y 21 d, el valor más alto ISI Giambrone, JJ, UL Diener, ND Davis, VS Panangala, y F.
J. Hoerr. 1985. Efectos de la aflatoxina en pavos y pollos para asar jóvenes. Pavipollo.
era de entre el grupo con el más bajo BWG (r = - 0,72 y r = - 0,48, respectiva-
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mente). Estos resultados sugieren la posibilidad de AP- metodología ISI Girgis, GN, JR Barta, CK Girish, NA Karrow, HJ Boer-
capas en la industria de aves de corral para eva- comió y correlacionar la Mans, y TK Smith. 2010. Efectos de las micotoxinas de Fusarium transmitida por los

salud intestinal con el rendimiento del animal. Sin embargo, son necesarios alimentos y un adsorbente de micotoxinas orgánica sobre la dinámica de las células
inmunes en el yeyuno de pollos infectados con Eimeria Max- ima. Veterinario. Immunol.
para ajustar el índice de ISI de acuerdo con los datos de correlación para los
Immunopathol. 138: 218-223. Gottardo, ET, K. Prokoski, D. Horn, AD Viott, TC Santos, y
parámetros de rendimiento de este estudio más estudios. En conclusión, el
índice tological el ISI his- aplica al yeyuno podría ser RELAClONADAS JIM Fernandes. 2016. La regeneración de la mucosa intestinal en Eimeria y E. coli pollos
pondiente a BWG y FCR mediante el Eimeria y los modelos de aflatoxinas. de engorde desafiados suplementadas con aminoácidos. Pavipollo. Sci. 95:
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