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En el metabolismo, el NAD+
, y puede ser usado como agente reductor para donar electrones. Las reacciones de
transferencia de electrones son la principal función del NAD+
, que también se emplea en otros procesos celulares, siendo el más notable su actuación como
sustrato de enzimas que adicionan o eliminan grupos químicos de las proteínas en las
modificaciones postraduccionales. Debido a la importancia de estas funciones, las enzimas
involucradas en el metabolismo del NAD+
puede ser sintetizado a partir de biomoléculas sencillas como los aminoácidos de triptófano o
ácido aspártico. Como alternativa, se pueden obtener componentes más completos de la
coenzima a partir de los alimentos, como la vitamina llamada niacina. Asimismo, se conocen
compuestos similares que provienen de las reacciones que descomponen la estructura del NAD+
. Estos componentes preformados pasan entonces a través de un camino de rescate que los
recicla de nuevo a la forma activa. Parte del NAD+
1 Historia
4 Biosíntesis
5 Funciones
5.1 Oxidorreductasas
6 Farmacología
7 Referencias
8 Enlaces externos
Historia
NAD+ , según el modelo de bolas y varillas. NADH, según el modelo de bolas y varillas.
La coenzima NAD+
fue descubierta por los bioquímicos británicos Arthur Harden y William Youndin en 1906.2
Notificaron que al adherir extracto de levadura hervido y filtrado, se aceleraba en gran medida la
fermentación alcohólica en extractos de levadura sin hervir. Cofermento fue como ellos llamaron
al factor no identificado responsable de este efecto. A través de una larga y dificultosa
purificación a partir de extractos de levadura, el sueco Hans von Euler-Chelpin identificó a este
factor termoestable como un nucleótido de azúcar fosfato.3 En 1936, el científico alemán Otto
Heinrich Warburg demostró la función de la coenzima nucleótida en la transferencia de hidruro e
identificó la porción de nicotinamida como el sitio de las reacciones redox.4
En 1938, fue identificada una fuente de nicotinamida cuando Conrad Elvehjem purificó niacina
procedente del hígado y demostró que esta vitamina contenía ácido nicotínico y nicotinamida,5
y luego, en 1939, proporcionó la primera evidencia sólida de que la niacina era usada para
sintetizar NAD+
.6 A principios de la década de 1940, Arthur Kornberg realizó otra importante contribución para
el avance hacia la comprensión del metabolismo del NAD+
Finalmente, en 1959, Jack Preiss y Philip Handler descubrieron los intermediarios y enzimas
involucrados en la biosíntesis de NAD+
Las funciones no redox del NAD y el NADP son un reciente descubrimiento.11 La primera de
estas funciones en ser identificada fue el uso del NAD+
y NADP+
en la comunicación celular; tales como la acción de ADP-ribosa cíclica, que fue descubierta en
1987.13 El metabolismo del NAD+
sigue siendo hoy en día un área de intensa investigación, con un mayor interés después de que
en el año 2000 Shinichiro Imai y unos colaboradores, descubriesen en el Instituto Tecnológico de
Massachusetts las llamadas sirtuinas; proteínas deacetilasas dependientes de la NAD+
.14
Propiedades físicas y químicas
El dinucleótido de nicotinamida adenina, al igual que todos los dinucleótidos, está formado por
dos nucleótidos unidos por un par de grupos fosfato que actúan como puente. Dichos
nucleótidos consisten en dos anillos de ribosa: uno con adenina unida al primer átomo de
carbono (en la posición 1') y otro con nicotinamida en la misma posición. La porción de
nicotinamida se puede unir con dos orientaciones distintas a su átomo de carbono anomérico.
