Biocatálisis Clase 5

CAAV9
CAAV10
Departamento de Ingeniería Bioquímica
CAAV11
Biocatálisis
Unidad 2: Cinética enzimática
Carlos Alvarez-Vasco, Ph.D.

Universidad Icesi, Cali-CO. Febrero 6, 2019
Diapositiva 1
CAAV9 Meta
Carlos Andres Alvarez Vasco; 8/08/2018
CAAV10 1. Establer Ecuaciones estequiometricas de velocidad (por especies):

CAAV11 2. Demostrar la Ecuacion Cinetica de Michaelis-Menten

Importancia Ejemplos Terminos Propiedades
Cronograma
 Laboratorio: Tienen introducción esta semana (P0), llevar los
elementos de protección personal.
 Examen Corto 2: En la clase 7, Miercoles 13 de Febrero (2019)

Nomenclatura (Unidad 1) y cinética enzimatica (Unidad 2).
2
Definiciones Cinética elemental Complejo E-S Cinética Enzimática
Guía del día.
 Unidad 2: Parametros de M-M
 Unidad 2: Que no me quedo claro hoy?
 Unidad 2: Actividad enzimática
 Cierre
3
Unidad 2: Cinética enzimática.

Reacciones enzimáticas simples
Suposiciones:
1. La formación del complejo E-S es un paso reversible, y P irreversible

2. La liberación del producto de la enzima es instantáneo (E-P).
3. Suposicion del estado cuasi-estacionario (QSS)
4. La cantidad de enzima total no cambia (E0 no cambia).
4
Ecuaciones estequiometricas de velocidad (por especies):
5
Suposición del estado cuasi-estacionario (QSS):
5.
6
Balance de masa para la enzima (suponemos que no cambia E0):
[E]+[E-S] [E]= -[E-S]
Reemplazando en ecuación 5
−[E−S])
− [E−S]
7
− [E−S]
8
[ ]
(multiplico por inversa)
[ ]
Reemplazo en Ecn 4.
9
Depende de la cantidad de enzima !

Note que
Independiente de la cantidad de enzima, es una propiedad
10
La constante de Micahelis ( )
Es una mezcla entre las constantes
de reacción que describen la
formación y la disociación del
complejo E-S
11
Cuando >>
(Primer orden respecto a la concentración de enzima)

(Orden cero respecto al sustrato)
Cuando
(Primer orden respecto al sustrato)

12
Son los parámetros que indican que tan bien una

enzima reaccionara con un sustrato particular.
13

Como se derivo la ecuación de M-M
14
15
Cat M
Refleja tanto afinidad como la capacidad catalítica, es útil para:

• Comparar diferentes enzimas entre ellas.
• Comparar la misma enzima con diferentes sustratos.
El máximo teórico para la constante de especificidad es 109 s−1M−1

(Pilas con las unidades)
• Cada colisión resulta en catálisis.
• La velocidad de formación de producto no esta limitada por la
velocidad de reacción sino por la velocidad de difusión.
16
17
18
La ecuación de MM es la base para la mayoría de las cinéticas enzimáticas

simples (un solo sustrato)
One minute paper: Que no me quedo claro hoy?
En el foro de la clase (moodle), escriba por lo menos un

concepto, o idea que no le quedo claro en la clase de hoy.
El comentario debe estar el proximo domingo
10 de Febrero (1pm).
Ver foro en Moodle.
19
Actividad Enzimática: concepto y

medición
a  f  pH , T , FI  [Ecuación 1.1]
[Ecuación 1.2]
S  P E
dP dS
v    [Ecuación 1.3]
dt dt v Velocidad de reacción
dP dS = Velocidad de formación de producto y consumo

, de sustrato 20
dt dt
Actividad como máximo potencial

catalítico
 dP   dS 
a  v t 0      [Ecuación 1.4]
 dt  t 0  dt  t 0
La Unión Internacional de Bioquímica (UIB) definió la Unidad

Internacional de actividad (UI), como la cantidad de enzima necesaria
para catalizar la transformación de un micromol de sustrato por
minuto en condiciones ambientales definidas, es decir; concentración de
sustrato saturante, pH y temperatura óptimos.
Experimentalmente se mide el cambio en la concentración de sustrato,
producto o cofactores contra el tiempo. Se emplea para ello diferentes
técnicas 21
Actividad enzimática
Nombre Definición Símbolo Dimensiones
Cantidad de enzima katal (kat) Mol /s
que convierte 1 mol de
Actividad sustrato/ s
enzimática Cantida de enzima que UI
convierte 1 µmol
sustrato /min
Actividad Unidades de enzima UI/volumen UI/mL
enzimática por unidad de volumen Katal/volume Katal/mL
volumétrica n
Actividad Unidades de enzima UI/proteína UI/mg proteína
enzimática por proteína Katal/proteína Katal/mg
especifica proteína
22
CAAV3
CAAV4
Actividad enzimática
La capacidad catalítica o actividad es una propiedad esencial de cada enzima.
E1
Concentración de producto
E2
E3
E4
23
Departamento de Ingeniería Bioquímica Tiempo
Diapositiva 23
CAAV3 Indicar en esta diapositiva que lo que esta cambiando es la concentracion de Enzima E1>E2>E3>E4
CAAV4 Esta grafica permite ver a que concentracion de enzima se debe llevar a cabo el ensayo enzimatico, es decir: E4

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Carlos Alvarez-Vasco, Ph.D.

CAAV10 1. Establer Ecuaciones estequiometricas de velocidad (por especies):

CAAV11 2. Demostrar la Ecuacion Cinetica de Michaelis-Menten

 Examen Corto 2: En la clase 7, Miercoles 13 de Febrero (2019)

Guía del día.

 Unidad 2: Parametros de M-M

 Unidad 2: Que no me quedo claro hoy?

 Unidad 2: Actividad enzimática

Unidad 2: Cinética enzimática.

1. La formación del complejo E-S es un paso reversible, y P irreversible

Unidad 2: Cinética enzimática.

Ecuaciones estequiometricas de velocidad (por especies):

Unidad 2: Cinética enzimática.

Suposición del estado cuasi-estacionario (QSS):

Unidad 2: Cinética enzimática.

Balance de masa para la enzima (suponemos que no cambia E0):

[E]+[E-S] [E]= -[E-S]

Unidad 2: Cinética enzimática.

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Unidad 2: Cinética enzimática.

Depende de la cantidad de enzima !

Independiente de la cantidad de enzima, es una propiedad

Unidad 2: Cinética enzimática.

Unidad 2: Cinética enzimática.

(Primer orden respecto a la concentración de enzima)

(Primer orden respecto al sustrato)

Unidad 2: Cinética enzimática.

Son los parámetros que indican que tan bien una

Unidad 2: Cinética enzimática.

Unidad 2: Cinética enzimática.

Unidad 2: Cinética enzimática.

Refleja tanto afinidad como la capacidad catalítica, es útil para:

El máximo teórico para la constante de especificidad es 109 s−1M−1

Unidad 2: Cinética enzimática.

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La ecuación de MM es la base para la mayoría de las cinéticas enzimáticas

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En el foro de la clase (moodle), escriba por lo menos un

Ver foro en Moodle.

Actividad Enzimática: concepto y

dP dS = Velocidad de formación de producto y consumo

Actividad como máximo potencial

La Unión Internacional de Bioquímica (UIB) definió la Unidad

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