Debido a estas dos posibles estructuras, el compuesto existe como dos diastereoisómeros, de los
cuales el diastereoisómero β-nicotinamida de NAD+
es la forma que se encuentra en los organismos. Estos nucleótidos se unen juntos por un puente
de dos grupos fosfato a través de los carbonos de la posición 5'.11
RH
2 + NAD+
→ NADH + H+
+R
Desde el par de electrones de hidruro se transfiere un electrón al nitrógeno con carga positiva
del anillo de nicotinamida del NAD+
y el NADH es -0.32 voltios, lo cual hace al NADH un fuerte agente reductor.16 La reacción es
fácilmente reversible cuando el NADH reduce otra molécula y es re-oxidada a NAD+
. Esto significa que esta coenzima puede permanecer continuamente en un ciclo entre sus
formas de NAD+
En apariencia, todas las formas de esta coenzima son polvos blancos amorfos que son
higroscópicos y altamente solubles en agua.17 La forma sólida es estable si se conserva seca y en
la oscuridad. Las soluciones de NAD+
Tanto la NAD+
como el NADH absorben fuertemente en la banda ultravioleta debido a la base de adenina. Por
ejemplo, el pico de absorción del NAD+
se sitúa en una longitud de onda de 259 nanómetros (nm), con un coeficiente molar de
absorción de 16.900 M−1cm−1. Mientras que el NADH tiene una absorción de ultravioleta de
339 nm con un coeficiente molar de absorción de 6.220 M−1cm.19 Esta diferencia en la
absorción de espectros ultravioleta entre la forma oxidada y la reducida de la coenzima a más
altas longitudes de onda hace que sea simple el medir la conversión de una a otra forma
mediante ensayos enzimáticos, midiendo la cantidad de absorción de rayos UV a 340 nm a través
de un espectrómetro.19
y la NADH.
El NAD+
en el citosol de la célula es más difícil de medir, con estimaciones recientes en células animales
que están en torno a un rango de 0,3 mM,2425 y aproximadamente de 1,0 a 2,0 mM en
levaduras.15 Sin embargo, más del 80% está unido a proteínas, así que la concentración en
solución es mucho más baja.26
Los datos sobre otros compartimentos celulares son limitados, aunque en la mitocondria la
concentración de NAD+
/NADH. Esta proporción es un componente de lo que se llama estado redox de una célula, una
medición que refleja tanto las actividades metabólicas como la salud de las células.28 Los
efectos de la proporción NAD+
/NADH son complejos, pues controlan la actividad de varias enzimas claves, incluyendo la
gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa y la piruvato deshidrogenasa. En los tejidos sanos de
mamíferos la estimación de la proporción entre la NAD+
/NADH total es mucha más bajo, con rangos estimados de 0,05 a 4.31 Por contra, la proporción
de NADP+
/NADPH está normalmente alrededor de 0,005, así que el NADPH es la forma dominante de esta
coenzima.32 Estas distintas proporciones son la clave para los diferentes roles metabólicos del
NADH y el NADPH.
Biosíntesis
El NAD+
se sintetiza a través de dos rutas metabólicas: ya sea una ruta de novo a partir de aminoácidos,
o en rutas de rescate mediante el reciclado de componentes preformados como la nicotinamida
convertida de nuevo en NAD+
Producción de novo
se convierten en NADP+
.35 En la mayoría de los organismos, esta enzima utiliza ATP como fuente del grupo fosfato,
aunque en algunas bacterias, como la Mycobacterium tuberculosis y algunas arqueobacterias
hipertermofílas como la Pyrococcus horikoshii del género Pyrococcus, usan polifosfatos
inorgánicos como un donante alternativo de fosforilo.3637
Rutas de rescate
de novo a partir de aminoácidos precursores simples, las células también rescatan compuestos
preformados que contienen nicotinamida. Aunque se conocen otros precursores, los tres
compuestos naturales que contienen el anillo de nicotinamida y son usados en estas rutas
metabólicas de rescate son el ácido nicotínico (Na), la nicotinamida (Nam) y la nicotinamida
ribósido (NR).38 Los precursores se introducen en la ruta biosintética de NAD(P)+
A pesar de la presencia de la ruta de novo, las reacciones de rescate son esenciales en los seres
humanos; una carencia de niacina en la dieta provoca la enfermedad de déficit vitamínico
conocida como pelagra.41 Esta elevada exigencia de NAD+
resulta del constante consumo de la coenzima en reacciones tales como las modificaciones post-
traduccionales, ya que el ciclado del NAD+
entre las forma oxidada y reducida en las reacciones redox no cambia en nada los niveles
generales de la coenzima.15
Las rutas de rescate utilizadas en microorganismos difieren de las usadas en mamíferos.42 Por
ejemplo, algunos agentes patógenos, como la levadura Candida glabrata y la bacteria
Haemophilus influenzae son auxótrofos de NAD+
, pero poseen rutas de rescate y por ende son dependientes de fuentes externas de NAD+
o de sus precursores.4344
Funciones
Oxidorreductasas
Cuando el NAD+
están formados por dos pares de pliegues de Rossmann, con cada pliegue uniendo un nucleótido
del cofactor.50 Sin embargo, este pliegue no es universal entre las enzimas dependientes de
NAD, ya que se ha descubierto recientemente que una clase de enzimas bacterianas
involucradas en el metabolismo de los aminoácidos se une a la coenzima, pero carecen de este
motivo.51
transfiriendo deuterio en lugar de hidrógeno. En este caso, una enzima puede producir uno de
los dos estereoisómeros de NADH. En algunas enzimas, el hidrógeno se transfiere desde arriba
del plano superior del anillo de nicotinamida; estas son llamadas oxidorreductasas de clase A,
mientras que las enzimas de clase B transfieren el átomo desde abajo.52
A pesar de esta similitud en la forma en que las proteínas se unen a las dos coenzimas, las
enzimas casi siempre muestran un alto nivel de especificidad, ya sea por el NAD+
o el NADP+
.53 Esta especificidad refleja las distintas funciones metabólicas de las respectivas coenzimas, y
es el resultado de diferentes series de residuos de aminoácidos en los dos tipos de sitio de unión
a la coenzima. Por ejemplo, en el sitio activo de las enzimas dependientes de ADP, se forma un
enlace iónico entre la cadena lateral de un aminoácido básico y el grupo fosfato ácido del NADP+
. Sin embargo, hay algunas pocas excepciones a esta regla general, y enzimas como la aldosa
reductasa, Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6FD), y la metilentetrahidrofolato reductasa
pueden utilizar ambas coenzimas en algunas especies.54
Las reacciones redox catalizadas por oxidorreductasas son vitales en todo el metabolismo, pero
dentro del proceso de estas reacciones es de particular importancia la liberación de energía a
partir de los nutrientes, donde los compuestos reducidos, como la glucosa, se oxidan, liberando
de este modo energía, que es transferida al NAD+
mediante la reducción hacia el NADH, como parte de la glucolisis y el ciclo de Krebs. En células
eucariotas, los electrones transportados por el NADH que se produce en el citoplasma por
glucolisis, son transferidos al interior de la mitocondria (para reducir el NAD+
/NADH que permite a esta coenzima actuar como agente oxidante y agente reductor. En
contraste, la función principal del NADH es la de agente reductor en el anabolismo, estando la
coenzima implicada en rutas como la biosíntesis de ácidos grasos y la fotosíntesis. Puesto que el
NADPH es necesario para conducir las reacciones redox como un fuerte agente reductor, la
proporción NADP+
Funciones no redox
La coenzima NAD+
se consume también en las reacciones de transferencia de ADP-ribosa. Por ejemplo, las enzimas
llamadas ADP-ribosiltransferasas añaden el grupo ADP-ribosa de esta molécula a las proteínas,
en una modificación postraduccional llamada ADP-ribosilación.62 La NAD+
puede ser también adherida dentro del ARN celular como una modificación de base.63 La ADP-
ribosilación implica ya sea la adición de un solo grupo ADP-ribosa; en mono-ADP-ribosilación, o
la transferencia de ADP-ribosa a las proteínas en cadenas largas ramificadas, que es llamada
poli(ADP-ribosil)ación.64 La mono-ADP-ribosilación se identificó por primera vez como el
mecanismo de un grupo de toxinas bacterianas, particularmente la toxina colérica, pero también
se involucra en la comunicación celular normal.6566 La Poli(ADP-ribosil)ación es llevada a cabo
por las poli(ADP-ribosa) polimerasas.6467 La estructura de la poli-(ADP-ribosa) está implicada en
la regulación de varios eventos celulares, y es la más importante en el núcleo celular, actuando
en procesos como la reparación del ADN y el mantenimiento del telómero.67 En adición a estas
funciones dentro de la célula, se ha descubierto recientemente un grupo de ADP-
ribosiltransferasas extracelulares, pero sus funciones permanecen en duda.68
Esta coenzima actúa también dentro de la comunicación celular como precursora de la ADP-
ribosa cíclica; que se produce a partir de NAD+
por ADP-ribosil ciclasas, siendo la coenzima un segundo mensajero.69 Esta molécula actúa en la
señalización de calcio liberando calcio de las reservas intracelulares.70 Esto lo realiza abriendo y
enlazando a una clase de canales de calcio llamados receptores de rianodina, que se encuentran
localizadas en las membranas de los orgánulos como el retículo endoplasmático.71
El NAD+
también es consumido por las sirtuinas, que son deacetilasas dependientes de NAD, como la
Sir2.72 Estas enzimas actúan transfiriendo un grupo acetilo de sus proteínas sustrato al grupo
ADP-ribosa del NAD+
; esto rompe la coenzima y libera nicotinamida y O-acetil-ADP-ribosa. Las sirtuinas más que todo
parecen estar implicadas en la regulación de transcripción genética a través de histonas
desacetilantes y la alteración de la estructura del nucleosoma.73 Sin embargo las proteínas no
histonas pueden ser así mismo desacetilizadas por las sirtuinas. Estas actividades de las sirtuinas
son particularmente interesantes debido a su importancia en la regulación del
envejecimiento.74
Otras enzimas dependientes de la NAD incluyen las ADN ligasas bacterianas, que unen dos
extremos del ADN usando NAD+
como un sustrato para donar un grupo de adenosín monofosfato (AMP) al fosfato 5' de un
extremo de ADN. Este intermediario es entonces atacado por el grupo hidroxilo 3' del otro
extremo de ADN, formando un nuevo enlace fosfodiéster.75 Esto contrasta con las ADN ligasas
eucariontes, que utilizan ATP para formar el intermediario ADN-AMP.76
Farmacología
.78
La coenzima NAD+
podrían ser específicos de una enzima es sorprendente.84 No obstante, esto podría ser posible:
por ejemplo, los inhibidores basados en los compuestos ácido micofenólico y tiazofurina inhiben
la IMP deshidrogenasa en el lugar de unión de la NAD+
. Las sirtuinas son un blanco particularmente interesante para estos fármacos, puesto que la
activación de estas desacetilasas dependientes de NAD aumentan la longevidad.86 Los
compuestos tales como el resveratrol aumentan la actividad de estas enzimas, que pueden ser
importantes dada su capacidad de retrasar el envejecimiento tanto en organismos modelo de
vertebrados como de invertebrados.878889
entre organismos tan distintos como bacterias y humanos, esta área del metabolismo resulta
prometedora para el desarrollo de nuevos antibióticos.9091 Por ejemplo, la enzima
nicotinamidasa, que convierte la nicotinamida en ácido nicotínico, es un blanco para el diseño de
fármacos, puesto que esta enzima está ausente en humanos, pero presente en hongos
unicelulares y en bacterias.42